IDENTIFICACIÓN DE HONGOS MEDIO AMBIENTALES

Los hongos presentan básicamente dos tipos de morfologías: una multicelular denominada
filamentosa y otra unicelular denominada levaduriforme. Los hongos multicelulares filamentosos
también son llamados mohos, están dotados de un micelio verdadero, microscópicos, y cuyo
crecimiento en los alimentos se conoce fácilmente por su aspecto aterciopelado o algodonoso. Las
levaduras son hongos muy difundidos en la naturaleza. Pueden hallarse sobre las frutas. Las flores,
los granos, en el suelo, en el intestino de los animales, etc. En este ejercicio observaremos los
hongos cultivados en el agar sabouraud. Como señala lo expuesto, es un agar muy rico en glucosa y
cuyo pH bajo (pH 5-5.6) dificulta el crecimiento de bacterias, facilitando el crecimiento de hongos.
La temperatura óptima de crecimiento de la mayoría de los hongos patógenos se situa entre 28 y
30 C, siendo ésta la temperatura que se recomienda para incubar todos los cultivos micológicos.
OBSERVACION MACROSCÓPICA

Se les llama macrohongos, al grupo constituido por cuerpos fructíferos que pueden ser observados
a simple vista, entre ellos las “orejas de palo”, “sombrillas”, “estrellas de tierra”, “hongos
gelatinosos”, “tipo coral”, “lenguas de tierra”, “costras sobre madera”, etc. Recolección Resulta
indispensable llevar a cabo el siguiente procedimiento para que las colecciones tengan valor
científico:

1. Tomar nota del sustrato, y cuando sea posible anotar datos sobre la vegetación que rodea el
espécimen.

2. Tomar fotografías de los especímenes.

3. Utilizar una cuchilla o puñal para remover el hongo. Es necesario introducir la cuchilla unos
cuantos centímetros hacia abajo de la base del hongo para no cortar el estípite y la volva, cuando
este está presente.

4. Remover el hongo con una porción pequeña de sustrato en su base.

5. Recolectar especímenes tanto jóvenes como maduros, y en la mayor cantidad posible.

6. Colocar los especímenes removidos sobre papel aluminio (“nunca en bolsas plásticas”), de
manera que se puedan cerrar los extremos sin producir daños a la muestras.

7. Colocar las recolecciones dentro de una canasta adecuada (nunca dentro de mochilas, bolsas
plásticas o de papel), para su traslado al laboratorio o área de trabajo. (Mata, Umaña, & Chaves,
2009)

La descripción macroscópica de los hongos debe realizarse en el laboratorio o área de trabajo lo

más pronto posible, ya que la mayoría de ellos pierden humedad en muy poco tiempo y por lo
tanto se producen cambios de tamaño y color, aspectos muy importantes para efectos
taxonómicos. Por tal motivo, es recomendable hacer las recolectas por la mañana y describir los
especímenes por la tarde, siguiendo los siguientes pasos:

2.1. Píleo Es la parte superior o sombrero de un ascocarpo o basidiocarpo.

2.2. Himenio o Superficie fértil Es la superficie ya sea lisa, porosa, lamelada, dentada, verrucosa,
reticulada, con venaciones, etc; que generalmente esta cubierta por estructuras reproductivas
microscópicas tales como esporangios, ascos, basidios, conidios, los cistidios y las paráfisis son
estériles cistidios, paráfisis, esporas, etc.

2.3. Estípite Es el pie que sostiene el píleo de un basidiocarpo, o de un ascocarpo.

2.4. Anillo El anillo son remanentes de un velo parcial que cubre el hongo en estadíos tempranos
del desarrollo. Cuando este está presente, se debe describir la posición, si es movible ó fijo y el
color.

2.5. Volva La volva son remanentes del velo universal que recubre todo el hongo en estadíos muy
tempranos de desarrollo. Cuando se encuentre presente, se debe describir si tiene forma de saco,
u otras formas descriptibles. Además si es membranosa, frágil, formando como parches o
zonaciones en la base del estípite.

2.6. Hábito de crecimiento Es la apariencia general externa y característica, o manera de crecer de

un hongo. Anotar si crece en forma solitaria, esparcido, agrupado ó formando racimos.

OBSERVACION MICROSCÓPICA

Los microhongos forman parte del grupo de hongos que generalmente no son observables a
simple vista, sino que deben usarse lentes de aumento para recolectarlos e identificarlos. Dentro
de este grupo se encuentran los Oomycetes que son hongos acuáticos, terrestres y parásitos de
plantas; las Royas, llamadas así debido al color rojizo de sus esporas, los Carbones, que forman
masas pulverulentas de esporas negras, estos dos estos dos últimos pertenecen a los
Basidiomycetes, otros los encontramos en los Ascomycetes (la mayoría) y en los hongos
imperfectos.

Recolección

 Debido a que existe una gran diversidad de microhongos, estos los podemos encontrar en
muchos hábitats, por lo que no hay un método único de recolecta.
 Un factor importante en la recolecta de microhongos es dónde buscarlos. Debe tomarse
en cuenta que, la mayoría viven en hábitats húmedos.
 En su mayoría los cuerpos fructíferos de los microhongos son de vida corta, o bien crecen
en épocas definidas. Debido a estas características, una mayor frecuencia de los viajes de
recolecta, en la misma área, podrían proveer las mejores oportunidades para
encontrarlos.
 Algunos microhongos viven en hábitats específicos: folícolas (sobre hojas), otros se
encuetran sobre insectos, hipógeos (bajo suelo), y otros con huéspedes específicos.
 Cuando se recolecta microhongos, es indispensable una lupa 10X, tanto para encontrarlos,
como para observar detalles de los cuerpos fructíferos. Además se debe de disponer de
recipientes adecuados para transportar las colecciones al laboratorio como: bolsas de
papel de varios tamaños, algunos recipientes con tapa que podrían también ser útiles para
especímenes delicados, la lupa, una cortadora, un formón, mazo pequeño, una cuchilla y
un serrucho “rabo zorro”, serán suficientes.
  Registrar los datos de recolecta es un aspecto muy importante: localización geográfica,
nombre del recolector, sustrato (identificar cuando es posible),y fecha.
 Los especímenes deben ser examinados lo más pronto posible. Apuntes sobre la forma,
color y textura pueden cambiar cuando el espécimen se seca. “En algunos grupos de
microhongos si la revisión debe ser postergada, los especímenes deberán mantenerse
frescos en una cámara húmeda, que consiste en un recipiente limpio que puede ser cajas
de petri o cajas plásticas con tapa, con papel toalla húmeda en el fondo del mismo, al
menos por menos de 24 horas, ya que los especímenes pueden descomponerse”.

Medios de Cultivo

Los medios de cultivo caen dentro de dos categorías: natural y sintéticos.

1. Los medios de cultivo naturales incluyen sustratos como trozos de madera, hierba, semillas,
hojas, harina de maíz, harina de avena, y germen de trigo.

2. Los medios sintéticos son deseables donde la composición del medio puede ser conocida, éstos
son importantes en estudios fisiológicos.

Para la preparación de los medios de cultivo

Se deben llevar a cabo varios requerimientos: Esterilización de material de cristalería, que incluye
cajas de petri, tubos de ensayo, pipetas, etc., mediante calor seco (de 150 a 160 C durante una
hora) o autoclave.

Es necesario que el vaciado del medio de cultivo en cajas de petri, tubos de ensayo, etc., se lleve
acabo lo más asépticamente posible, ya sea en una sala de cultivo apartada o en un lugar limpio y
libre de corrientes de aire y polvo. La mesa de trabajo debe limpiarse con una solución de cloro,
las manos de la persona deben estar limpias y el material de laboratorio, para impedir la
introducción de microorganismos contaminantes.

Los diferentes medios de cultivo, previamente ya pesados y mezclados en agua estéril, se preparan
en erlenmeyers que posteriormente se tapan con algodón y papel de aluminio, se colocan en una
autoclave a 120 C y a 15 libras de presión durante 25 minutos. Los medios de cultivo esterilizados
se dejan enfriar durante cierto tiempo y posteriormente se vierten en las cajas de petri. En caso de
que al medio se le añada agar, se deberá dejar que este último se solidifique para que el medio de
cultivo pueda entonces ser utilizado para cultivar. Para que no se contamine con bacterias se le
agrega al medio de cultivo una solución antibiótica.
Para preparar los viales, el medio de cultivo es agregado al tubo de ensayo en una cantidad
apropiada y son cerrados con tapón de algodón o una tapa. Los tubos no deben de estar más de la
mitad llenos. Si se usan tapas con rosca estas deben estar flojas para permitir el intercambio de
gases durante el autoclavado. Una vez sacados de la autoclave los tubos son colocados sobre una
tabla con la parte superior ligeramente elevada. Esto da como resultado un agar extendido que
provee una mayor superficie de crecimiento para el hongo. Cuando esta frío, los tubos pueden
estar en forma vertical. (Mata, Umaña, & Chaves, 2009)

CULTIVO EN CÁMARA HUMEDA

Un dispositivo para cultivo en cámara húmeda es un sistema que c onsta de una placa
petri conteniendo un disco de papel filtro y una varilla de vidrio de “U” que soporta dos laminas
porta y cubre objetos. Asépticamente se selecciona una pequeña porción de medio de
cultivo estéril (Agar Saboraud), y se coloca sobre la lámina porta objetos. Realizada la
siembra del hongo en estudio, la preparación se cubre con la otra lamina y el papel filtro
humedece conservándola asepsia. La placa es incubada a temperatura ambiente (20 – 25º C) por 4
a 5días (Biol. Ms. Decheco, Alicia. 2010).

Agar Sabouraud :

Es un medio de cultivo muy utilizado para aislar hongos de animales. Sirvepara el aislamiento y
mantenimiento de hongos en tubo inclinado. Debido a su composición, los hongos crecen
exuberantemente y esporulan bien. Es el medio estándar para observar la morfología típica de los
hongos, pero no es el medio ideal de crecimiento o para estudiar la esporulación.
Caracterización Morfológica:

El primer paso en el estudio de los hongos entomopatógenos es realizar una correcta identificación
de la especie con la que se está trabajando. Existen varias claves de identificación de hongos, una
de ellas es “CMI descriptions of pathogenic fungi and bacteria” perteneciente a la Commonwealth
Micological Institute, donde se encuentran descritas las especies de hongos entomopatógenos. Esta
caracterización se basa en la descripción de la colonia (macroscópica) así como de las estructuras
del hongo (microscópica).

Descripción de la colonia :

1. Con un ansa de siembra, tocar ligeramente el hongo a propagar y sembrar por punción en ángulo
recto en el centro de la placa conteniendo el medio de cultivo PDA.
2. Incubar a 20o C durante 15 días.
3. Observar la forma de crecimiento de la colonia, tamaño (el cual se mide de lado a lado pasando
por el centro en dos puntos de la colonia), aspecto, textura y coloración de ambas caras y la
producción de pigmentos.

Aspecto y coloración del crecimiento de hongos porambas caras de la placa. A y B, haz de

la placa; C y D, envés de la placa. A y C, CIP79 Paecilomyces fumosoroseus. B y D, CIP81
Beauveria bassiana.
DISCUSIONES

 Los hongos son organismos más desarrollados que las bacterias. Son estructuras
normalmente pluricelulares con un metabolismo complejo. Los hongos filamentosos o
mohos forman, a partir de las esporas o conidios una vez que germinan, filamentos
llamados hifas que, a su vez, dan lugar al micelio o cuerpo vegetativo, este da lugar a las
colonias. Se desarrollan fácilmente a un pH ácido entre 4 - 6, a una humedad relativa
superior a 65 % y temperatura entre 25 - 30 ºC (Florian, 2004).
 Los hongos se transmiten por el aire, el agua, a través del suelo, de las personas y de los
animales. En su propagación por el aire, el aerosol atmosférico cumple un importante
papel, pues posee un gran número de partículas de diferentes orígenes, formas y
tamaños, suspendidas en el aire.
 Observamos que en el medio ambiente que analizamos(cocina y dormitorio) encontramos
hongo como :
1. Cladosporium sp: Es un hongo filamentoso, perteneciente al filo Ascomycota y al
grupo de los dematiáceos, caracterizados por presentar una coloración oscura.
Microscópicamente presenta hifas finas, septadas, ramificadas de color hialino a
marrón. Las hifas sostienen cadenas ramificadas de conidios unicelulares,
elipsoides o cilíndricos, algunos con forma de escudo debido a las cicatrices de
unión entre ellos. Los conidios se forman por gemación sucesiva del conidio
anterior, estando el conidio más joven y pequeño al final de la cadena.
Macroscópicamente forma colonias aterciopeladas, pulverulentas o vellosas, con
pliegues radiales, de color blanco o crema que tienden a oscurecerse en tonos
verde oliva y, a veces, gris verdoso o marrones. (Cladosporium spp., 2014)
2. Aspergillus sp: El color es la principal característica macroscópica para la
identificación de los grupos de aspergilos. Poseen distintos tonos de verde, pardo,
amarillo, blanco, gris y negro. Las cabezas conidiales presentan bajo el
microscopio cuatro formas básicas: globosa, radiada, columnar o claviforme y a
simple vista las más grandes suelen parecer diminutas alfileres sobre el substrato.
La ubicuidad de los aspergilos es debida a su capacidad para crecer a diferentes
temperaturas sobre substratos con diverso contenido de humedad. (Leonor)
3. Alternaria sp: Es un hongo de crecimiento rápido en diferentes medios de cultivo
como agar Sabouraud, papa dextrosa y harina de maíz; sin embargo, el agar papa
zanahoria es de elección para su identificación. La incubación se realiza a 25°C por
7 días, pudiéndose observar macroscópicamente, colonias planas y algodonosas,
de coloración blanca grisácea inicialmente y posteriormente se observa su
superficie de color café o verde oliva oscuro. (Rivas, 2014)
AISLAMIENTO DE HONGOS DEL MEDIO AMBIENTE

En la naturaleza abundan los microorganismos que se desarrollan estrechamente relacionados

entre sí, de manera que encontramos bacterias, hongos y otros organismos de muy diversos tipos,
tanto de vida libre como parásitos. Para poder estudiarlos y conocerlos se deben cultivar en
medios adecuados aislándolos del suelo o de partes vegetales enfermas. A partir de la primera
muestra que se coloca en un medio de cultivo, se obtiene un cultivo mixto del que se deben tomar
nuevas muestras para realizar otros cultivos, seleccionando las diferentes colonias hasta lograr
que en el medio se desarrolle un solo tipo de organismo, consiguiendo de esta forma un cultivo
puro.

Para realizar aislamientos a partir del suelo, existen diversas técnicas como la de placa directa y la
de dilución en serie. En el caso de que el patógeno se encuentre en las partes vegetales, se puede
proceder a realizar aislamientos directos, utilizar cámaras húmedas, colocar partes vegetales en el
medio de cultivo a través de trampas.

Todos los aislamientos deben hacerse en un medio estéril, es decir, a la flama del mechero, para
evitar contaminaciones. Existen varias técnicas de aislamiento. El aislamiento que se va a llevar a
cabo es el que utiliza las partes vegetales enfermas, con sus tres variantes. (Cuervo , Espadas , &
Zita )

MEDIOS DE CULTIVO

Los medios de cultivo son mezclas de sustancias nutritivas que se utilizan para el aislamiento,
determinación, desarrollo, reproducción e identificación de aquellos organismos productores de
enfermedades de las plantas, que se comportan como parásitos facultativos. Para lograr el
desarrollo y reproducción de las diferentes especies fitopatógenas, los medios de cultivo deben
reunir características especiales, tomando en cuenta los factores que se mencionan a
continuación: Clasificación de los medios de cultivo Los medios de cultivo pueden ordenarse de
acuerdo con su composición o a su consistencia, quedando de la siguiente manera: Nutrientes. En
el medio de cultivo deberán estar presentes elementos nutricionales tales como fuentes de
carbono, nitrógeno, macroelementos (P, K, Mg, Ca), microelementos (Fe, Zn, Mn, Cu, Mo),
vitaminas. (Cuervo , Espadas , & Zita )

 Humedad. Deberá proporcionarse una humedad relativa favorable a los fitopatógenos que
se desee cultivar. Por lo general requieren del 50 % o más.
 Temperatura. Los valores óptimos de ésta son muy variables para cada especie, pero la
mayoría de ellas pueden crecer en un rango de 20 a 25 ºC. Este es un factor determinante
para el desarrollo y la reproducción.
 pH. También en este caso los valores óptimos son muy variables, pero en general los
hongos fitopatógenos se desarrollan y reproducen mejor en pH ligeramente ácidos,
mientras que las bacterias prefieren los ligeramente alcalinos.
 Luz. Este factor en algunos casos afecta la reproducción de los hongos fitopatógenos, pero
en general no influye.
 Asepsia.Los medios de cultivo deben esterilizarse y mantenerse a salvo de cualquier
contaminación por otros microorganismos.
La mayor parte de los hongos se reproducen por esporas:

La mayor parte de los hongos se reproducen por medio de esporas microscópicas, estructuras
reproductivas inmóviles, dispersadas por el viento, agua o animales .suelen producirse en hifas
aéreas especializadas o en estructuras fructíferas. Esta disposición permite que las esporas sean
dispersadas con más facilidad .en algunos hongos las hifas aéreas forman grandes y complejas
estructuras reproductivas llamadas cuerpos fructíferos o esporocarpos,en las cuales se producen las
esporas .la parte que todos conocemos de una seta es un gran cuerpo fructífero. Normalmente no
vemos la mayor parte del organismo, una red casi invisible de hifas bajo la superficie fuera de la
vista en el material en descomposición o el suelo en que se desarrolla .los hongos pueden producir
esporas de manera sexual o asexual a diferencia de la mayor parte de las células animales y
vegetales ,las células fungales por lo regular poseen núcleo haploide .en la reproducción sexual, las
hifas de dos tipos conjugables genéticamente compatibles se reúnen y sus citoplasmas y núcleos se
fusionan ,formando una célula diploide
conocida como cigoto.

En dos grupos de hongos (ascomicetos y basidiomicetos )las hifas se fusionan pero los dos núcleos
distintos no lo hacen de inmediato, sino que permanecen separados con características genéticas
distintas sexualmente compatibles dentro de cada célula ,son dicarioticas ,una condición que se
describe como n+n (porque hay dos nucleos haploides separados ),en lugar de 2n (que implica un
solo núcleo diploide ).las hifas que contienen solo un núcleo haploide por célula se denominan
monocarioticas .

Cuando una espora fungal entra en contacto con una fuente de alimento adecuada ,digamos un
durazno demasiado maduro que ha caído al suelo ,germina y comienza a desarrollarse una hifa
filiforme emerge de la diminuta espora y crece, ramificándose con frecuencia ,pronto un micelio
infiltra el durazno y degrada sus compuestos orgánicos a moléculas pequeñas que el hongo puede
absorber. Los hongos son muy eficaces para convertir nutrimentos en nuevo material celular .si se
dispone de nutrimentos en exceso los hongos los almacenan en el micelio, por lo común en la forma
de gotitas de lípido o glucógeno.

DISCUSIONES
 Se aislo en 2 lugares de la casa( cocina y dormitorio) en placas preti para identificar que
hongos se frecuenta en el medio ambiente y determinar sus características.
 Requerimientos físicos para el crecimiento de los hongos

- Temperatura, en su mayoría crecen bien entre 15-30ºC

- Humedad
- Aireación, en su mayoría son aerobios es decir necesitan aire
- pH, la mayoría crecen bien a pH neutros y ácidos.
- Luz, incide en la velocidad de crecimiento.
- Nutrientes (carbono, nitrógeno, vitaminas, oligoelementos).

CUESTIONARIO pag 17

1. ¿Qué generos de hongos abundan frecuentemente en el medio ambiente?

Los hongos mas comunes en ambientales interiores y comunes son: cladosporium sp, penicillum
sp, alternaría sp y mucor.

2. ¿Qué variaciones medio ambientales modificarían sustancionalmente la presencia de hongos?

Formule su respuesta tomando en cuenta modificaciones en cantidad y en diversidad de
especies.

La alta humedad y escasa radiacion solar de nuestra casa, por poner un ejemplo, propicial
crecimiento de hongos medio ambientales, por lo que en zonas de menor humedad y mayor
radiación solas, la presencia de hongos es mucho menor.

La actividad biológica estos hongos medio ambientales es mayor cuando la humedad relativa esta
en un rango de 81-92%.

La congelación detiene el crecimiento de todos los microorganismos.

Los superiores(hongos, levaduras, helmintos) son las sensibles que las bacterias y muere.

La mayoría los microorganismos crecen a pH entre 5 y 8, en general de hongos y las levaduras son
capaces de crecer a pH mas bajos que las bacterias.

Puesto que la acidificación del interior celular conduce a la perdida del transporte de nutrientes,
los microorganismo no pueden generar las energía de mantenimiento y a una velocidad variable
según las especies se produce la muerte celular.

El CO2 inhibe el crecimiento de microorganismos sobre los alimentos con eficiencia creciente
cuanto mas desciende la temperatura.

Este efecto se manifiesta tanto en bacterias como en hongos por un incremento de la fase de
latencia y del tiempo de generación durante la fase logarítmica.

A temperaturas menores de 16,3° las conidias tardaran mas tiempo para germinar; mientras en
temperaturas superiores a 28,5° el tiempo es menor.

BIBLIOGRAFIA

 Cladosporium spp. (2014). Databio, 1.

 Cuervo , Y., Espadas , M., & Zita , G. (n.d.). Fitopalogía. Mexico: Universidad Nacional
Autónoma de México.

 Gilchrist-Saavedra,, L., Fuentes-Dávila, G., Martínez-Cano, C., López-Atilano, R., Duveiller,

E., Singh, R., . . . García A, I. (2005). Guía práctica para la identificación de algunas
enfermedades de trigo y cebada. Mexico: El Centro Internacional de Mejoramiento de
Maíz y Trigo (.

 Leonor, C. (n.d.). LOS HONGOS DE LOS ALIMENTOS Y FORRAJES. 44-46.

 Mata, M., Umaña, L., & Chaves, J. L. (2009). Protocolo para la
recoleta,descripcion,identificacion y matenimientos de hongos. Costa Rica : Unidad
Estratégica de Hongos, INBio.

 Rivas, L. M. (2014). Alternaria spp. Revista Chilena Infectol , 605-606.

 Paloma Díaz Freire (2006-07), Marta Morán Hevia (2009-2010), Jaime Casal Álvarez (2011-
2012). Micología general. Medical Mycology. Imágenes de microscopía de hongos
patógenos. Universidad de Wisconsin