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Boletim de Pesquisa do Cérebro

Volume 144 , janeiro de 2019 , páginas 132-139

Relatório de pesquisa

Efeito da eletroacupuntura na regulação da deglutição pela ativação

do interneurônio na medula ventrolateral (LMV)
Qiuping Ye a , 1 , Chunyan Liu b, Junheng Shi um, matiz Você c, Jiaying Zhao um, Jianhua Liu b, Nenggui Xu um , Zhenhua
Xu b
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https://doi.org/10.1016/j.brainresbull.2018.11.021 Obtenha direitos e conteúdo

Sob uma Creative Commons licença acesso livre

Destaques
• EA no CV23 poderia regular a deglutição em ratos sob condição fisiológica.

• A EA no CV23 poderia ativar os neurônios relacionados à deglutição e alterar o pico

dos neurônios no VLM.

• A EA no CV23 poderia aumentar as expressões c-fos , o que indicava que o EA poderia

ativar os neurônios SR em VLM.

Abstrato
A medula ventrolateral (LMV) foi uma das partes essenciais do gerador de padrão central (GPC) na
deglutição e a eletroacupuntura (EA) foi uma importante intervenção na desordem da deglutição. Mas o
efeito e mecanismo da EA nos acupontos na deglutição eram desconhecidos. O presente objetivo visa
detectar o efeito da EA no Lianquan (CV23) sobre o interneurônio da deglutição e deglutição (SR) na
LMV. Trinta e seis ratos Sprague-Dawley foram operados e o reflexo da deglutição foi induzido pela
infusão dupla de água destilada (DDW). Simultaneamente, os números de deglutição foram registrados.
Então EA foi administrada em Lianquan e Neiguan (PC6) e as descargas de neurônios em VLM foram
detectadas. Um total de 72 neurônios foram registrados, 60 dos quais foram registrados corretamente
após a identificação histológica. Dois tipos de neurônios de SR foram encontrados e o número de
deglutições aumentou após EA no CV23 e no PC6 comparado com nenhum grupo do EA. As taxas de
resposta dos neurônios foram de 78,3% e 50% para EA em CV23 e PC6, respectivamente, com diferença
significativa (P <0,05 ). Enquanto isso, os padrões de pico dos neurônios foram alterados após o EA no
CV23 e PC6. Além disso, vinte e quatro ratos foram utilizados para imunofluorescência após EA em
CV23 e PC6. Os resultados mostraram que as células c-fos positivas no grupo CV23 foram 20,63 ± 2,35,
enquanto o grupo PC6 foi 14,13 ± 1,78 e 6,88 ± 1,42 no grupo controle. Houve diferença significativa
entre eles ( P <0,05 ). Esses resultados indicaram que o EA pode regular a função de deglutição via
ativação dos interneurônios SR em VLM sob a condição fisiológica.

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Palavras-chave
Eletro-acupuntura; CV23; Deglutição; VLM; C-fos

1 . Introdução
A disfagia é uma morbidade comumente documentada e afetou a maioria dos pacientes após AVC agudo,
acompanhada de desidratação, pneumonia por aspiração , AVC recorrente e assim por diante, resultando
em incapacidades de longa duração [ Martino et al., 2005 ; González-Fernández et al., 2013]. Portanto, os
tratamentos da disfagia são realmente importantes para a recuperação do AVC. Existem muitos
tratamentos para os sintomas de disfagia após o acidente vascular cerebral, incluindo o treinamento de
deglutição, estimulação fria, dieta nasogástrica, estimulação elétrica e assim por diante. Entre eles, a
acupuntura foi uma intervenção médica eficaz e primária para a disfagia na China e em muitos outros
países. Foi aceito que a acupuntura é eficaz no tratamento da disfagia do pós-AVC [ Lee et al., 2014 ;
Geeganage et al., 2012 ]. Uma revisão sistemática, incluindo 6010 pacientes, mostrou que a acupuntura
tem eficácia terapêutica para disfagia após acidente vascular cerebral [ Ye et al., 2017 ].

Em estudos clínicos, foi confirmado que a acupuntura poderia influenciar especialmente o centro
neural relevante e as ondas cerebrais através de diferentes métodos [SF Hsu et al., 2011 ]. Alguns estudos
demonstraram que várias freqüências e tipos de acupuntura poderiam reconstruir diferentes
conectividade efetiva de neurônios [Haitao Yu et al., 2017a , 2017b ]. A conexão foi associada a
relacionamentos de sincronização que determinaram a intensidade da conexão. Além disso, a
acupuntura em zusanli poderia melhorar a sincronização de diferentes áreas do cérebro, promovendo a
transmissão de informações, comparando com a pré-acupuntura em bandas delta e alfa [Haitao Yu et al.,
2017a , 2017b]. E a conexão de longa distância do hemisfério esquerdo e direito também se fortaleceu
após a acupuntura, o que indicava uma conectividade mais funcional da rede cerebral [Haitao Yu et al.,
2018 ]. Esses estudos indicaram que a acupuntura pode ser um meio eficaz de regular várias funções nos
sistemas nervosos. Caso contrário, alguns achados mostram que a acupuntura teve efeitos específicos na
região cerebral relevante [ Kaptchuk, 2002 ]. Quanto ao tratamento da disfagia, Lianquan (CV23) foi um
dos acupionadores mais utilizados. Mas o mecanismo subjacente do CV23 para o tratamento da disfagia
ainda não está claro.

O gerador de padrão central (CPG) da deglutição estava no tronco cerebral inferior, que era um grupo de
funções com vários neurônios [ Jean, 1984 ]. A parte dorsal recebe aferente do sistema neural central de
alto nível , então os sinais alcançam seqüencialmente a parte ventral do centro de deglutição [ Aydogdu
et al., 2001 ]. A parte ventral era composta de núcleo ambíguo (AMB) e formação reticular lateral [ Plant,
1998 ]. E havia neurônio motor e interneurônio na medula ventrolateral(VLM). Os estímulos eficazes
poderiam ativar automaticamente o neurônio motor relevante e realizar a coordenação do processo de
excitação e inibição nos músculos de deglutição [ Lang, 2009]. Como um interneurônio de comutador
em VLM, contata firmemente com as fibras de núcleo trato solitário (NTS) e AMB ou outros neurônios
motores [M. Amri and Car, 1988]. O registro extracelular de vários animais confirmou que o LMV pode
ser importante na deglutição, localizada acima ou próximo à BAM [M. Amri and Car, 1988; CHIAO et al.,
1994]. Além disso, a LMV foi uma área de função complexa contendo a central de controle de
cardiovascular, respiração, quimiorrecepção central e barorreceptor [Oku et al., 1994 ; Umezaki et al.,
1998 ; Saito e Ezure, 2003 ]. Foi relatado que a eletro-acupuntura (EA) em acupontos chineses poderia
reduzir a pressão sanguínea através da encefalina em VLM rostral [ Li et al., 2016 , 2012 ]. Da mesma
forma, o NTS e AMB também foram mostrados para participar na regulação da EA para diferentes
funções, como o cardiovascular [ Gao et al., 2011 ; Tjen-A-Looi et al., 2012 ], função gastrointestinal [
Fang et al., 2017 ] e dor visceral [ Liu et al., 2014]. No entanto, o efeito da EA no Lianquan (CV23) para o
interneurônio relacionado à deglutição em MLV foi menos conhecido até o momento. No presente,
objetivamos detectar o efeito do EA na regulação da função da deglutição via neurônios do VLM por
eletrofisiologia e imunofluorescência , o que foi importante para um estudo mais aprofundado sobre a
disfagia na clínica.

2 . materiais e métodos

2.1 . Materiais
Trinta e seis ratazanas Sprague-Dawley (SD) saudáveis pesando entre 250 e 300 g foram fornecidas pelo
Laboratory Animal Center da Província de Guangdong (chave de licença: SYXK (Yue) 2013-0085). Antes
dos experimentos, os animais foram alojados em condições tranqüilas (24–26 ° C, 50% –60% de umidade
relativa, ciclos de luz alternada alternados com luz acesa às 8:00 da manhã; alimentos e água destilada
estavam disponíveis o suficiente). Nada foi feito com os ratos antes do experimento. Métodos
experimentais em animais, fins experimentais e o descarte de animais em experimento obtiveram a
permissão do comitê de ética do Hospital Provincial de Medicina Chinesa de Guangdong (código de
ética: 2.015.004). O processo também seguiu as Diretrizes sobre o Cuidado Adequado de Animais
Experimentais, promulgadas em 2006 pelo Ministério da Ciência e Tecnologia da República Popular da
China.

2.2 . Operação
Os animais foram anestesiados (intraperitoneal) com uretano (1,3 g / kg, ip, Sigma-Aldrich, St. Louis,
MO, EUA) e suplementados sempre que necessário para manter a anestesia em um nível no qual nem o
reflexo da córnea nem os movimentos oculares espontâneos ocorreram. Uma incisão na linha média foi
feita no pescoço e submaxilar para registrar a posição eletromiográfica (EMG) na posição supina. Em
seguida, uma separação romba foi feita para separar o anterior ortastrástrico unilateral e milohioideo.
Posteriormente, dois eletrodos de agulha bipolares isolados (Hanamori, Japão) foram inseridos no milo-
hióideo unilateral e o eletrodo de referência foi inserido no músculo masseter .

Depois que os ratos foram fixados nos instrumentos de estereotaxia em decúbito ventral, um
instrumento para beber artificial foi inserido no laringofaríngeo. O instrumento foi composto por um
tubo de infusão (tubo de polietileno, diâmetro de 0,42 mm) através de um tubo guia (tubo de polietileno,
diâmetro 1,9 mm) na extremidade com tampa de borracha, e a extremidade do cateter conectada com o
palato mole, para infusão. . Em seguida, a pele média do crânio foi incisada e exposta pela remoção dos
tecidos subcutâneos e do periósteo . Posteriormente, um orifício escavado pela broca craniana e uma
craniotomia foi aberto no occipital com o crânio removido. Quando todo o cerebelo foi exposto, as
meninges sobre a medulaforam removidos para passar os eletrodos de tungstênio. E a superfície exposta
foi coberta com óleo de parafina morno. Durante todo o experimento, a temperatura corporal dos
animais foi mantida entre 36 e 38 ° C por um dispositivo de controle de temperatura.

2.3 . O EMG e gravações extracelulares

A EMG do milo-hióideo unilateral foi registrada para monitorar as atividades de deglutição com um
registrador (CED 1401 e 1902, Grã-Bretanha) filtrado e amplificado com 1000 Hz. Após a condição básica
do rato ser estável, um eletrodo de tungstênio (127 μm de diâmetro; 9-12 MΩ, Tungsten 577200,
americano) foi fixado na hélice automática (multichannelystems, Alemanha). Durante o experimento, o
tungstênio foi colocado estereotaxicamente 1,8 a 2,2 mm lateralmente à linha média, 1 a 4 mm em
relação ao obex e 2 a 2,5 mm abaixo da superfície da medula [M. Amri and Car, 1988 ]. O obex foi usado
como marcador para posicionar os interneurôniosno VLM e a leitura do monitor foi registrada quando
o eletrodo se aproximava do alvo com a velocidade de 200 μm / s. Pelo menos dois neurônios podem ser
encontrados em cada rato quando a cada 200 mm foi considerado um novo neurônio.

2.4 . Infusão de água destilada dupla (DDW) e EA Stimulation

O instrumento foi preenchido com DDW e conectado a uma bomba de microinjeção automática
(Harvard Pump11Elite, EUA). Uma vez que os neurônios de descarga da localização do alvo foram
encontrados, a infusão DDW foi usada para induzir o reflexo da deglutição com 180 ul / min por 30 s. Os
números de deglutição foram registrados como a deglutição básica. Foi reconhecido como neurônio
relacionado à deglutição (SR) quando a descarga neuronaljuntamente com atividades de deglutição.
Depois que a linha de base ficou estável, a EA foi administrada em Lianquan (CV23) com 1 mA, 2HZ por
1 min, usando um estimulador eletrônico (Multichannels Systems, STG4002-1.6 mA, Alemanha). O
acuponto de referência estava a 0,5 cm do lado de CV23 e a profundidade era de cerca de 13 mm abaixo
da superfície. Simultaneamente, as respostas de disparo de neurônios foram registradas. E o DDW foi
infundido novamente por 30 s com os números de deglutição documentados em sincronia. Da mesma
forma, a EA foi dada à Neiguan (PC6) (6–7 mm de profundidade e 0,5 cm de lado como referência) com
registro das respostas dos neurônios e dos números de deglutição após a infusão de DDW. No EA, mas
infusão DDW foi operado, em seguida, os números de deglutição e respostas dos neurônios foram
registrados como controle. Os neurônios foram reconhecidos como os neurônios de resposta
eletroacupuntura (ER) quando as taxas de descarga foram aumentadas em 15% ou diminuídas em 15%. E
nenhum neurônio de resposta foi reconhecido dentro de 15%.

2.5 . Localização histológica para local de gravação

Depois que os registros de descarga neuronal foram completados, 10 μA de corrente direta negativa
foram dados através do eletrodo de tungstênio por 5 s para marcar a situação do registro dos neurônios.
Posteriormente, os ratos foram eutanasiados e perfundidos através do coração com solução salina
normal seguida de paraformaldeído a 4%. Em seguida, os tecidos do cérebro foram removidos e fixados
dentro de paraformaldeído a 4% durante a noite. Após a desidratação com 30% de sacarose por 72 horas,
cortes congelados do cérebro foram cortados e corados com vermelho neutro. Locais gravados que não
estavam localizados corretamente no VLM foram excluídos do estudo.

2.6 . Imunofluorescência
Vinte e quatro ratos SD foram divididos aleatoriamente em três grupos e pré-tratados com EA no VC23
e PC6 por 20 min. Após 40-60 min, os ratos foram excessivamente anestesiados com hidrato de cloral
(100 mg / kg, ip), seguido pela abertura da cavidade torácica. Em seguida, uma perfusão com 200 ml de
solução salina tamponada com fosfato (PBS, pH 7,4) e 250 ml de formalina tamponada neutra a 4% (NBF)
foi administrada transcardiamente por ordem. Depois disso, os cérebros foram rapidamente removidos
e colocados em 4% NBF a 4 ℃ durante a noite. Os tecidos do cérebro foram colocados em sacarose a
30% até a sedimentação. Secções coronais (40 μm) foram coletadas de caudal para rostral de VLM. Então
as fatias do cérebroforam lavados com PBS na mesa por três vezes. Depois de virados para albumina de
soro bovino a 3% (BSA) e incubar durante 1 h em 37? Banho de ua, as fatias de cebro foram transferidas
para um fluido de trabalho de anticorpo primio (1: 500) durante 1 h e depois transferidas para 4?
Tirando da geladeira, as seções foram lavadas três vezes na mesa antes de cada passo. Posteriormente, as
fatias do cérebro foram incubadas no segundo líquido de trabalho do anticorpo (1: 500) com 37 ℃ de
banho de água por 1 h e montadas na lâmina de vidro. Então o DAPI (1: 5000) foi usado para manchar a
energia nuclear. Finalmente, o glicerol combinado com PBS foi usado para selar. As amostras foram
armazenadas em -20 ℃ ou observadas em microscópio confocal e fotografadas.

2.7 . Análise de dados

Os dados foram analisados nos softwares Spike 2, Neuro-Explorer, Microsoft Excel 2010 e SPSS versão
19.0. As frequências dos neurônios foram calculadas dentro de um minuto. E as taxas de descarga
aumentada ou diminuída de neurônios após EA foram contadas como média e desvio padrão (M ± SD), o
mesmo que os números de expressões c-fos em VLM. A imagem J foi usada para calcular o número de
células positivas para c-fos. A comparação entre os grupos foi feita com o teste do qui-quadrado ou
análise de variância one-way (ANOVA) quando comparados mais de dois grupos. P <0,05 foi considerado
estatisticamente significativo entre os grupos.

3 . Resultados

3.1 . As características gerais dos neurônios relacionados à deglutição (SR) em VLM

Após a localização histológica, 72 neurônios foram registrados corretamente em VLM, incluindo 60
neurônios de SR e 12 neurônios sem resposta. A localização registrada foi mostrada na Fig. 1 , que se
refere ao Atlas escrito por Paxions & Watson [George Paxinos e Watson, 2009 ]. O resultado mostrou que
os interneurônios registrados no VLM estavam acima da AMB. A figura 2 mostra que a infusão de DD de
30 s provocou a deglutição e identificou neurônios de SR. Entre os neurônios do SR, foram encontrados
dois tipos de neurônios, que disparariam após ou em conjunto com as atividades de deglutição
iniciadas. Tipo um mostrou que os neurônios descarregamsimultaneamente com atividades de
deglutição. Talvez eles possam ser reconhecidos como os neurônios "primitivos". Além disso, houve dois
comportamentos nos neurônios tipo um, um desapareceu após as atividades de deglutição
interrompidas e outro de alta contínua, que se mostrou nas Fig. 3 A e B. Os neurônios do tipo dois
começaram a secar depois que as atividades de deglutição começaram por um tempo. pode ser
conhecido como os neurônios "tardios". A Fig. 3 C e D ilustrou que as descargas de neurônios
continuariam, independentemente de as atividades de deglutição cessarem mais cedo ou mais tarde.
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A Fig. 1 . A Figura 1 mostrou que os tecidos corados da MLV (esquerda), comparados com as
estruturas anatômicas apresentadas nos mapas e atlas publicados da região (direita). A caixa
vermelha era o ponto de dano e o canto superior esquerdo era a imagem ampliada. Era -12,00
longe do Bregma , que mostrou que os neurônios registrados estavam acima do AMB.

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Fig. 2 . A figura 2 mostrou a infusão de DDW. As duas setas foram marcadas no processo de
infusão de DDW. A mancha preta abaixo representou uma deglutição na EMG.
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Fig. 3 . Dois tipos de neurônios SR no VLM. A seta acima representou uma deglutição na EMG
(A). A e B: digite um neurônio de SR. A: Neurônios descarregados juntos com as atividades de
deglutição. B: Os neurônios começaram a secar quando as atividades de deglutição começaram e
continuaram a descarga após as atividades de deglutição interrompidas. Os neurônios tiveram a
descarga básica o tempo todo. C e D: digite dois neurônios do SR. Os neurônios liberados após
um curto período de tempo das atividades de deglutição começaram e continuaram,
independentemente da atividade de deglutição ter continuado (C) ou interrompido (D). EMG
(Eletromiografia do músculo milo-hióideo), VLM (descargas neuronais da medula ventrolateral),
Espigas (frequências de descarga de neurônios extraídas de registros brutos de VLM).

3.2 . Efeito do EA em diferentes acupontos na deglutição e relação entre os números de

deglutição e os neurônios
Os números de deglutição foram contados durante a infusão de DDW após o experimento. Os dados
mostraram que EA no CV23 poderia aumentar mais números de deglutição em comparação com PC6 e
controle ( Fig. 4 ). E EA no CV23 foi mais eficaz do que PC6 (P <0,05 ). Além disso, descobrimos que os
números de deglutição foram alterados com as taxas de descarga do neurônio ( Fig. 5 ). Para análise da
relação entre os números de deglutição e as taxas de alta dos neurônios, os números de deglutição e as
taxas de descarga neuronal foram contados durante a deglutição em 5 min. Em seguida, foi realizada a
análise de correlação no SPSS 19.0 e Microsoft Excel 2010. Os resultados mostraram que os números de
deglutição foram linearmente relacionados às taxas de descarga neuronal (R² = 0.515 P <0.01). À medida
que os números de deglutição se somavam, as taxas de descarga do neurônio aumentavam, o que
indicava que os neurônios relacionados à deglutição eram mais ativos durante a deglutição.

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Fig. 4 . Os números de deglutição após EA em diferentes pontos de acupuntura. As coordenadas

longitudinais foram números de deglutição e as ordenadas horizontais foram acupontos
diferentes. Houve significância entre eles (P <0,05).
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Fig. 5 . Relação dos números de deglutição e taxas de descarga neuronal . As coordenadas

longitudinais foram os números de deglutição e as ordenadas horizontais foram as taxas de
descarga neuronal dos neurônios registrados no VLM.

3.3 . A eficácia do EA nas taxas de descarga de neurônios e padrões de pico

Após neurônios relacionados à deglutição (SR) foram determinados, EA foi dada a CV 23 e PC6 para
identificar os neurônios de resposta eletroacupuntura (ER). 60 neurônios SR mostraram excitação ou
inibição para EA em CV23 e PC6. Como demonstrado na Tabela 1 , 50% desses neurônios foram
excitados para EA em CV23, enquanto apenas 28,3% para PC6. E as freqüências de descarga dos
neurônios aumentaram 10,30 ± 1,99spike / s por EA no CV23, que aumentou mais que PC6 (5,56 ± 1,32
spike / s). Por outro lado, 31,7% dos neurônios demonstraram respostas inibidas ao CV23 e 21,7% ao
PC6. E as freqüências de descarga dos neurônios diminuídas pelo EA no CV23 (9,86 ± 1,71spike / s)
foram muito menores do que o PC6 (6,17 ± 1,77 spike / s) com diferenças significativas ( P <0,05 , Fig. 6).
No total, havia 81,7% dos neurônios de SR respondiam a EA em CV36, mas 18,3% não apresentavam
resposta. Para PC6, 50% deles responderam ao EA, enquanto os outros não. A Fig. 7 mostrou três tipos
de neurônios respondidos ao EA em diferentes acupontos, ou seja, neurônios de excitação, inibição e
sem resposta.

Tabela 1 . Taxas de resposta neuronal a EA em diferentes pontos de acupuntura.

Acupontos Neurônios excitatórios Neurônios inibitórios Nenhum

neurônio de resposta Taxa de resposta neuronal (%)

CV3 30 19 11 81,7% ＊
(Lianquan)

PC6 (Neiguan) 17 13 30 50%

＊ P <0,05 vs PC6 com diferença significativa.

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Fig. 6 . A Figura 6 foi a taxa de descarga em cada segundo de diferentes neurônios respondidos.
Houve diferença significativa entre CV23 e PC6 em três tipos de neurônios (P <0,05).

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Fig. 7 . Houve três respostas dos neurônios após a EA. A parte esquerda foi a descarga dos
neurônios antes da EA e a direita foi após a EA. (EMG: Eletromiografia do músculo milo-hióideo ,
VLM: descarga dos neurônios da medula ventrolateral , Espigões: Frequências de descarga de
neurônios extraídas de registros brutos de VLM) A: Neurônios excitatórios para EA. B: Neurônios
inibitórios para EA. C: Nenhum neurônio de resposta ao EA.
Para análise dos padrões de neurônios do SR em VLM, os neurônios foram classificados e analisados em
neuro-explorador com histogramas Raster, Autocorrelogramos, Rasters e formas de onda de neurônios.
Os resultados mostraram que os números de neurônios mudaram de três para cinco após EA em CV23,
o que indicou que EA em CV23 poderia ativar dois neurônios em VLM. E um neurônio foi ativado após
EA no PC6. As variâncias dos histogramas Raster, Autocorrelograms, Rasters e formas de onda de
neurônios após EA em CV23 e PC6 foram mostrados na Fig. 8 .

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A Fig. 8 . Diferença de padrões neuronais após EA no CV23 e PC6 analisados no software neuro
explorador. A: Padrões neuronais do grupo CV23. Esquerda foram os padrões de neurônios antes
 da EA no CV23 e à direita foram os padrões de neurônios após EA. Da esquerda para a direita, e
de cima para baixo, havia histogramas de taxa, rasters, autocorrelogramas e as formas de onda dos
neurônios de cada lado. B: Padrões neuronais antes e depois da EA na PC6.

Os dados acima sugeriram que o EA no CV23 poderia aumentar as taxas de disparo e alterar os padrões
de pico dos neurônios no VLM. Obviamente, o EA no CV23 foi mais efetivo na regulação dos neurônios
do SR do que o PC6 no VLM, o que pode indicar que o CV23 poderia modular a função parcial da
deglutição através dos neurônios no VLM.

3.4 . Expressões C-fos

Após a análise dos dados, as expressões de c-fos no grupo CV23 e no grupo PC6 foram aumentadas
obviamente quando comparadas com o grupo controle. Os números das células c-fos positivas foram
apresentados com média e desvio padrão (M ± DP) ( Tabela 2 ). A Fig. 9 exibiu as expressões de células
positivas para c-fos em VLM após EA em diferentes pontos de acupuntura. EA em diferentes pontos de
acupuntura poderia aumentar as expressões c-fos, o que indica que o EA no CV23 pode ativar os
neurônios do SR em VLM. Aqueles demonstraram que EA no CV23 poderia regular as atividades dos
neurônios de SR parciais no VLM.

Tabela 2 . C- fos expressões de neurônios SR após EA em diferentes pontos.

Acupontos CV23 PC6 Ao controle

C-fos 20,63 ± 2,35 ＊ △ 14,13 ± 1,78 ＊ 6,88 ± 1,42

＊ P <0,05 vs grupo controle, △ P <0,05 vs grupo PC6 com diferença significativa diferente.

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 Fig. 9 . A Fig. 6 foi a expressão de células C-fos positivas em VLM após EA em diferentes pontos
de acupuntura. A figura mostrou que as expressões c-fos foram fotografadas com menos de 20
vezes o espelho. Entre eles, os azuis eram o núcleo e os gramados eram as células positivas para c-
fos expressas no núcleo. A foi o atlas dos ratos e o cru vermelho mostrou a posição do VLM
(acima do AmbL). B era o grupo CV23 (A caixa vermelha no canto superior esquerdo era a imagem
ampliada de c-fos), C era o grupo PC6 e D era o grupo de controlo, o cru vermelho eram as culas
positivas para c-fos em cada grupo.

4 . Discussões
O presente estudo destinado a detectar o efeito de EA em CV23 em engolir e (SR) relacionados com a
deglutição interneurónios em VLM. Os interneurônios SR em VLM foram identificados no estudo
anterior [M. Amri and Car, 1988 ]. Os interneurônios SR são importantes no CPG da deglutição como
neurônios de troca que transmitem as conduções da deglutição a outros neurônios motores [ Jean, 1984
]. Aqui, o método eletrofisiológico foi utilizado para registrar os interneurônios da deglutição em MLV e
o efeito da AE em diferentes acupontos nesses neurônios foi observado. Nossos resultados mostraram
que o EA no CV23 poderia aumentar os números de deglutição e os neurônios de SRtaxas em VLM. O
estudo anterior mostrou que o disparo do neurônio no córtex poderia ser alterado pela acupuntura, que
induzia respostas diretas aos neurônios [C. Men et al., 2011 ]. A taxa de descarga foi um importante
indicador de atividades neuronais. No presente, as taxas de descarga de neurônios e os padrões de
espículas foram alterados pela acupuntura no CV23, o que está de acordo com os estudos anteriores [SF
Hsu et al., 2011 ].

Na pesquisa clínica, os estímulos nos músculos supra-hióideos ou faríngeos foram eficazes na melhora
da função da deglutição [ Lee et al., 2017 ; Konecny e Elfmark, 2017 ; Jayasekeran et al., 2010 ; Suntrup et
al., 2017 ]. Enquanto isso, as estimulações elétricas nos músculos infra - hióideos para voluntários
saudáveis poderiam aumentar o grau de elevação do hioide durante a deglutição [ Park et al., 2009 ].
Além disso, a estimulação elétrica neuromuscular (EENM) à orofaringe foi relatada que poderia
aumentar ou aumentar a contração dos músculos da deglutição através do feedback sensorial da
reorganização da faringe ou cortical [Huang et al., 2014 ]. Aqueles indicaram que os estímulos físicos nos
músculos mandibulares foram eficazes na função da deglutição na clínica. E os estímulos estavam no ou
próximo do ponto de acupuntura do CV23. A acupuntura foi um estímulo somático científico mais
antigo [ Zhao et al., 2016 ], que poderia induzir a modulação das atividades cerebrais [ Yi et al., 2013 ]. Foi
provado que funciona ativando as vias particulares do sistema nervoso central [ Zhao, 2008 ]. Zhang R et
al demonstraram que os sinais de acupuntura foram conduzidos pelas fibras mielinizadas e não
mielinizadas para o sistema nervoso central [ Zhang et al., 2014]. E a cooperação de sinais elétricos e
químicos da acupuntura foi importante para o seu tratamento clínico eficaz [J. Shen, 2001 ]. Portanto, a
EA no CV23 poderia excitar os nervos sensoriais e musculares específicos e, em seguida, conduzir os
sinais ao córtex para a regulação da deglutição.

Como mostrado em nosso estudo, o EA no CV23 poderia ativar especialmente as atividades dos
neurônios SR no VLM. O CV23 foi localizado na linha de frente da área cervical anterior e estava acima
da maçã de Adam, localizada na depressão da borda superior do Hyoid. Havia nervo mandibular,
trigêmeo e vago , que cooperaram com o nervo laríngeo superior para controlar a função normal do
músculo faríngeo [ Feng-yan et al., 2007 ]. Em outro aspecto, havia muitas fáscias, como a fáscia cervical
profunda abaixo de CV23, que poderiam ser vistas como pontos-gatilho para o tratamento de doenças.
Além disso, o CV23 estava no vaso de concepção que sempre foi usado para curar a doença neuropática.
A disfagia foi causada por acidente vascular cerebral levando aodiscinesia dos músculos laríngeos
dominados pelo nervo laríngeo superior. As entradas sensoriais da deglutição eram compostas
principalmente pelo ramo maxilar do nervo trigêmeo, do nervo glossofaríngeo e do nervo vago ,
especialmente o ramo laríngeo superior (NLS) localizado abaixo de CV23 [ Doty, 1968]. Portanto, os
sinais da EA no CV23 poderiam ser conduzidos para a deglutição de CPG através dos músculos e nervos
adjacentes. Foi demonstrado que a acupuntura teve efeitos específicos na região cerebral relevante
[Kaptchuk, 2002] e atividades neuronais corticais [JLFang et al., 2004]. Enquanto isso, a acupuntura em
pontos que pertencem aos meridianos difere significativamente dos pontos circundantes de acordo com
a impedância da pele [ Rezaei et al., 2012 ]. Portanto, o EA no CV23 teve efeitos específicos sobre os
neurônios relacionados à deglutição no VLM.

O PC6 foi usado como o acuponto controle em nosso estudo, que estava acima dos nervos medianos que
foram inervados pelos segmentos do gânglio inferior [ Xin et al., 2017 ]. Nosso experimento mostrou que
o EA no PC6 induziu muito menos respostas nos neurônios SR do que no CV23. Considerando
diferentes meridianos dos dois acupiontes pertencentes, diferentes respostas de neurônios poderiam ser
interpretadas pelas teorias dos meridianos na China. Ou seja, o CV23 foi um dos pontos de acupuntura
do Vaso Concepção que estava na linha média anterior circundado por músculos da deglutição e usado
principalmente para o tratamento da disfagia [Chan Sze-ling, 2015 ]. Enquanto PC6, pertencente ao
meridiano do coração, foi mais freqüentemente usado para o coração doenças relevantes, incluindo a
hipertensão [Li e Longhurst, 2010 ]. Totalmente, a EA no CV23 foi mais eficaz na deglutição e seus
músculos relevantes do que PC6 através da regulação de interneurônios em VLM.

Nossos resultados mostraram que as expressões c-fos foram aumentadas após EA em CV23 e PC6, o que
indicou a ativação de neurônios em VLM. A proteína Fos poderia ser usada como um marcador que
indicava a ativação de atividades neuronais através de muitos estímulos [ Kwak et al., 2011 ; He et al.,
2013 ]. Dentro deles, a acupuntura era uma maneira eficaz de ativar neurônios no sistema central. Os
estudos anteriores mostraram que a EA poderia reduzir as expressões c-fos na área postrema (AP) ou
inibir as expressões c-fos nos neurónios oxitocinérgicos do núcleo paraventricular no cordão cervical
superior [ Li et al., 2017 ; Yong et al., 2016]. No presente estudo, c-fos foi medido em neurônios de VLM
após EA em CV23 e PC6. Em comparação com o grupo controle, as expressões c-fos nos grupos CV23 e
PC6 foram aumentadas. E o número de células positivas para c-fos em CV23 expressou mais que PC6 (P
<0,05). Ele indicou que os neurônios SR foram ativados por EA em CV23 do ponto de vista da substância.
Integrado com os estudos acima, podemos ressaltar a importância do CV23 na função da deglutição.

O presente estudo revelou que a EA no CV23 poderia regular a função da deglutição do ponto de vista da
eletrofisiologia e da substância. Os resultados demonstraram o efeito do acuponto submaxilar em parte
da via neural da deglutição na perspectiva do mecanismo biológico. Esses achados poderiam aumentar a
evidência da acupuntura no CV23 para o tratamento da disfagia após o AVC.

Conflito de interesses
Os autores declaram não haver conflito de interesses.

Agradecimentos
O estudo foi apoiado pela Fundação Nacional de Ciências Naturais da China (nº 81373800 ) e pelo
Projeto Chave da Fundação Nacional de Ciências Naturais da China (nº 81230088 ).

Artigos recomendados Citando artigos (0)

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© 2018 os autores. Publicado pela Elsevier Inc.

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