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son excitados por la luz, pasando a una órbita de mayor energía, y cuando vuelven a su
estado de reposo, liberan parte de esta energía en forma de luz. La diferencia entre
ambos fenómenos es que en la fosforescencia la liberación de energía por medio de
fotones sucede con retraso, aún cuando la fuente estimulante ya no está presente, al
contrario de la fluorescencia, en el cual la liberación de fotones es casi inmediata a su
absorción.
Fosforimetría
Los fenómenos de luminiscencia molecular son aquellos en los que tiene lugar la
absorción de energía por parte de la molécula y un proceso posterior de emisión de
radiación electromagnética en el que intervienen, básicamente, los estados electrónicos
moleculares excitados y fundamentales. Dichos fenómenos de luminiscencia se clasifican
según la fuente de excitación o forma de generar la energía que excusa en:
fotoluminiscencia (fluorescencia y fosforescencia).
- Efecto de la temperatura
- Atenuación de fotoluminiscencia
En las escalas de tiempo relativas a muchos procesos físico- químicos que ocurren en
la naturaleza, la fosforescencia tiene una vida media bastante larga lo cual permite
que otros proceso compitan con ella para la desactivación del estado triplete excitado
más bajo.
INSTRUMENTACIÓN
Fuentes: En la mayoría de las aplicaciones se necesita una fuente más intensa que las lámparas de
volframio o de deuterio utilizadas para la medida de absorción. Esto se debe, como quedó
demostrado con anterioridad a que la magnitud de la señal de salida, y por tanto la sensibilidad, es
directamente proporcional a la potencia de la fuente P0. Normalmente se utiliza una lámpara de
arco de xenón o de mercurio.
Filtros y monocromadores: En los fluorímetros se utilizan tanto los filtros de interferencia como los
de absorción, mientras que los espectrofluorímetros están equipados con monocromadores de
red.
Detectores: La señal de fluorescencia típica es de baja intensidad, por tanto, se necesitan factores
de amplificación altos para estas medidas. Los tubos fotomultiplicadores son los más utilizados
como detectores en instrumentos de fluorescencia sensibles.
Cubetas: Para medidas de fluorescencia se utilizan tanto cubetas cilíndricas como rectangulares
fabricadas con vidrio o más normalmente con sílice.