Planta piloto fermentación

Procesos industriales de cultivo de células, tejidos y microorganismos.

Problemas de la experimentación y la formación a escala piloto de organismos, células de
mamíferos, células vegetales y tejidos.

Fermentación microbiana
Problemas de contaminación y ampliación de escala con la fermentación de Aerobios
sumergidos.
1. Mejoras de presión
2. Optimización de la composición media y condiciones: oxígeno para ph y temperatura
de las actividades metabólicas.
3. Selección de modo operativo para el proceso de cultivo.
4. Medición de modo operativo para el proceso de cultivo,
5. Modelización y formulación de estrategias de control de procesos.
6. Fabricación de sensores, biorreactores y otros.

Planta piloto de fermentaciones.

Las bacterias, hongos, levaduras o actinomicetos tienen aminoácidos fabricados, ácidos
nucleicos, enzimas, ácidos orgánicos y alcoholes.
Fermentación y escalado
I. Biorreactores y técnicas de cultivo
II. Tecnologías para la detección de la fermentación.
III. Propia ampliación

Biorreactores y técnicas de cultivo para procesos microbianos

Recipientes de cultivo y reactores utilizando biocatalizadores o plantas y tejidos animales.
Tabla 1 Clasificación de los sistemas de fermentación aeróbica
A) REACTORES MECÁNICOS INTERNOS DE AGITACIÓN
1. Instalación de turbina estimulante
2. Vaso agitado con tubo de aspiración
3. Vaso agitado con tubo de succión
B) REACTORES DE CIRCULACIÓN EXTERNA
1. Aireador de chorro de agua
2. Aireador de chorro de agua forzado
3. Reciclaje del aireador con disco filtrado
C) COLUMNA DE BURBUJAS Y REACTORES DE AIRE
1. Columna de burbujas con disco filtrado
2. Columna de burbujas con un tubo de aspiración para el flujo de giro
 3. Reactor de elección de aire
4. Reactor de ciclo de presión
5. Sistema de placa de tamiz en cascada

Tabla 2. Clasificación de los procesos de fermentación.

1. Proceso por lotes
2. Proceso Fed-batch (semi-batch)
3. Proceso de alimentación discontinua repetida
4. Proceso de alimentación discontinua
5. Proceso continuo

Tabla 3. Clasificación de los procesos Fed-Batch en la fermentación.

1. SIN CONTROL DE RETROALIMENTACIÓN
a) Alimentación discontinua intermitente
b) Tasa de alimentación constante
c) Exponencialmente alimentado por lotes
d) Alimentación optimizada de lotes
2. CON CONTROL DE RETROALIMENTACIÓN
a) Control indirecto
b) Control directo
 Control de punto de ajuste
 Programa de control
 Control óptimo

Tabla 4. Clasificación de procesos continuos de fermentación

1. SIN CONTROL DE RETROALIMENTACIÓN
a) Quimiostato
2. CON CONTROL DE RETROALIMENTAIÓN
a) Turbidostato
b) Nutriastat
c) Fauxostato
Selección de equipamiento en fermentación
Selección de equipos de fermentación: Biorreactor de laboratorio a escala de diseño.
Biorreactor capaz de:
 Producción aséptica durante largos periodos de tiempo.
 Cumplir con las regulaciones locales de contención.
 Seguimiento y control de Ph por adición de ácido/base o por adición de CO2/base.
 Mezclar de manera que el cultivo permanezca en suspensión.
 Regulación de la temperatura.
 Capacidad de muestreo estéril.

Tipos de biorreactores
 STR (Reactor de tanque agitado). Recipiente con un sistema de mezcla conducido
típicamente a través de la placa frontol.
 Fermentadores de torre. Vasos caracterizados por un alto diámetro de altura. Se airean
mediante gas a través de un simple roceador. Operados continuamente.
 Fermentadores Airlift. Flujo constante de gas en tubo ascendente.
 Cámara de Fibra hueca. Crecer células dependientes de anclaje, un haz de fibras y
las células crecen dentro de los espacios capilares adicionales. ECS. Actúa como
biorreactor de perfusión.

 Microportadores o microacarreadores.
En un tanque agitado. Son perlas de Sepodex DEAE de grado cromatográfico. Son perlas
cargadas positivamente, son atraídas por células animales cargadas negativamente.

 Vapor de acero inoxidable en lugar de sistemas.

Recipiente de acero tiene un suministro de vapor canalizado para que la esterilización ocurra
in situ, capacidad de aplicar presión, para mejorar la velocidad de transferencia de oxígeno.
El vapor suministrado debe estar libre de partículas y aceite a Temperatura Estéril 121ºC.

 Biorreactores de un solo uso.

Reemplazado por una bolsa, de múltiples capas y cumple con todo los criterios para un
producto en contacto con un producto biológicos.
Aspectos de la construcción.
Materiales de construcción
El material de construcción se selecciona sobre la base de que muestra las siguientes
propiedades físicas: debe ser químicamente inerte, como que no filtra elementos en el medio
o elementos quelatos (principalmente metales iones) del medio. Siempre que los materiales
de construcción cumplan estos requisitos.
Entonces la elección del material para el biorreactor es dictada por la escala en la cual el
proceso es de ser operado, el propio proceso y las consideraciones económicas. Este requisito
para el material de construcción para ser químicamente inerte, además de ser de sentido
común, es también un requisito reglamentario, según lo establecido por la FDA
(Administración de Alimentos y Medicamentos) y MHRA (Agencia Reguladora de
Productos de Medicina y Salud) donde el equipo se está utilizando para la fabricación de un
producto medicinal o de diagnóstico.

Tabla 1. Función de los componentes de acero inoxidable 316 L.

Componente Contenido % Función
Acero 65
Cromo 16-18 Resistencia a la corrosión
Niquel 12-14 Mejora la formabilidad y la
ductilidad
Molibdeno 2-3 Mejora la resistencia al cloro
Carbón 0.03 maximo Reduce la sensibilización,
que es la precipitación de
carbono durante la
soldadura.

Cualquier tipo de sistema, ya sea vidrio, acero o plástico, debe ser validable, es decir,
cualquiera de las afirmaciones del fabricante en relación con el pH, control de temperatura,
mezcla y transferencia de O2.
La capacidad debe ser soportada por un protocolo de validación documentado. En tal
protocolo, todos los criterios de rendimiento reivindicados se evalúan frente a dispositivos
de medición independientes, que a su vez están calibrados contra estándares internacionales
reconocidos. Todo este trabajo está documentado y los registros almacenados. Solo cuando
un sistema está completamente validado puede ser utilizado en la producción de cualquier
producto que se utilizará como medicamento o como parte de un ensayo clínico.
Consideraciones de ubicación
El sistema debe colocarse en un entorno adecuado para su uso. Por esto se entiende que la
sala elegida como la ubicación del fermentador debe tener instalaciones de contención
adecuadas de modo que el funcionamiento del sistema no suponga una amenaza para la salud
de quienes trabajan con él o los que trabajan en el mismo edificio.

Utilidades
La ubicación debe tener servicios públicos adecuadamente especificados, típicamente
energía eléctrica, refrigerados, agua, aire, oxígeno, nitrógeno o dióxido de carbono, y
posiblemente, en el caso de pequeña escala sistemas de vapor en el lugar (SIP), vapor en el
volumen, presión y temperatura correctos.

Tamaño de la autoclave
Una consideración importante y que se puede pasar por alto fácilmente al especificar un
sistema, es el tamaño de la autoclave disponible. También se debe considerar el tipo de
autoclave, y las implicaciones de manejo manual de un sistema de carga frontal o superior,
especialmente cuando se trata del extremo superior de los volúmenes en discusión aquí.
Lejos de todo esto es el uso de una polea o un sistema de elevación para cargar el recipiente
en la autoclave. Las restricciones impuestas por la necesidad de usar una autoclave son una
razón para usar un vapor en sistema de lugar.

Diseño básico
Casi todos los buques a pequeña escala, independientemente de si son de vidrio o acero, por
ejemplo; para uso en mamíferos o bacterias, comparta un diseño de vaso básico consistirán
de una placa de cabeza que es plana, paredes de vasos rectos y una base hemisférica. Esto da
bien características de mezcla sin crear fuerzas de corte excesivas. Donde el acero inoxidable
y los sistemas de vidrio comienzan a diferir en la construcción de las paredes del recipiente.
Dos opciones existen para los sistemas de vidrio, sin camisa y con camisa, y ambos se
relacionan con la temperatura está controlada. El sistema más simple y barato, sin chaquetas,
se basa en un resumen cinta calentadora o equivalente para suministrar calor al sistema; El
calor puede ser removido por tener un intercambiador de calor situado dentro del recipiente.
La pared del vaso está construida de una sola capa de vidrio.
La segunda opción cuando se usan recipientes de vidrio es tener un recipiente con camisa
por lo que el buque tiene una cubierta exterior rellena de agua. El agua realiza la temperatura.
Regulación tanto por la entrada de calor como por la eliminación. La temperatura del agua
está regulada por un circulador térmico externo

Configuración del proceso

La configuración exacta de un biorreactor generalmente es impulsada por el proceso. Estos
procesos pueden ser desglosado en tres grupos principales.

 Proceso por lotes

El más simple de todos, el recipiente se prepara, se inocula y el proceso se deja correr.
Normalmente, una fermentación discontinua de la línea celular de mamíferos duraría unos
pocos días o hasta una semana y densidades celulares de 2 × 106 cel/ml Se pueden lograr.
(1 × 108–1 × 109 puede ser logrado en una fermentación de E.coli). El proceso se detendrá
cuando se agote un nutriente clave o se acumulan productos metabólicos de desecho. Este
proceso requerirá, en términos de hardware, la cantidad mínima. El sistema usualmente
requerirá oxígeno disuelto, pH, temperatura y mezcla de control y monitoreo. La capacidad
para tomar muestras también debe estar disponible.
Sin comprometer la esterilidad del proceso. Este tipo de fermentador será el más sencillo.
y por lo general el más barato para comprar. La mayoría de los vendedores de fermentadores
hacen simples básicos.
Sistemas de vidrio sin camisa que son adecuados para cultivos por lotes sencillos.

Fed Batch

El lote de alimentación es un proceso ligeramente más sofisticado, donde se prepara el barco

inoculado, pero en lugar de dejar que el proceso se ejecute hasta que un nutriente clave haya
sido completamente utilizado, se agregan nutrientes concentrados a lo largo del tiempo. Un
proceso de cultivo de células de mamíferos puede durar de 7 a 14 días, se lograrán densidades
celulares ligeramente más altas 3–4 × 106 a pesar de que la viabilidad final de las células será
típicamente <50%, ya que habrá una acumulación de material citotóxico en el vaso a partir
de células que se han lisado. En términos de hardware, el fed-batch es el proceso requiere
todo lo que un proceso por lotes requiere junto con una bomba de alimentación, que puede o
no ser controlado por un paquete de software. Si está bombeando medio en un buque sería
aconsejable garantizar un método de detección de nivel para garantizar que el buque nunca
se llena demasiado. La etapa de alimentación por lotes de estos procesos suele ir precedida
de un clásico fase del lote con la transición al lote alimentado antes de que se produzca el
agotamiento de los nutrientes.

Ingeniería de los reactores

“El reactor es el corazón de cualquier proceso de fermentación o conversión enzimática. El
diseño de biorreactores es una tarea complicada, basada en principios científicos y de
ingeniería y en muchas reglas empíricas. Los aspectos específicos del reactor y su operación”
1.Configuración del reactor.
2.Tamaño del reactor
3.condiciones del proceso dentro del reactor
4.Modo de operación
El diseño influye directamente con el rendimiento del proceso. Aun no existen
procedimientos sencillos o estándar para el diseño de ractores que cubran todos los aspectos
del recipiente y de su operación.
Ingenieria de los reactores
El primer punto es plantear objetivos sencillos, en la industria es importante maximizar
beneficios. Al final el reactor es un reflejo de todos los requisitos y necesidades que se tienen.

Coste total e producción

Fermentación/ Recuperación del Administración y

Investigación y
reacción producto marketing
desarrollo

Materiales

Salarios
Materiales de Operación del
partida biorreactor Servicios

Depreciación

Salarios

Servicios

Depreciación

Uno de los puntos importantes de ingeniería de biorreactores es la mejora del rendimiento

global del proceso. Se observa que ciertos productos son de un elevado precio por que son
difíciles de controlar y reproducir así elevando su costo beneficio.
Los costes de partida a veces están determinados por el proceso especifico los elevados costos
son por el material como el medio de cultivo y no tanto por los costes energéticos. Ya que al
producir la materia prima no se tienen rendimientos altos con metabolitos de alto interés, en
cambio cuando hay metabolitos de bajo interés que tienen altos rendimientos porque el coste
baja.
Por otro lado, a veces en la producción de células hay límites físicos por lo que la
concentración es del orden 200kg de peso seco por m3, también las enzimas tienen una
máxima concentración en solución por lo que depende directamente de la enzima y la mezcla
de reacción. El rendimiento máximo está delimitado por los principios termodinámicos y
estequiométricos.
Configuraciones del biorreactor
El tanque cilíndrico, con o sin agitación, es el reactor más utilizado en bioprocesos. Sin
embargo, existe una gran cantidad de configuraciones de fermentadores. Continuamente se
desarrollan nuevos biorreactores para aplicaciones específicas tejidos animales,
biocatalizadores, células vegetales y enzimas. Una parte muy importante en el diseño de un
biorreactor es si en microorganismo es aerobio o anaerobio puesto que en los anaerobios el
diseño se simplifica porque no tiene entrada de oxígeno al reactor.
Tanques agitados
En la fig.1 se muestra un típico biorreactor agitado y aireado. La mezcla y dispersión de las
burbujas se alcanza mediante agitación mecánica, lo que requiere gran cantidad de energía.

Figura 1. Fermentador de tanque agitado.

El fermentador generalmente se llena hasta un 80% de su capacidad por si existe alguna

espuma o gotas de arrastre por gas. La formación de espuma es un problema por lo que hay
que instalar un separador de espuma una solución más a este problema es utilizar agentes
antiespumantes en el medio no siempre se utilizan ya que reducen la trasferencia de oxígeno.
El control de temperatura está dado por las serpientes de refrigeración que se observan en la
fig.1, los fermentadores agitados se utilizan para reacciones con enzimas libres e
inmovilizadas, así como para el cultivo de células en suspensión e inmovilizadas.
Columna de burbujas
Otras alternativas al reactor agitado son aquellos que no utilizan agitación mecánica. Como
su nombre lo dice columna de burbujas se utiliza una inyección de gas con la cual alcanza la
agitación y la aireación. Este proceso requiere menos energía que la agitación mecánica.
Algunos ejemplos industriales son la producción de levadura, cerveza y vinagre.
Su diseño es simple generalmente es un recipiente cilíndrico con alturas superiores al doble
del diámetro. Tienen un difusor para la inyección de aire comprimido. Las ventajas de un
biorreactor de columna de burbujas son sus bajos costes, ausencia de partes móviles y buen
rendimiento de trasferencia de materia y de trasmisión de calor.
Existen diferentes tipos de flujos dependiendo el caudal del gas, el diseño del difusor y el
diámetro de columna. Un flujo homogéneo se produce a caudales bajos y las burbujas
ascienden con la misma velocidad por lo que no existe remezcla, un flujo heterogéneo es el
cual las velocidades de las burbujas no son la misma se tiene siempre a altas velocidades
llamado también flujo caótico.

Figura 2. Columna de burbujas

Reactor de tiro o corriente de aire
Al igual que las columnas de burbujas en los reactores de tiro de aire la mezcla se produce
sin agitación mecánica.
Los reactores de tiro de aire se utilizan a menudo para cultivos de células animales y
vegetales.
Existen varios tipos diferentes de reactores de tiro de aire. La diferencia principal son las
corrientes de flujo de líquido están definidas debido a la separación física de las corrientes
ascendentes y descendentes.

Figura 3. Configuraciones más comunes de corrientes de aire.

Los rendimientos de los reactores de tiro de aire están relacionados con la construcción en
las variaciones ente chimenea y base del reactor. Los reactores altos de circulación interna
construidos bajo tierra se denominan reactores de pozo profundo. La elevada presión
hidrostática existente en el fondo d dichos reactores mejora la trasferencia de materia gas-
liquido.
Principales tecnologías de fermentación
Un equipo de investigación dirigido por chaim weizmann en gran bretaña (1914-1918)
desarrolló un proceso para la producción de acetona mediante una fermentación líquida
profunda con clostridium acetobutylicum que llevó al uso eventual de la primera casos de
fermentación aséptica a escala.

La contaminación, particularmente con bacteriófagos, fue a menudo un problema grave,

especialmente durante la primera parte de una etapa de producción a gran escala.
Inicialmente, no se disponía de instalaciones adecuadas y los intentos con fermentadores de
alcohol equipados con tapas no eran satisfactorios, ya que la esterilización por vapor no podía
lograrse a presión atmosférica. Se construyeron grandes recipientes cilíndricos de acero con
partes superiores e inferiores semiesféricas que podrían esterilizarse con vapor a presión.

Dado que se habían reconocido los problemas de adiciones asépticas de medios o inóculos,
se tomaron medidas para diseñar y construir tuberías, juntas y válvulas en las que se pudieran
lograr y mantener condiciones estériles cuando fuera necesario. Aunque los recipientes de
semillas más pequeños se agitaron mecánicamente, los recipientes de producción grandes no
se agitaron, y los grandes volúmenes de gas producidos durante la fermentación agitaron
continuamente el contenido del recipiente. Por lo tanto, se acumuló una experiencia
considerable en la construcción y operación de este proceso anaeróbico aséptico para la
producción de acetona-butanol.

Los primeros fermentadores aeróbicos a gran escala verdaderos se utilizaron en europa

central en la década de 1930 para la producción de levadura comprimida. Los fermentadores
consistían en grandes tanques cilíndricos con aire introducido en la base a través de redes de
tuberías perforadas. En modificaciones posteriores, se usaron impulsores mecánicos para
aumentar la velocidad de mezcla y para romper y dispersar las burbujas de aire. Este
procedimiento condujo a la la reducción de presión y mezclado.
Deflectores en las paredes de los vasos evitaron que se formara un vórtice en el líquido.
Incluso en este momento se reconoció que el costo de la energía necesaria para el aire
comprimido con maíz podría ser del 10 al 20% del costo total de producción. Ya en 1932,
strauch y schmidt patentaron un sistema en el que los tubos de aireación estaban provistos de
agua y vapor para limpiar y esterilizar.

Etanol, glicerol, ácido acético, ácido cítrico, otros ácidos orgánicos y enzimas. Estos procesos
utilizaron entornos altamente selectivos, como condiciones ácidas o anaerobias o el uso de
un sustrato inusual, lo que da como resultado que la contaminación sea un problema
relativamente menor en comparación con la fermentación con acetona o las posteriores
fermentaciones con antibióticos aeróbicos.

Estudios iniciales de agitación en tanques agitados desconcertados para identificación de

variables también fueron reportadas en este momento por la función principal de un
fermentador es proporcionar un ambiente controlado para el crecimiento de microorganismos
o células animales, para obtener un producto deseado. En el diseño y construcción de un
fermentador se deben tener en cuenta varios puntos:

1.El buque debe poder ser operado asépticamente durante varios días y debe ser Confiable
en la operación a largo plazo y cumplir con los Requisitos de las normas de contención.
2. Se debe proporcionar una adecuada aireación y agitación para cumplir con los requisitos
metabólicos del microorganismo. Sin embargo, la mezcla debe.No causar daño al organismo.
3. El consumo de energía debe ser lo más bajo posible.
4. Se debe proporcionar un sistema de control de temperatura.
5. Debe proporcionarse un sistema de control de pH.
6. Deben proporcionarse instalaciones de muestreo.
7. Las pérdidas por evaporación del fermentador deben. No sea excesivo.

8. El buque debe estar diseñado para requerir el uso mínimo de mano de obra en operación,
cosecha limpieza y mantenimiento.

9. Idealmente, el buque debería ser adecuado para un rango de procesos, pero esto puede ser
restringido porque de las normas de contención.

10. El buque debe ser construido para asegurar Superficies internas lisas, utilizando
soldaduras en lugar debidas de juntas siempre que sea posible.

11. El recipiente debe ser de geometría similar a embarcaciones más pequeñas y más grandes
en la planta piloto o planta para facilitar la ampliación.

12. Los materiales más baratos que permiten satisfactorios se deben utilizar los resultados a
alcanzar.
13. Deben existir disposiciones de servicio adecuadas para el mantenimiento.

Logrado en un medio nutriente homogéneo. El tipo de sistema de aireación-agitación usado

en un determinado factor depende de las características de la fermentación.

Proceso de cesión en consideración. Si bien los aireadores de burbujas finas sin agitación
mecánica tienen la ventaja de menores costos de equipo y energía, la agitación se puede
prescindir solo cuando la aireación proporciona "suficiente agitación, es decir, en procesos
donde los caldos de puedan mezclarse

Aeración y agitación
La aireación y la agitación se considerarán en detalle en el capítulo 9. En este capítulo, se
debe indicar que el objetivo principal de la aireación es proporcionar microorganismos en
cultivos sumergidos con suficiente oxígeno para los requisitos metabólicos, mientras que la
agitación debe asegurar que se obtenga un uniforme. Suspensión de células microbianas es a
aireación de los recipientes es suficiente para producir turbulencias altas, pero una columna
alta de líquidos requiere una mayor entrada de energía en la producción de aire comprimido.
Los componentes estructurales del fermentador involucrados en la aireación y agitación son:
(a) el agitador (impulsor).
(b) glándulas agitadoras y rodamientos.
(c) deflectores
(d) el sistema de aireación (rociador).

El agitador (impulsor) el agitador es necesario para lograr una serie de fluidos a granel y en
fase gaseosa, dispersión de aire, transferencia de oxígeno, transferencia de calor, suspensión
de partículas sólidas y mantenimiento de un entorno uniforme en todo el contenido del
recipiente. Debería ser posible diseñar un fermentador para lograr estas condiciones.

Los agitadores pueden clasificarse como turbinas de disco, discos perforados, turbinas
abiertas de paso variable y hélices. La turbina de disco consta de un disco con una serie de
paletas rectangulares colocadas en un plano vertical alrededor de la circunferencia y el disco
de paletas tiene una serie de paletas rectangulares unidas verticalmente al lado inferior. El
aire del rociador golpea la parte inferior del disco y se desplaza hacia las paletas donde las
burbujas de aire se rompen en burbujas más pequeñas. Las paletas de una turbina abierta de
paso variable y las cuchillas de una hélice marina están unidas directamente a una
protuberancia en el eje del agitador. En este caso, las burbujas de aire no golpean inicialmente
ninguna superficie antes de la dispersión por las paletas o las aspas.

Siempre que la velocidad del agitador sea lo suficientemente alta, se producirá una buena
dispersión de gas en caldos de baja viscosidad. También se ha demostrado que se obtienen
eficiencias de transferencia de oxígeno similares a la misma potencia de entrada por unidad
de volumen, independientemente del tipo de agitador.
En los caldos de alta viscosidad, la dispersión de gas también se produce en las cavidades
llenas de gas que se arrastran detrás de las cuchillas giratorias, pero esto no es suficiente para
asegurar una mezcla satisfactoria de todo el contenido del recipiente. Cuando las cavidades
son de tamaño máximo, el impulsor parece estar girando en una bolsa de gas desde la cual se
produce poca dispersión real en el resto del recipiente.