Informe: Extracción de ADN vegetal

Alumnos: Agustina Acosta, Belén Logullo, Amira Malti,

Marco Sapia.
Curso: 6°B
Colegio: San Ramón
Fecha de la experiencia: 04/05/2018
Fecha de entrega: 11/05/2018
Introducción:
El experimento consiste en la extracción del ADN vegetal de una banana.
Denominamos ADN a la información genética que se encuentra en todas las células,
está relacionada con la fabricación de proteínas y contiene la información genética
que determina el funcionamiento y desarrollo de todo ser vivo. Las unidades
funcionales y estructurales se llaman nucleótidos y están conformados por tres
elementos, un grupo fosfato, una desoxirribosa y bases nitrogenadas.
En el experimento el material utilizado es el plátano o banana (Musa Paradisiaca)
que perteneciente al reino Plantae y a la familia Musaceae. Está compuesto por
células vegetales, las cuales son un tipo de célula eucariota que comparten
similitudes con la célula animal.
La estructura de la célula vegetal está compuesta por la pared celular que da forma
a la célula y protege la membrana plasmática, la cual permite el acceso de
elementos útiles para la célula, el citoplasma, el cual se encuentra dentro de la
membrana plasmática y contiene, al citosol y a los orgánulos de la célula, además
todas las células vegetales poseen un núcleo que lleva consigo la información
genética en forma de ADN.
Algunos de los orgánulos que conforman este tipo de células son las mitocondrias,
que realizan la respiración celular y producen ATP, los ribosomas, responsables de
sintetizar las proteínas, el aparato de Golgi, un conjunto de sacos membranosos con
la función de producir, almacenar y distribuir sustancias como la proteína, el retículo
endoplasmático, del cual hay dos tipos, lisos y rugosos. A través de este se
transportan sustancias que participan en la síntesis de proteínas y lípidos. Por último
las vacuolas, que almacenan desechos dañinos y sustancias tóxicas.
A lo largo de la experimentación se buscará mediante un proceso de lisis sobre la
pared y la membrana plasmática llegar al material genético que se encuentra en el
núcleo celular del plátano, es decir, que a partir de medios químicos y físicos se
intentará deteriorar a la célula hasta dar con el material genético. De esta forma se
podrá identificar como diversas sustancias y acciones actúan como emulsionantes
de los lípidos y rompen la pared celular.

Pasos para el aislamiento celular:

Acosta, Logullo, Malti, Sapia 6°B 1

 El primer paso fue cortar una porción pequeña de la banana con un cuchillo y
obtuvimos un tejido con una combinación de células. Debido al objetivo del
experimento, colocamos la porción de fruta en el mortero para molerla y así
disgregar las células. Al molerla, se rompen muchas de sus membranas, tales como
la pared celular, la membrana plasmática y la membrana del retículo
endoplasmático.
Al molerlas, se rompen muchas de sus membranas (incluyendo la pared celular, la
membrana plasmática y la membrana del retículo endoplasmático). Sin embargo,
hay orgánulos que quedan intactos como el núcleo, las mitocondrias, el aparato de
Golgi, etc.
Luego de molerlas, agregamos agua destilada. Las células se encuentran en una
pasta de color amarillo claro que toma el nombre de homogenado (figura 1).
El siguiente paso fue colocar en un vaso descartable un poco de shampoo de color
claro. La función del shampoo fue ayudar a romper las uniones intercelulares que
mantienen unidas a las células entre sí. Actuó como emulsionante de los lípidos de
la membrana de la célula, rompiéndola y dejando libre al ADN.
Asimismo, el shampoo (cabeza hidrofílica y cola hidrofóbica) forma micelas con los
lípidos de la membrana.
A continuación, agregamos unas pizcas de sal al shampoo que previamente
colocamos en el vaso y revolvimos lentamente con una cuchara. El cloruro de sodio,
es decir la sal, están presentes debido a que sus cationes se unen al grupo fosfato
del ADN que tienen carga negativa. De esta manera, se estabiliza la molécula de
ADN porque no hay carga negativa. Disminuye la solubilidad de histonas en
molécula de ADN lo que hace que precipiten y se separen del ADN sin mucha
dificultad.
Tomamos unas cucharaditas del homogenado de banana y las agregamos a la
solución de shampoo y sal. Mezclamos con una varilla de vidrio durante 5 minutos
(figura 2).
Además, colocamos un filtro de café dentro de un vaso de vidrio y posteriormente
filtramos la mezcla final (figura 3).
Luego de dejar que la solución drene por algunos minutos, añadimos alcohol a la
solución. Este produce que el oxhidrilo (OH) se una por puentes de hidrógeno al
agua (H2O) y por consiguiente se de un precipitado blanco de ADN en la interfase
alcohol-agua, que se enrolla a la varilla de vidrio (figuras 4 y 5).
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Resultados:
Pudimos entender el rol de cada material y de cada procedimiento:
Al triturar la banana conseguimos romper muchas de las membranas celulares,
para que se liberen las hebras de ADN. (Figura 1)
El shampoo cumplió la función de romper las uniones intercelulares y formar
micelas con los lípidos de la membrana. La sal unió sus cationes al grupo fosfato de
carga negativa para estabilizar el ADN (que tenga carga neutra) y además ayudo a
bajar el nivel de solubilidad de las proteínas, para que al final se obtenga el
precipitado de las hebras correctamente. (Figura 2)
El alcohol hizo que se uniera el OH a las moléculas de agua, así el ADN resultó
ser insoluble en agua y por esta razón, precipitó. El ADN, al precipitar en la interfaz
alcohol-agua, se enrolla.
Gracias a que seguimos correctamente todos los pasos y utilizamos los elementos
necesarios, pudimos visualizar las hebras de ADN de la banana. El producto final de
la experiencia fue una solución que consta de alcohol, agua y un precipitado color
blanco que es el ADN enrollado. (Figuras 4 y 5)

Imágenes:

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Figura 1: Pasta de color amarillo claro que se obtiene luego de moler la banana.

Figura 2: Solución que contiene homogenado de banana, shampoo y sal.

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Figura 3: Filtramos la mezcla vertiendola dentro del filtro de café.

Figuras 4 y 5: Precipitado blanco en interfase alcohol-agua.

Conclusión:

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 Gracias a este experimento pudimos observar el ADN de la banana, como también
analizar la función de las distintas partes de la célula y cómo son afectadas por
distintos factores externos como la acción mecánica.
Sin embargo, hay distintos factores que podrían haber sido modificados para
conseguir mejores resultados en el experimento. Un ejemplo de esto sería haber
agregado enzimas, las cuales fragmentan el ARN presente en la solución final del
experimento, y así conseguir un producto final más puro. Por otro lado, podríamos
haber agregado un colorante al ADN y de esta forma visualizarlo mejor. Una vez
finalizado el experimento, se podría haber tomado una muestra del ADN conseguido
y observado con la ayuda de un microscopio para identificar los diferentes
componentes de la cadena, tales como las bases nitrogenadas, los azúcares o los
grupos fosfatados. Además, la temperatura del alcohol es un factor importante en
este experimento. La utilización de hielo lo facilita ya que no nos deberíamos
preocupar por su cambio de temperatura.

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