Mecanismos de Metástase e Angiogênese
Marco Antonio Arap
INTRODUÇÃO
O termo câncer compreende uma vasta coleção de pato-
logias com comportamentos di versos que dependem de vá-
rios fatores como sítio primário, condição clínica e imunoló-
gica do paciente e histologia do tumor, entre outros. Uma vez
estabelec ido o diagnóstico de câncer, torna-se imperati vo o
estadiamento e a caracterização histopatológica do tumor,
uma vez que o tratamento e o prognóstico irão depender di-
retamente desses fatores .
Alterações no genoma de uma específica população ce-
lular resultam em defeitos nos diversos mecanismos de con-
trole da homeostase celular. Devido à complexidade dessa
regulação, não é surpreendente que oncogenes e genes su-
pressores sejam descritos para quase todos os circ uitos
regulatórios do ciclo celular. como apoptose (ex. TP53, BCL-
2 e BAX) , comunicação celular (ex. caderi nas e integrinas),
estabilidade genética (ex. telomerase) e resposta inflamatória
(ex. ciclo-oxigenase 2). Essas alterações genéticas resultam.
em última instância, na formação de um microambiente tu mo-
ral e peritumoral, cujo funcionamento é dependente da cons-
tante comunicação celular parácrina e autócri na (inter e intra-
celular, respectivamente).
Apesar dos recentes avanços nas várias áreas do conhe-
cimento que envolvem o diagnóstico e o tratamento de tumo-
res malignos. a terapia anticâncer convencional ainda baseia-
se, principalmente, na possibilidade de ressecção cirúrgica e
na eficácia das diversas modalidades de tratamento adj uvante
e neo-adjuvante, que variam de acordo com cada tipo de tu-
mor. O microambiente tumoral também influencia significati-
vamente a resposta das células ao tratamento, portanto de-
termina diretamente a eficácia da terapia antitumoraJI 2•
Duas das principais características dos tumores malignos
são a capacidade de divisão celular, que resulta num cresci-
Renata Pasqualini
Wadih Arap
mento do volume do tumor, e a capacidade de invasão de te-
cidos adjacentes e a distância (esta última denominada mc-
tástase). Todos os eventos que envolvem a gênese, o desen-
volvimento e crescime.nto dos tumores e a sua capacidade de
invasão local e a distância ocorrem simultaneamente e são
interl igados por complexos mecanismos moleculares, muitos
ainda por serem esclarecidos. Portanto, para o desenvol vi-
mento de terapias anticâncer mais eficazes, tanto para a doen-
ça localizada quanto para a doença metastática, faz-se neces-
sário um melhor entendimento dos mecanismos mQleculares
que regulam a biologia dos tumores.
Aqui, descrevemos os mecanismos da angiogênese e da
formação de metástases, dois dos eventos que mais caracte-
rizam os tumores malignos. Esses dois fenômenos estão di-
retamente relacionados e serão discutidos separadamente,
apenas com o objetivo de facilitar o entendimento.
ANGIOGÊNESE
H ISTÓRICO
O desenvolvimento e a proliferação das células durante
o crescimento normal e fisiológico dependem diretafuente do
adequado suprimento de oxigênio e de fatores de crescimen-
to, além da retirada de resíduos tóxicos que poderiam com-
prometer a sobrevida celular. Já em 1955, Tomlison verificou
que a difusão radial do oxigênio em tecidos sólidos ocorre
em apenas 150 a 2ÜÜJ..lm a partir dos capilares. Sem adequa-
do suprimento vascular, além desse limite ocorre a morte ce-
lular5. Da mesma follT!a que na organogênese e em situações
de anabolismo fisiológico, por exemplo, durante o processo
da cicatrização, a expansão tumoral depende.da proliferação
de vasos e capilares, conhecida como angiogênese. Desde
meados da década de 1940, quando Coman e Sheldon 7 espe-
97
 cularam sobre a proliferação celular a pat1ir da observação de
hiperemia ao redor de tumores implantados em camundon-
gos, a angiogênese tem sido ativamente estudada por vári-
os grupos. Um dos primeiros estudos, realizado em melano-
mas, permitiu a classificação da vascularização em dois prin-
cipais tipos de vasos: os que supriam apenas a periferia do
· tumor, associados à freqüente necrose central observada em
tumores de crescimento rápido, e vasos que pareciam pene-
trar a intimidade do tumor, responsáveis pela real vasculari-
zação da intim idade do tumor. Posteriormente, a análise de-
talhada da ul tra-estrutura revelou a existência de três tipos
principais de vasos: os derivados de capilares, com paredes
delgadas; os sinusóides, desti tuídos de endotélio e recober-
tos por células tu morais, e finalmente v:1sos maduros, de apa-
rência normaiJ7
A partir do início da década de 1970, quando a direta re-
lação entre angiogênese e crescimento tu moral foi propos-
ta 15·16, muitos trabalhos confirmaram a angiogênese como
condição fundamental para o crescimento tanto do tumor pri-
mário quanto das metástases dele originadas. Em 1974, Liotta
e coi.~J concl uíram que o desprendi mento, a embolização e a
dissemi nação celula res são eventos subseqüentes à vasc u-
larização do tumor primá1io. Estudos mais recentes relaciona-
ram a mielossupressão decorrente de quimioterápicos como
a doxorrubicina à supressão da angiogênese 36, suportando o
conceito de que tumores usufruem de mecanismos homeos-
táticos para o próprio desenvolvimento.
O conhecimento sobre a fi siopatologia e os mecanismos
da angiogênese tem, portanto, avançado muito durante as
últimas seis décadas. No entanto, importantes questões ain-
da permanecem sem resposta, como por exemplo estágios na
evolução dos neovasos que poderiam ser utilizados como al-
vos em terapias anticâncer.
MECANISMOS MOLECULARES DA ANGIOGÊNESE
O processo da angiogênese inicia-se com a formação de
brotos originados de células endoteliais de microvasos capi-
lares que proliferam, migram e penetram o estroma do tecido,
em geral na direção da fonte originári a das moléculas deter-
minantes do processo. Posteriormente, os brotos capilares se
desenvolvem e se transformam em capilares madurosL'. A in-
dução da angiogênese é mediada por inúmeros fatores pro-
venientes ta nto de células tu morais quanto não tumorais,
como, por exemplo, células endoteliaisu, linfócitos-T26 , mas-
tócitosJ0, macrófagos 35 ·H e suas citocinas21. Muitos fatores
derivados dessas e de outras células são conhecidos, como
o fator de necrose tumoral a (TNF-a.), a interleucina 8 (IL-8),
endotelinas, angiotropinas e moléculas pertencentes à famí-
lia dos fatores de crescimento de fibroblastos (FGF), dos fato-
res de crescimento epidérmico (EGF), dos fatores de crescimen-
to de endotélio vascular (VEGF) e dos fatores de crescimento
endotelial derivadQ de plaquetas (PDGF), entre outros.
Algumas das características mais importantes dos vaso?.
formados na angiogênese tumoral, diferentes ·da vasculatu-
ra resultante da angiogênese fis iológica do crescimento e da
cicatrização são: a presença de um maior número de fenestra-
ções intercelulares, a associação anormalmente fro uxa entre
98
pericitos e o endotélio tumoraF9 e a expressão significati va ele
marcadores que são inex istentes ou quase indetectáveis no
endotélio de vasos sanguíneos nonnais 33·J 1, como av-integri-
nasJ·5 e receptores para certos fatores de crescimento". Es-
sas diferenças fazem com que: I) o interstício tumoral seja
mais acess ível a tnoléculas e células ci rculantes e 2) o cnclo-
télio tu moral possa ser-usado como alvo parã terapi a tumor-
específica.l·1931 . De fato, novas modalidades de tratamento
anticâncer, dirigidas de acordo com as características mole ~
culares expressas nas células tumorais e em seu endotélio,
foram avaliadas em modelos animais, a ]XIl1ir da utilização ela
tecno logia de apresentação de bacteriófagos (P//(fge
disp/ay) .
Bacteriófagos (ou simplesmente fagos) pertencem a um
grupo de vírus bacterianos com fi ta única ele DNA envol ta
dentro ele um longo capsídeo protéico cilíndrico (Fig. 9.1). A
classe Ff de f:1gos é a mais estudada e os fagos pertencen-
tes a essa classe utilizam a ponta do pilo como receptor, por-
tanto infectam especificamente E. coli que contém o plasmí-
deo F. Bacteriófagos não promovem a morte da bactéria hos-
pedeira, e durante a infecção ocorre a replicação ela fita de
DNA vira!, resultando na formação de uma nova fi ta ún ica de
DNA.
A tecnologia de apresenwção de fagos foi descrita em
1985 41 e inicial mente desenvolvida para o mapeamento de sí-
tios de ligação de anticorpos através do estudo da interação
de bibliotecas de fagos que expressam peptídeos randomiza-
dos com imunoglobulinas i mobil izad:1s~ . Essa tecnologia tor-
0
nou-se uma potente ferramenta par:1 o estudo de interações
protéicas-19·J 1e é comumente utilizada para a seleção de pep-
tídeos, anticorpos e proteínas recombina ntes capazes de li-
gação específica in vitro31 . Uma de suas grandes vantagens
é a capacid:1de de detectar a dispon ibilidade de receptores
nos tecidos não só baseando-se em sua expressão, como
t:1mbém nà·acessibil id:1de a um probe circulante. A constru-
ção da bi bl ioteca de fagos consiste na fusão e expressão de
polipeptídeos randomizaclos na proteína de superfície piii
de bacteriófagos filamentosos M 13. Bibli otecas com enor-
me variedade ele permutações (até 109 polipeptídeos) podem
ser expressas na superfície das partículas ele fago, permi -
tindo o estudo de interações específicas entre esses pep-
tídeos e seus receptores em cul tura de célul:1s e tecidos in
vitro. O estudo do painel consiste basicamente nos seguin-
tes passos:
exposição ela bibl ioteca ele fagos-peptídeos à proteí-
na em questão;
remoção dos fagos não ligados;
recuperação e propagação dos fagos ligados através
da infecção bacteri:1na;
sucessivos rounds são normal mente re:1lizados para a
obtenção da seleção ele peptídeos que se ligam à pro-
teína em questão.
A utilização in vivo dessa tecnologia foi inicialmente des-
crita em 1996.1-l, quando peptídeos com afinidade seletiva pelo
endotélio do rim e do cérebro fora m identificados em· animais
de experimentação. A seleção in vivo (Fig. 9.2) consiste in i-
cialmente na injeção endovenosa ela biblioteca de f:1gos -no
animal de experimentação (usualmente o camundongo), devi-
Fig. 9.1 - Estrutura do bacteriófago. As proteinas que constituem o fago estão apontadas (setas). A proteina p/11 é o sítio mais co-
mum para a apresentação de peptídeos.
damente anestesiado. Os fagos devem permanecer circulan-
do por cinco a 10 minutos e o camundongo é então perfun-
dido com solução salina tamponada com fosfato ou meio de
Dulbecco modificado (DMEM) através de cateter inserido no
ventrículo esquerdo. Deve ser realizada secção completa da
veia cava inferior, para permitir a drenagem do líquido de per-
fu são. Após a perfusão, os órgãos de interesse são recupe-
rados, pesados e homogeneizados. Após três lavagens com
DMEM, os fagos que apresentaram ligação específica e não
foram retirados na lavagem são recuperados através de infec-
ção do homogeneizado com solução contendo E. co/i em
fase de multiplicação logarítmica. Após a infecção, diluições
seriadas da solução são pipetadas em placas de Petri , con-
tendo LB/agar e antibióticos apropriados. O resto da cultura
bacteriana permanece em incubadora por aproximadamente 12
horas (usualmente durante a noite). No dia segui nte, a quan-
tificação da afinidade dos fagos é realizada pela contagem
das colônias bacterianas nas placas de Petri em relação aos
órgãos de interesse. Os fagos são precipitados da cultu ra
bacteriana que permaneceu em crescimento e utilizados para
os sucessivos rounds da seleção in vivo. Geralmen te, três
rounds são suficientes para a seleção de fagos-órgão e tu-
mor-específicos, no entanto outros rounds podem ser reali-
zados. Após o enriquecimento desejado do conj unto de
fagos para um certo órgão ser obtido, aproximadamente 50
clones dos últimos dois rounds de selação são seqüencia-
dos. Essas seqüências são comparadas entre si para a iden-
tificação de peptídeos semelhantes. Uma observação comum
é que a mesma seqüência de tri peptídeos que apresenta a afi-
nidade pelo órgão em questão aparece situada dentro de di-
ferentes fagos recuperados. A selelividade dos clones é en-
tão validada pela comparação individual da sua capacidade
de ligação a outros órgãos e também da ligação de um fago
que não contém peptídeo32 .
Esse estudo foi o primeiro passo na seleção e identifica-
ção de marcadores endoteliais. Desde então, a identificação
de pares receptores/ligantes foi descrita para vários tecidos
murinos, como rim, pulmões, pele, pâncreas, intestinos, úte-
ro, adrenal, retina e músculos. O processo de seleção in vivo
traz consigo desafios devido à grande quantidade de variá-
veis que nele estão envolvidas. Apesar dessas dificuldades,
o método apresenta importames vantagens. Primeiro, peptí-
deos expressos no fago são identificados através de avalia-
ção funcional, que deve ser específica e ultrapassar os me-
canismos naturais de degradação. Segundo, peptídeos que
reconhecem proteínas de superfície plasmáticas e/ou inespe-
cíficas são depletados do conjunto total de peptídeos. Final-
mente, a seleção in vivo de peptídeos mostrou ser capaz de
identificar receptores endoteliais expressos seletivamente em
tumores. Esses receptores, específicos do endotélio tumoral,
podem servir como marcadores tumorais moleculares, alvos
para terapias dirigidas e até para o mapeamento da vascula-
tura normal e tumoral.
TERAPIA ANTICÂNCER D IRIGIDA E ANGIOGÊNESE
Uma das maiores conquistas resu.ltantes da identificação
de marcadores endoteliais tumorais é o desenvolvimento de
terapias anticâncer órgão-dirigidas. Dados recentes obtidos
em nosso laboratório têm mostrado vantagens na utilização
de compostos quiméricos, formados por peptídeos órgão-di-
rigidos associados a peptídeos pró-apoptóticos ou compos-
tos quimioterápicos, no tratamento de vários tipos de tumo-
res e na ablação ou retardo do desenvolvimento tumoral em
modelos animais. Na tentativa de desenvolver uma terapia
menos traumática a indivíduos portadores de patologias
prostáticas, utilizamos peptídeos que apresentavam ligação
específi ca ao· endotélio vascular prostático no tratamento de
camundo ngos transgênicos que desenvolve m tumores
prostáticos malignos (adenocarcinomas) de forma espontâ-
nea (TRAMP). Após a seleção dos peptídeos através da tec-
nologia de apresentação de fagos, estudamos sua habilida-
de em dirigir preferencialmente à próstata um composto bio-
logicamente ativo, capaz de induzir apoptose9 . O resultado foi
a destruição do parênquima prostático e o retardo no apare-
cimento dos tumores. no grupo de camundongos tratados
com a quimera ativa'.
Em outro exemplo da utilização de marcadores molecula-
res de angiogênese na terapia anticâncer dirigida, utilizamos
uma quimera formada pela ligação da droga anticâncer doxor-
99
 Recuperação dos lagos
Perfusão e/ou
lavagens
Vaso sanguíneo
Fig. 9.2 - Caracterização do processo de seleção in vivo de fagos. Inicialmente, a biblioteca de fagos é injetada em veia da cauda do
camundongo. Após tempo preestabelecido de circulação, o órgão ou tecido em questão é coletado e os fagos ligados são recupera -
dos e amplificados através de infecção com E. coli em fase logarítmica de crescimento, sendo então novamente injetados, dando-se
início ao round seguinte da seleção.
rub ic ina ou de peptídeo pró-apo ptótico'J às seqüências
CNGRC (cisteína-asparagina-glici.na-arginina-cisteína) e RGD-
4C (arginina-glicina-ácido aspártico envoltos num peptídeo
duplo-cíclico). identi ficadas a partir de uma biblioteca de
fagos, no tratamento de tumores de mama implantados no te-
cido subcutâneo de camundongos. O composto apresentou
aumento na eficácia e redução na freqüência de efeitos cola-.
te ra i s;·~.
Alguns dos fatores de crescimento quase que exclusiva-
mente expressos no endotélio vascular tumoral, como a
aminopeptidase NJJ. as metaloproteases de matriz46 e as inte-
gri nas a.v~3 e a.v~5 17 • participam também na regulação do
processo da angiogênese 5•11• A aminopeptidase N (também
conhecida como CD 13) tem papel fundamental na angiogêne-
se. Ela mostrou-se presenre no endotélio vascular tumoral e
indetectável em todas as outras estruturas endoteliais estu-
dadas. Seus antagonistas suprimiram o desenvolvimento de
tumores de mama em modelos animais e suprimiram a angio-
gênese num modelo experimental de neovascularização reti-
niana induzida por hipóxia·;J_
Uma das maiores dificuldades na elaboração e implanta-
ção de novas terapias anticâncer é a transição entre os estu-
dos em animais e o tratamento anticâncer de humanos. To-
dos os trabalhos até aqui descritos, que identificaram recep-
tores no endotélio vascular através do uso da apresentação
de fagos, foram realizados em modelos animais. A primeira
vez q~e essa tecnologia foi utilizada em humanos com o ob-
jetivo de mapear o endotélio foi por nós descrita recentemen-
te!. Através da utilização da tecnologia de fagos em indiví-
duos com morte cerebral, verificamos que peptídeos circulan-
tes contendo mais de 47 mil seqüências de oligonucleotídeos
100
·~
Lígação in vivo
dos lagos
Aumento da afinidade dos lagos
apresentaram afi nidade pelo endotélio vascular de diferentes
órgãos, numa distribuição não-randômica. Ainda mais, certos
peptídeos circulantes ligaram-se especificamente a recepto-
res conhecidos do enc.lotélio vascular de órgãos dos quais os
peptídeos foram recuperados. Um dos exemplos de peptídeo
que apresentou afinidade seleti va pelo endotélio vascular da
próstata mostrou-se muito semelhante à interleuc.ina-11 (IL-
11 ) e atualmente está sendo estudado como possível ferra-
menta no tratamento do adenocarcinoma de próstata.
O mapeamento do endotélio vascu lar oferece. portanto,
muitas aplicaç!3es clínicas em potencial, tanto para a tera-
pêutica anticâncer quanto para doenças benignas como a
hiperplasia prostática e a endometriose. Acredi tamos que
em última instância poderá ser possível a realização de um
perfi l molecular da vasculatura dos diversos órgãos em di-
ferentes condições e. se esse objeti vo for alcançado, visua-
lizamos uma nova modalidade de terapia-dirigida de doen-
ças, baseada no perfil vascular do endotélio do órgão ou
tecido afetado.
METÁSTASE
Dentre toda<> as características dos tumores malignos, tal-
vez a que mais influencie a evolução e o prognóstico da
doença seja a presença de metástases. Definida como sendo
a presença de células tumorais em outros tecidos do organis-
mo que não-o sítio primário do tumor,_usualmente a presen-
ça de metástases envolve a circulação de células tu morais por
vasos linfáticos ou sanguíneos!4 . Para que células tumorais
sejam capazes de desenvolver-se numa me'lástase, elas de-
vem sobreviver a uma série de interações com os mecanis-
mos homeostáticos do hospedeiro que são potencialmente
fatais. Portanto, não é surpreendente ser relativamente rara a
freqüência de metástases dentro do imenso uni verso de tu-
mores malignos descritos no ser humano. A aquisição das
características fenotípicas que permitem a invasão tecidual e
a formação de metástases resulta da ativação ele genes pro-
motores e da inativação ele genes supressores de invasão te-
ciclual. Entretanto, a cápaciclacle de in vasão não é exclusiva
ele células neoplásicas. Ela é também observada em células
embrionárias e leucócitos, e o mecanismo utilizado é seme-
lhante em todos os casos.
Desde o início dos estudos sobre a evolução do câncer,
o processo de formação das metástases foi dividido em fases
que são essenciais e interligadas em todos os tipos de tumo-
rcs18. Inicialmente, a célula neoplásica deve se multiplicar c,
para isso, utiliza nutrientes provenientes do microambiente do
tecido onde está local izada. Esse processo ocorre por difu-
são c é suportado pelo conceito que tumores em desenvol-
vimento podem utilizar mecanismos homeostáticos do hospe-
deiro36. Entretanto, conforme discutido anteriormente, o oxi -
gênio obtido por difusão alcança aproximadamente 15Üf1m e,
portanto, é capaz de suprir um tumor de até I ou 2mm de diâ-
metro13. A partir daí, a angiogênese é necessária para a so-
brevivência das células e para o crescimento do tumor. O pas-
so seguinte na formação de metástases é o desprendimento
das células do tumor primário. Para isso, as células tumorais
dependem da regulação negativa de molécu las de coesão e
adcsinas, como por exemplo as E-caderinas 22 ·-'~, e da capaci-
dade de motil idade celular. A motil idade celul ar é determi na-
da por alterações no citoesqueleto e por resposta a fatores
como trombopl astinas~9 e de automotilidade 10·~s.
Após a migração tec idual , as células devem entrar na cir-
culação do hospedeiro. Uma vez que caem na circ ulação, a
grande maioria padece em decorrência de vári os fatores,
como sua deformabili dade, seu poder de agregação e molé-
culas de adesão expressas em sua superfície. Além destes,
fatores do hospedeiro como macrófagos, plaquetas, cé lulas
Hatural killers e a própria turbulência do sangue di ficultam
a sobrevivência das células neoplásicas na circulação. As
que sobrevivem devem aderir a receptores presentes nos pe-
ricitos ou nas células do endotélio e/ou a moléculas da mem-
brana basal do órgão-alvo, como as proteogl icanas e o colá-
geno tipo IVfi.s_ Em seguida, as células devem sair do vaso e
penetrar o parênquima do órgão-alvo. Entre as enzimas envol-
vidas na in vasão tecidual estão as metaloproteinases de ma-
triz, produzidas por células neoplásicas e também por células
do tecido conectivo6A 3 • Após a adesão e o extravasamento
celular, deve ocorrer a proliferação celular para o desenvol-
vimento do tumor. Para isso, as células sofrem influência
autócrina, endócrina e parácrina de fatores de crescimento,
além de serem capazes de burlar os mecanismos de defesa do
órgão-alvo. Uma vez que a metástase alcança o diâmetro l-i-
mite de difusão do oxigênio, inicia-se novamente o processo
de angiogênese da mesma forma que no tumor primário, dessa
forma permitindo a sobrevivência e o crescimento da n'letás-
tasc. As células da metástase podem então sofrer processo
semelhante ao do tumor primário, dessa forma caracterizan-
do o que conhecemos por metástases de metástases.
O padrão de envol vimento linfático de um tumor depen-
de claramente da via de drenagem do órgão primário. Células
malignas podem invadir canais linfáticos diretamente, podem
passar de vasos sanguíneos para linfáticos e vice-ve rsa,
mostrando que existe uma comunicação veno-linfáLica com-
plexa nos linfonodos e ~ m outros tec idos '~.
Um dos exemplos mais clássicos de doença metàstática é
o câncer de próstata. Há muito foi reconhecido que o sítio
preferencial de formação de metástases no adenocarci noma
de próstata são os ossos, principalmente ossos pélvicos c da
coluna vertebral. No entanto, o fator que determina essa pre-
ferência, ou seja, o fator que determina o local (órgão ou te-
cido) aonde células neoplásicas circulan tes vão se ader ir c
proliferar, tanto no ade nocarcinoma de prós tata quanto em
outras neoplasias, não é conhecido. Em 1889, Pagct descre-
veu a teoria de seed ond soi/ (semente e solo), e concluiu que
as células neoplásicas (sementes) tinham uma afinidade es-
pecial por ambientes encontrados em órgãos e tecidos espe-
cíficos (solo)'0 . É fácil imaginar que as células neoplásicas
circul antes não reconhecem moléculas e receptores no
interstício ou nas células do órgão-alvo, mas sim em seu en-
dotélio, nos pericitos ou ainda na membrana basal de seus
vasos sanguíneos ou linfáticos. Baseados nessa premissa,
acreditamos que o endotélio de cada órgão ou tecido tem re-
ceptores, células e propriedades diferentes, seja ele tumoral
ou nãot. 2 • 3~·J • Ainda mais, uma vez que a angiogêncsc tu mo-
7
ral difere da fisiológica, o endotélio tumoral apresenta um re-
pertório de moléculas e receptores diferentes dos encontra-
dos nos vasos do órgão de origem do tumor. Uma das dife-
renças entre o endotélio do órgão primário, do tumor c de
suas metástases é a expressão em diferentes níveis de molé-
culas e receptores presentes no endotélio normal. Quando h;í
um aumento significativo da expressão de moléculas especí-
fi cas no tumor ou na metástase, existe o reconheci mento do
sistema imu ne que; em última análise, pode ser quanti fic;tclo
pela concentração sérica de an ticorpos fo rmados contra essa
determinada molécula. Em publicação recente, mostramos que
o repertório de anticorpos circulantes de pacientes com cân-
cer de próstata pode ser caracterizad·o através da tecnologia
de fagos~s. Esses anticorpos, puri fi cados de pacientes com
adenocarcinoma de próstata, foram reconhecidos de forma
específica por peptídeos expressos nos fagos. A proteína que
desencadeou essa resposta foi reconhecida e está sendo es-
tudada como marcador de doença avançada, já que se mos-
trou inversamente relacionada à sobrevi da dos pacientes 2x.
Além di sso, poderá tornar-se alvo na utilização de terapias
anticâncer dirigidas.
Após o tratamento de pacientes portadores de doença
maligna, a recorrência tumoral é a questão mais importante.
Entretanto, em alguns casos é observada recorrência muitos
anos após o tratamento do tu mor primúrio. Acredita-se que
células tumorais podem permanecer quiescentes e viáveis,
no entanto os mecanismos que determinam essa fase do ci-
clo celular não são conhecidos. Uma das possíveis explica-
çõe-s para a ocorrência de metástases longo tem po apos o
tratamento do tumor primário é o envolvimento das células em
tecido conectivo, mantendo-as relati vamente pouco vascula-
rizadas, permitindo a proteção contra os mecanismos ele de-
101
fesa e contra os age ntes q u imioterápicos~ • Outra possível
7
razão para o aparecimento de metástases longo tempo após
o tratamento do tumor primário é o equilíbrio entre a divisão
celular e a apoptose27 , o que manteria o tumor num volume
constante e suficientemente pequeno para não ser detecta-
do pelos métodos diagnóst icos existentes atualmente. Num
determinado momento, o número de célul as em divisão celu-
lar passaria a ser maior que o de células em apoptose, permi-
tindo novamente o crescimento do tumor.
FUTURO
O estudo da angiogênese e a caracterização do mecanis-
mo de formação das metástases ainda têm mu ito a ser explo-
rados; no entanto, o emprego de novas técni cas e a otimiza-
ção de métodos antes uti lizados para outras fi nalidades per-
mitirão os avanços necessários para a compreensão desses
fenômenos e para a melhora da terapia anticâncer.
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
L Arap W, Haedicke W, Bernasconi M et ai. Targe ting th e
prostate for destruction through a vascular address. Proc Natl
Acad Sei, USA 99: 1527-3 1,2002.
2. Arap W, Kolonin MG. Trepei M et ai. Steps toward rnapping
the hurnan vasculat ure by phage display. Nat Med 8:12 1-7,
2002.
3. Arap W, Pasqual ini R, Ruoslahti E. Cancer treatme nt by
targeted drug deli very to tumor vasculature in a mouse model.
Science 279:377-80, 1998.
4. Brooks PC, Clark RA, Cheresh DA. Requircment of vascu-
lar intcgrin al pha v beta 3 for angiogenesis. Science 264:569-
7 1. 1994.
5. Brooks PC. Montgomery AM, Rosenfeld ~ ct ai. lntegrin
al pha v beta 3 antagonists pro motc tumor regression by
inducing apoptosis of angiogenic blood vessels. Cell 79: 11 57-
64, 1994.
6. Chung AS, Yoon SO, Park SJ et ai. Roles of matrix me-
talloproteinases in tumor rnetastasis and angiogenesis. J
Biochem Moi Biol 36: 128-37, 2003.
7. Coman DR, Sheldon WF. The significance of hypcrc mia
around tumor implants. Am 1 Pathol 22:82 1, 1946.
8. Crawford HC, Matrisian LM. Tumor and stromal expression
of matrix metalloprote inases and their role in tumor pro-
gression. In vasion Metastasis 14:234-45, 1994.
9. Ellerby HM, Arap W, Ellerby LM et ai. Anti-cancer acti vity
o f targeted pro-apoptotic peptides. Nat Med 5: I 032-38,
1999.
10. Evans RD, Perkins VC, Henry A et ai. A tu mor-associated
{beta ) I integrin mu tation that abrogates epi thelial diffe-
renti ation control. J Cell13iol 160:589-96, 2003.
I L Ferrara N. Vascular endothelial growth factor: molecular and
biological aspects. Curr Top Microbiol Imm unol 237: 1-30, .
1999.
12. Fidler IJ. Modu lation of the organ microenvironment for
treatment of cancer metastasis. J Natl Cancer Inst 87: 1588-92,
1995 .
102
13. Fidler IJ. Mo lecular biology o f cancer: Invasion and mc-
tastasis. In: Cancer. Principies and Practice of Oncology.
Li ppincott-Raven, Phi ladelphia, 135-52, 1997.
14. Fisher l3, Fisher ER. The interrelationship of hematogenous
and lymphatic tumor cell di ssemination. Surg Gynecol Obstet
122:791-8, 1966.
I 5. Folkman J. Tu mor angiogenesis: therapeut ic implicatioris. N
Engl J Med 285:1182-6. 1971.
16. Folkman J. Anti-angiogenesis: new concept for therapy o f
solid tumors. Ann Surg 175:409-16. 1972.
17. Fried lander M, Brooks PC, Shaffer RW et ai. Definition of
two a ngiogeni c pathways by distinct alpha v in tegrins.
Scicnce 270: I500-2. 1995.
18. I-l art IR. Goode NT. Wilson RE. Mo lec ular uspccts of thc
metastatic cascade. Biochim Biophys Acta 9S9:65-l:l4. 1989.
19. Jain RK. The next frontier of molecular medicine: dcliYery of
therapeuti cs. Nat Med 4:655-7. 1998.
20. Kolonin M. Pasquali ni R, Arap W Molecular addresscs in
blood vessels as targets for therapy. Curr Opin Chem 13iol
5:308- 13, 200 I.
2 1. Leek RD, Harris AL, Lewis CE. Cytokine networks in solid
hu man tumors: regulation of ang iogenesis. J Uucocytc Biol
56:423, 1994.
22. Li LC, Zhao H, Nakajima K et ai. Methylation of the E-
cadherin gene prometer correlates with progression of prostate
cancer. 1 Urol 166:705-9, 2001.
23. Liotta LA, Kleinennan J, Suidel GM. Quamitative relation-
ships of in travascular tumor cells. tu mor vesse ls, and pul -
monary metastases following tumor implantation. Cuncer Res
34:997- 1004, 1974.
24. Mareei MM, Bracke ME. Molecular Mechanisms of Canccr
In vasion. In: Encyclopedia of Cancer. Academic Prcss.
Orlando 221-33, 2002.
25. Martiny- Baron G, Marme O. VEGF-mediatecl tumour ang io-
genesis: a new target for cancer therapy. Curr Opin Biotechnol
6:675-80, 1995.
26. Meini nger CJ. Zetter BR. Mast cells and angiogenesis. Semin
Cancer l3 iol 3:73-9, 1992.
27. Melt zer A. Dormancy and breast cancer. 1 Surg Oncol 43:
18 1-8, 1990.
28. Mintz PJ. Kim 1. Do KA et ai. Fingerprinting the circulating
repertoire of antibodies from cancer patients. Nat Biotechno l
21 :57-63, 2003.
29. Morikawa S, Balu k P. Kaidoh T et ai. Abno rm alities in
pericytes on blood vessels and endothelial sprouts in tumors.
Am 1 Pathol 160:985- 1000, 2002.
30. Paget S. The distribution of secondary growths in cancer of
the breast. Lancet I :57 1, 1889.
31. Pasquali ni R. Vascu lar targcting with phage peptide libraries.
Q 1 Nucl Med 43: 159-62. 1999.
32. Pasqualini R, Arap W Vascular targeting. In: Encyclopcdia of
Cancer. Academic Press, New 1crscy 50 1-8.2002.
33. Pasqualini R, Koivunen E, Kain R et ai. Aminopeptidase N
is a re~cptor for tumor-homi ng peptides and a target fo r
inhibiting angiogenesis. Cancer Res 60:722-7, 2000.
34. Pasqualini R, Ruoslahti E. Organ targeting in vivo usi ng phage
display peptide libraries. Nature 380:364-6, 1996.