La investigación actual en el campo de la medicinadel trauma y la bioquímica

celular ha llevado al examen de moléculas pequeñas intracelulares alternativas

como un enfoque novedoso para combatir el envejecimiento . Entre los
principales, los reguladores del azufre, como los péptidos decadena
pequeña (SCP) y los donantes de sulfuro, son un sector aún sin descubrir y
relativamente desconocido para la ciencia cosmética. Estos tienen potencial para
una innovación increíble.
El azufre está presente en todas las clases de biomoléculas. De hecho, los enlaces
disulfuro determinan la fuerza y la forma de las proteínas y las enzimas . 1 Como
tal, el azufre es en gran parte responsable de la actividad biológica de las
proteínas y enzimas que contienen disulfuro. 2
Ejemplos de las muchas vías por las cuales ciertos compuestos ricos en azufre
pueden actuar son a través de la regulación al alza del glutatión, un ácido
glutámico que contiene péptidos, así como la regulación de los residuos de
cisteína y glicina. Estos compuestos tienen varios efectos quimio-preventivos
potentes y propiedades antiinflamatorias, y su control puede combatir los signos
del envejecimiento. 3
Todos los organismos metabolizan el azufre por reducción u oxidación. Este
compuesto es esencial para la vida debido a sus funciones críticas en los procesos
bioquímicos. Sin embargo, con el tiempo, las concentraciones del glutatión
compuesto rico en azufre disminuyen dentro de la epidermis. Esto se debe a un
cambio en la velocidad de reacción redox que favorece la oxidación, lo cual es
desafortunado ya que el glutatión intracelular combate la inflamación y retarda el
envejecimiento a través de la síntesis de ADN, proteínas y lípidos, y la
regulación del transporte de enzimas y aminoácidos.
Debido a la estricta regulación de las vías implicadas, los intentos anteriores de
alterar la síntesis de glutatión mediante la aplicación tópica han fracasado. 4 El
glutatión tópico no es efectivo para inducir efectos debido a su incapacidad para
metabolizar o proliferar a través de complejas barreras cutáneas. Sin embargo, en
el presente trabajo, los autores plantearon la hipótesis de que la inducción de la
regulación al alza del glutatión internamente mediante un SCP tópico podría
llevar a una variedad de efectos positivos, con el objetivo final de combatir la
inflamación, entre otros signos críticos de envejecimiento.
Además, la investigación ha indicado que la biología del azufre desempeña un
papel importante en la citostasis, es decir, un alto en la progresión del ciclo
celular. Las células eucariotas siguen un ciclo específico que incluye los
principales puntos de control denominados fases G1 (actividad metabólica /
crecimiento), S (replicación de ADN), G2 (crecimiento continuo en preparación
para la división) y M (mitosis). 5 Detener este ciclo provoca una pérdida total en
el mantenimiento del genoma y conduce a un crecimiento continuo y a la
rotación celular, lo que contribuye al envejecimiento prematuro. Por otro lado,
mientras que las células de la piel humana se dividen diariamente, la división
continua en última instancia conduce a la descomposición y el envejecimiento, lo
que resulta en líneas finas y arrugas.
Curiosamente, cuando están en estasis, las células pueden prevenir o detener
ciertos procesos físicos y químicos relacionados con el envejecimiento que
conducen a la descomposición. Según una investigación establecida, el
contribuyente número uno al envejecimiento en los fibroblastos dérmicos es el
acortamiento de los telómeros, 6provocado por la progresión natural del ciclo
celular.
La investigación previa 3 ha demostrado los efectos de los compuestos que
contienen tiol sobre la antiproliferación, la detención del ciclo celular y la
regulación de la señalización celular, lo que resulta en un aumento de la
inhibición de la telomerasa. Este trabajo condujo a la hipótesis actual de que los
compuestos reguladores del azufre podrían afectar directamente el ciclo celular y,
por lo tanto, participar en la reducción de los signos visibles del
envejecimiento. Además, se postuló que la aplicación tópica de los SCP no
afectaría la senescencia celular, ya que este ciclo estrictamente regulado está
controlado por una serie de complejos gasotransmisores y señales intracelulares.
Dado que el azufre elemental es tóxico y, al igual que el glutatión, altamente
ineficiente por aplicación tópica, se buscaron fuentes naturales para contribuir
con los donantes de sulfuro y regular la producción de azufre celular. Como tal,
se requería un compuesto nuevo y natural capaz de regular por incremento el
azufre celular.
La inspiración y el abastecimiento se descubrieron en forma de una alga
extremófila de aguas profundas, Crypthecodinium cohnii , que libera a los
donantes de sulfuro para manipular su entorno para la supervivencia. A partir de
esto, se produjo un compuesto SCP de algas mono / disacáridas con tiol < 10 k
daltons a .
El objetivo del presente estudio fue probar primero el algas SCP para determinar
su capacidad para regular el azufre y, a su vez, las concentraciones de glutatión
en los fibroblastos humanos. El impacto de los niveles de glutatión en la
cicatrización de heridas también se evaluó en una prueba de raspado in vitro. A
continuación, las pruebas se dirigieron hacia el ciclo celular, para evaluar si el
material podría inducir citostasia al actuar como un gasotransmisor, para indicar
la quiescencia celular. Por último, se midieron los efectos del SCP algal en la
hidratación de la piel, la densidad y la pérdida de agua transepidérmica (TEWL)
para determinar si las observaciones in vitro se tradujeron in vivo.
 Dado que el azufre elemental es tóxico y
tópicamente ineficiente, se buscaron fuentes
naturales para contribuir con los donantes de
sulfuro y regular la producción celular de azufre.

Ensayos de glutatión y rasguño

Se realizó un ensayo de glutatión b para comparar los niveles de glutatión en
fibroblastos humanos tratados o no (control) con 1 mg / ml de algas SCP o L-
cisteína (control positivo). Este ensayo utiliza una reacción colorimétrica con una
tasa proporcional a la concentración de glutatión, hasta 2 µM. (Para obtener
detalles adicionales, consulte el Ensayo de glutatión ). Los resultados mostraron
una mejora del 72% en la producción de glutatión en fibroblastos tratados con
SCP de algas sobre la L-cisteína y el control (ver Figura 1 ). Aunque estos
resultados fueron meramente direccionales, ya que se basaron en comparaciones
con controles negativos y positivos que usaron una curva estándar (% de
diferencia), sugirieron fuertemente que el SCP podría mejorar los niveles de
glutatión; Por lo tanto, se justifica una mayor investigación en esta área.
Luego se llevaron a cabo estudios adicionales para determinar si el compuesto
demostró un efecto dependiente de la dosis en los niveles de glutatión. Como se
muestra en la Figura 2 , se identificó un 1.0% de SCP algal como el nivel óptimo
para mejorar los niveles de glutatión in vitro, seguido de un 0.01%. Sin embargo,
al 0.1%, el ingrediente tuvo menos efecto sobre los niveles de glutatión que al
0.01% o contra el control de L-cisteína. Por lo tanto, no se encontró un efecto
dependiente de la dosis lineal.
A continuación se utilizó un ensayo de rasguño para evaluar las propiedades de
curación de heridas de fibroblastos dérmicos humanos cultivados in vitro tratados
con SCP. Este ensayo es un método bien conocido y ampliamente utilizado para
estudiar la migración y proliferación celular. El ensayo se basa en la observación
de que cuando se administra un espacio artificial o un rasguño en una monocapa
de células confluentes, las células migrarán hacia la abertura y cerrarán el
rasguño. Los pasos básicos incluyen crear un rasguño en una monocapa celular y
capturar imágenes durante todo el proceso de curación o migración celular. A
través de estas imágenes, se cuantifica la tasa de migración celular.
Para este ensayo, el factor de crecimiento epidérmico 1 (EGF-1, 100 ng / mL)
sirvió como control positivo; el medio de prueba completo (0.1% algas SCP) y el
medio de prueba sin suero sirvieron como control y control negativo,
respectivamente. El ensayo de rasguño mostró que después de 72 h, el SCP de
algas disminuyó la migración celular y el tiempo de cierre de la herida en más de
la mitad de lo registrado por el control y el control negativo (consulte la Figura
3 ). En T24 y T48, el SCP algal también mostró efectos positivos a tasas
comparables a EGF-1; tenga en cuenta que estos resultados también se
compararon mediante curvas estándar (% de diferencia) y solo se proporcionó
información direccional.
En términos de% de cierre de la herida, el SCP algal cerró el cero en 99.9% al
finalizar el experimento, que fue ligeramente mayor que el control positivo
(98.5%) y significativamente mayor que el control (90%) y el control negativo
(80 %), como se muestra en la Figura 3 . En conjunto, estas observaciones
mostraron la aplicación tópica de los niveles de glutatión intracelular mejorados
de SCP algal. También aumentó la velocidad de migración y la cicatrización de
la herida a velocidades más rápidas que el control y el control negativo, en los
fibroblastos humanos, y proporcionó un porcentaje más alto para el cierre de la
herida que el control positivo.

Efectos del ciclo celular

A continuación, se exploró la idea de utilizar el SCP algal para inducir la
suspensión celular. Utilizando un ensayo cbasado en la fluorescencia , se pudo
visualizar el ciclo celular de los queratinocitos HaCaT y cuantificar los efectos de
la SCP algal (0,001%). En resumen, el ensayo emplea una proteína fluorescente
roja y una verde fusionadas a diferentes reguladores del ciclo celular: Cdt1 y
geminina. En las fases S, G2 y M, Cdt1 se degrada y solo queda la geminina
marcada en verde, identificando así las células en estas fases con núcleos
fluorescentes verdes. (Para obtener más información sobre esta prueba,
consulte Ensayo de fluorescencia , en línea).
Los resultados indicaron que el SCP algal suspendió el ciclo celular, lo que a su
vez podría disminuir el acortamiento del telómero y, en última instancia, prevenir
las mutaciones en el genoma celular. Específicamente, el compuesto detuvo las
células principalmente en la fase G2-M (1315.5 MFU), seguida de la fase G1
(206 MFU). Esto se muestra por la cantidad (MFU) de fluorescencia aumentada
de las construcciones de genes que contienen fluoróforos transducidos (GFP y
RFP); ver figura 4 .
En contraste, el control no tratado mostró poco o ningún efecto sobre la
progresión del ciclo celular. Estos resultados indican que el SCP algal podría
suspender la progresión del ciclo celular de los queratinocitos
HaCaT; Principalmente en la fase G2-M. Por lo tanto, se cree que esta
suspensión alarga la longevidad celular general no por la extensión o
manipulación de los telómeros, sino por la prolongación de ciertas etapas del
ciclo celular.

Efectos in vivo
Finalmente, se midieron los efectos del SCP algal sobre la hidratación de la piel,
la densidad y el TEWL para determinar si las observaciones in vitro (ver Figura
1 , Figura 2 , Figura 3 y Figura 4 ) se tradujeron in vivo. Cada ensayo in vivo se
realizó durante un período de cuatro semanas. Se reclutaron diez voluntarios
hombres y mujeres entre las edades de 23 y 45 años, libres de patologías de la
piel, para cada uno de los tres estudios. Las mediciones de los parámetros de
humedad, colágeno y TEWL se realizaron utilizando un sistema de análisis de la
piel. Los detalles de cada método de ensayo se describen en los siguientes
resultados.
Las lecturas de referencia se tomaron el día 1. Después de las mediciones
iniciales, los sujetos aplicaron 2 mg de dos fórmulas de prueba a sus antebrazos
voladores; las fórmulas consistieron en 2% de algas SCP en una loción base y la
loción base sola. Este nivel fue elegido para estandarizar las pruebas internas y
porque es indicativo de un nivel de uso típico en fórmulas de productos
terminados.
La loción se aplicó directamente después de las mediciones iniciales, y luego una
vez más cada semana durante el curso completo de cuatro semanas. Las
mediciones se tomaron inmediatamente después de la aplicación y semanalmente
durante cuatro semanas. Para una perspectiva adicional, también se registraron
las mediciones de un sitio de prueba no tratado en el brazo.
Hidratación: el módulo d del sistema de prueba de humedad de la pielproporciona
información sobre la hidratación al medir la capacidad de los niveles superiores
de la piel para conducir la electricidad cuando se somete a un voltaje
alterno. Este método se conoce como una medición de conductancia, y el
resultado se presenta en unidades uSiemens (uS). Aquí, se utiliza una sonda de
humedad para recopilar los valores de los Estados Unidos. Los resultados
mostrados en la Figura 5a y 5b indican que el material de SCP algal al 2%
aumentó la hidratación, en comparación con el control. Tenga en cuenta que
estos resultados son el promedio de tres lecturas consecutivas por sitio de prueba.

La regulación interna de los compuestos

antienvejecimiento tiene el potencial de
 revolucionar la forma en que la industria
considera los cosméticos antienvejecimiento.

Específicamente, los niveles de humedad mejoraron en 22. 51% después de 24

horas y en 37. 22% después de cuatro semanas, en comparación con el control sin
tratar. En comparación con la crema base, la adición de algas SCP mejoró la
hidratación en 10. 96% después de cuatro semanas. Estos resultados
direccionales sugieren que el SCP es capaz de aumentar la hidratación; Una vez
más, se justifican pruebas adicionales.
Densidad de la piel: A continuación, de alta resolución de imagen la piel del
ultrasonido se utilizó d para evaluar la densidad de la piel. Este enfoque mide la
respuesta acústica después de que se envía un pulso intacto y bajo a la
piel. Cuando el pulso acústico se emite y toca la piel, la parte se refleja y la parte
se transmite más hacia la piel.
La señal reflejada viaja hacia atrás y es captada por el transductor de
ultrasonido. Después de procesar la señal, aparece una imagen de corte
transversal en la pantalla. Esta imagen representa la intensidad, o amplitud, de las
señales. La intensidad de estas señales se representa en una escala de color. Por
ejemplo, la epidermis da una intensidad alta, blanca / amarilla, mientras que la
grasa subcutánea y las fibras musculares devuelven una intensidad baja, verde
oscuro y negra. La densidad promedio puede calcularse basándose en la
intensidad / grosor del escaneo.
Usando este método, se midieron los efectos del compuesto de algas SCP en la
densidad de la piel. Los resultados mostraron que el material aumentó la
densidad de la piel de manera constante durante las cuatro semanas, en
comparación con la piel no tratada y la loción base (ver Figuras 6a y 6b ). Como
la expresión de colágeno se asocia más a menudo con aumentos en la densidad de
la piel, los resultados sugieren que el SCP de algas aumentó de manera constante
los niveles de colágeno y la densidad de la piel con el tiempo, en comparación
con la loción base.
TEWL: Para determinar los efectos de la SCP de algas en las capacidades de
retención de humedad de la piel, TEWL se midió d en la piel tratada o no
(control) con una loción base o loción SCP-que contiene. El instrumento TEWL
consiste en una sonda que mide el gradiente de vapor en una cámara abierta
según el método del gradiente de presión de vapor de Nilsson. Dentro de la
cámara, dos conjuntos de sensores de temperatura y humedad se montan a
diferentes alturas sobre la superficie de la piel.
El diseño de cámara abierta mantiene la evaporación natural libre de la piel sin
interferir con el medio ambiente en el área de medición. También impacta
mínimamente en la piel, asegurando lecturas de evaporación imparciales y
precisas. La tasa de evaporación de la piel se calcula siguiendo la Ley de
Difusión de Fick:
Velocidad = P × [c1 - c2] / T
(donde P = coeficiente de permeabilidad de la membrana; (c1 - c2) = gradiente de
concentración; y T = grosor de la membrana).
Los resultados en la Figura 7 indican que la loción algal SCP fue capaz de
reducir el TEWL después de cuatro semanas de aplicación semanal, en apoyo de
la retención de humedad de la piel. En comparación con la loción base, la loción
de prueba disminuyó el TEWL en un 11.15%; comparado con el control no
tratado, 21.54% (ver Figura 7 ).

Conclusiones
La idea del glutatión en cosmética no es nueva, y debido a su probada
ineficiencia en aplicaciones tópicas, su potencial ha sido pasado por alto durante
mucho tiempo. Sin embargo, los ensayos descritos demuestran la aplicación
tópica de un SCP personalizado derivado de algas que puede aumentar
potencialmente los niveles de producción de glutatión dentro de la piel. Además,
el SCP algal mostró una mejor biodisponibilidad que el control positivo de
referencia (L-cisteína) y, por lo tanto, una mejor eficacia general en términos de
potenciación del glutatión.
Con respecto al ciclo celular, aunque las pruebas preliminares no apoyaron la
idea de que los niveles más altos de glutatión pueden poner a los queratinocitos
humanos en un estado de citostasis (datos no mostrados), el trabajo descrito
indica que la estasis puede inducirse utilizando una forma diferente de regulación
al alza: a través de donantes de sulfuro de origen natural, como el algas
SCP. Esta prolongación del ciclo celular y la reducción de la tasa de división
celular es una nueva vía para los beneficios contra el envejecimiento.
Además, el análisis in vivo demostró los efectos positivos del ingrediente SCP
algal en la hidratación de la piel, la retención de agua y la densidad de la
piel. Estos resultados, junto con los datos in vitro sobre el glutatión, la estasis
celular y la cicatrización de heridas, sugieren que el SCP de algas puede
proporcionar beneficios multifuncionales.
Los compuestos a base de azufre tienen un gran potencial no solo para su
aplicación práctica en cosméticos y cuidado personal, sino también para futuras
investigaciones. De hecho, la idea de regular internamente los compuestos
antienvejecimiento necesarios y afectar a los reguladores maestros, controles y
vías adicionales tiene el potencial de revolucionar cómo nosotros, como
industria, consideramos antienvejecimiento y cosméticos.
Referencias