CONTROL MICROBIOLÓGICO DE FORMAS FARMACÉUTICAS LÍQUIDAS

ESTÉRILES
CONTROL FISICOQUÍMICO Y MICROBIOLÓGICO 
Arley Sandoval (A00327036), Alejandra Quijano (A00---),
Universidad ICESI, Facultad de Ciencias Naturales, Programa de Química
Farmacéutica.
Abril 10 de 2019
Tabla de Certificación

Lugar de análisis: Laboratorio Microbiología Universidad Icesi, Cali Valle.

Fecha de análisis: 27/Marzo /2018
Área asignada para control de superficie: Cuarto de incubación (junto al fregadero).
Área asignada para control de equipo: Cabina flujo laminar (atrás).
Fecha de lectura para agares:
29/ABR/2019
01/ABR/2019
03/ABR/2019
Tipo de Muestra Solución salina 0.9 % para inyectables

Nombre de la
Muestra Solución salina 0.9 %, bolsa por 500 mL

Número de Lote SBI7JI9

ASIGNACIÓN DE ANÁLISIS
ANÁLISIS: Control microbiológico de formas farmacéuticas líquidas estériles
METODOOGIA: USP: X BP: ____
OBSERVACIONES: NA

EQUIPOS EMPLEADOS

FECHA DE FECHA DE VENCIMIENTO

EQUIPO MARCA
CALIBRACIÓN DE CALIBRACIÓN

Cabina de
ULPA filter
bioseguridad clase II NA NA
ISOCIDE
tipo A2
 Horno/baño maría NA NA NA

Incubadora 35°C BINDER NA NA

Bomba de vacío VALUE NA NA

REACTIVOS EMPLEADOS:

FECHA DE FECHA DE CANTIDAD

LOTE REACTIVO APERTURA UTILIZADA
VENCIMIENTO

1 vial de
Limulus Amebocyte lysate PPC y un 1
PS16005-10 N/A N/A
PYROSATE ® vial de SPL

ANÁLISIS REALIZADOS

1. Tipo de ensayo: Análisis de esterilidad por filtración por membrana:

De acuerdo a lo establecido en la USP es posible realizar el análisis de esterilidad por

filtración de membrana a la solución salina debido a que la naturaleza del producto lo
permite. Previo al análisis se expuso una caja de Petri con agar caso durante toda la prueba
para poder utilizarlo como control ambiental. Después, se instaló el sistema de filtración de
polisulfona y se filtró la muestra (solución salina), se lavó con caldo peptona y se cortó la
membrana a la mitad con una aguja estéril para colocar una mitad en el frasco schott que
contenía Caldo Tioglicolato (FTM) y la otra mitad en el caldo caso (TSB).

Los frascos fueron llevados a incubar por 14 días de acuerdo a las siguientes temperaturas:
 El FTM a 30 – 35°C
 El TSB a temperatura ambiente

Se revisó el aspecto de los medios de cultivo después de 3, 8 y 14 días de incubación. Los

datos obtenidos se muestran en la tabla 1. Posteriormente, se realizó un control negativo
en donde se hizo el mismo procedimiento mencionado anteriormente, pero sin utilizar
muestra (solución salina). Los frascos de FTM y TSB se incubaron igual que los frascos que
contienen la muestra. Los resultados obtenidos para el control negativo se muestran en la
tabla 1.
 Día 3 Día 8 Día 14

Muestra(1)
y
control(2)
negativo
medio
FTM

Muestra(1)
y
control(2)
negativo
medio
TSB

Control
ambiental

Tabla 1. Resultados obtenidos para la muestra y control negativo en medio FTM y TSB
cultivado a temperatura 35 °C y temperatura ambiente respectivamente

2. Tipo de ensayo: análisis de endotoxinas bacterianas por técnica LAL

Se realizó esta prueba mediante el uso del kit Pyrosate® para ello, se adicionó 2 mL de
solución salina a un tubo apirogeno para poder obtener de aquí una muestra de 0,5 mL la
cual se transfirió al tubo Azul SPL, se mezcló y de este tubo se obtuvo 0,25 mL que fueron
trasferidos al tubo rojo PPC. Estos tubos se incubaron a 37 °C por 25 minutos. El resultado
obtenido se muestra en la tabla 2.
 Tabla 2. Resultado obtenido para el análisis de endotoxinas bacterianas

Tipo de muestra Incubación 37°C por 25 minutos

Tubo PPC Y SPL

(respectivamente)

ANALISIS DE RESULTADOS

Durante el desarrollo de la práctica se realizó control microbiológico al producto terminado

solución salina 0,9%, bolsa por 500ml, empleando la metodología establecida por la USP,
para ello se realizaron dos pruebas, las cuales fueron la prueba de esterilidad por filtración
de membrana y la prueba de endotoxinas bacterianas.
Con respecto a la prueba de esterilidad por filtración de membrana, la prueba se invalida
debido a que hubo presencia de crecimiento microbiano en los controles negativo que
corresponde al caldo CASO (TSB) y el caldo de Tioglicolato, esto se puede observar en la
tabla 1, después de la incubación. Con lo anterior, es necesario realizar de nuevo la prueba
de esterilidad para poder evaluar el producto terminado. La contaminación del control
negativo pudo deberse a un mal procedimiento durante la filtración o a la incorrecta limpieza
de equipos y área de trabajo lo cual permitió, el alojamiento del microorganismo. Esto
sugiere el mejoramiento de las metodologías empleadas durante las pruebas de esterilidad
por parte de los analistas para eliminar cualquier posible error en el área de trabajo.
Por otro lado, para la prueba de endotoxinas bacterianas se observó la formación de gel en
el tubo SPL y formación de gel en el tubo de PPC lo cual significa que el resultado es válido
y la muestra contiene >= 0,25 UE/mL. Este resultado cumple con las especificaciones
establecidas en la USP por lo cual la prueba de endotoxinas bacterianas para la solución
salina de 0,9% cumple con los requerimientos establecidos. Sin embargo, como la prueba
de esterilidad se invalido, se debe retener el lote para poder realizar de nuevo el análisis y
tomar decisiones frente a la calidad del producto.
CERTIFICADO DE CALIDAD

PRODUCTO TERMINADO: Solución inyectable de cloruro de sodio 0.9% USP

PRUEBA NORMA ESPECIFICACIÓN CUMPLE NO CUMPLE

No hay presencia de turbidez

en los frascos con FTM, TSB
Esterilidad USP 36 NF 33
tanto control negativo como
muestra. Hay presencia de X
crecimiento en el control
ambiental.

No más de 0,5 unidades USP

de Endotoxina/ mL cuando la
cantidad declarada de
Endotoxina USP 36 NF 33 cloruro de sodio en la
bacteriana inyección está entre 0,5% y
0,9%, y no más de 3,6 X
unidades USP cuando la
cantidad declarada de
cloruro de sodio en la
inyección está entre 3,0% y
24,3%.

La muestra del lote analizado Cumple ____________ No Cumple X con las

especificaciones según la metodología empleada.
Realizado por: Arley Sandoval fecha de entrega:
Realizado por: Alejandra Quijano fecha de entrega:
(Analistas)
Revisado por: _____________fecha de revisión: __________