Ríos Flavio Nicolás

Biología II
Trabajo Práctico Nº4
“Cuantificación del crecimiento celular (Tubidimetría)”
Introducción
El método colorimetrico independientemente de cual sea su tipo consiste en la
determinación de la presencia cualitativa de un analito mediante el estudio de la
dispersión que forma el disolvente.
Cuando un haz de luz monocromática, de longitud de onda no absorbible choca
contra las partículas de una sustancia que está en suspensión, cambia la dirección de
propagación del haz de luz (en realidad sólo cambian de dirección algunos fotones del
haz). Este efecto es usado para determinar la presencia de un analito en suspensión ya
que ese cambio de dirección del haz y de su intensidad depende de muchos factores que
una vez relacionados y cuantificados permiten obtener los valores buscados.
En primer lugar hay que tener en cuenta que la longitud de onda de la radiación
incidente, transmitida y dispersada son iguales.
En segundo lugar la determinación de la concentración de partículas en suspensión
puede ser determinada midiendo la disminución de la Energía radiante incidente al
atravesar la cubeta o midiendo la radiación dispersada a un ángulo determinado. La
elección del método depende de la concentración de la suspensión. Si la concentración es
alta se medirán las energías radiante incidente y la transmitida, es lo que se conoce como
turbidimetría.
La turbidimetría puede realizarse en espectrofotómetros de visible o violeta.
Cuando la concentración de partículas en suspensión se mide por turbidimetría, la
suspensión se pone en una cubeta, que permite realizar las medidas de las energía
incidentes y transmitidas. Si ponemos en la cubeta suspensiones coloreadas se debe
usar un filtro para evitar que influya sobre los resultados dando valores excesivamente
altos. Los turbidímetros pueden incorporar cualquier detector que sea sensible a la
longitud de onda transmitida.

Objetivos:
• Conocer y distinguir los distintos metodos analiticos para la cuantificacion de
crecimiento celular (Conteo de colonias en medio solido, Turbidimetria).
• Evaluar el crecimiento bacteriano de E. Coli por Turbidimetria.

Material:
• Cultivo de E. Coli en fase exponencial.
• Erlenmeyers / botellas de cultivo.
• Caldo Luria Bertani (LB).
• Tubos Eppendorf.
• Gradilla para tubos eppendorf.
• Micropipetas.
• Tips Esteriles.
• Espectrofotometro, cubetas.
• Baño Termostatizado.

Métodos-Procedimientos:

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 Ríos Flavio Nicolás

1. Largar un Cultivo en medio LB utilizando como inoculo conocido el cultivo

previamente crecido
2. Realizar una dilucion 1/20 con un volumen final de 50 ml
3. Pipetear 0,5 mL de volumen del cultivo inoculado y medir a una Longitud de onda
de 600 nm
4. Colocar el Cultivo a 37º C con agitacion
5. Medir cada 30 min. En absorbancia
6. Graficar abosorbancia en funcion del tiempo
7. comparar con el metodo del T.P. Anterior

Resultados:
Horario Agitacion (I) No Agitacion (II)
0 0,000 0,000
30 0,044 0,034
60 0,098 0,073
90 0,163 0,125
240 0,327 0,266
270 0,312 0,251
Hemos tomado resultados del turno tarde, hemos medido la Densidad Optica de un cultivo
con agitacion y otro sin agitacion. Procedimos a realizar los graficos.
0,350 0,300
f(x) = 1,72x + 0,02
0,300 f(x) = 1,4x + 0,01
R² = 0,97 0,250
R² = 0,97
0,250
0,200
0,200
0,150
0,150
0,100
0,100
0,050
0,050
0,000
0,000 00:00:00 01:12:00 02:24:00 03:36:00 04:48:00
00:00:00 01:12:00 02:24:00 03:36:00 04:48:00

(I) (II)

Conclusiones:
En este trabajo aprendimos de como es el manejo de la turbidimetria y el manejo de
aparatos como el espectrofotometro, en la cuantificacion del crecimeinto de bacterias.
Con respecto a el último dato de la densidad óptica dió muy parecido al anterior
cuando paso medio hora de tiempo lo que da cuenta de que podriamos haber pasado de
una fase exponencial a una fase estacionaria en donde el número de células que son
producidas iguala al número de células que mueren se establece un equilibrio dinámico
en el cual no existe un mayor crecimiento puede deberse a un agotamiento de algún
nutriente.
En referencia a la experiencia tambien podemos decir que la DO es proporcional a la
cantidad de celulas que crecen para la E. Coli 1OD = 10 8 Células / mL asi que para cada
absorbancia media podemos sacar la relacion de la cantidad de celulas por mL.

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 Ríos Flavio Nicolás

Bibliografia:
Brock, Biología de los Microorganismos - Autor: Michael T. Madigan, John M. Martinko
Publisher: Pearson Educacion
Hans G. Schlegel, Microbiologia General – Omega
http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioRecuento.htm
http://www.psa.es/webesp/projects/solarsafewater/documents/libro/02_Capitulo_02.pdf
Vogel, Arthur Quimica Analitica Cualitativa Volumen II Editorial Kapelusz.

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