HONGOS MEDIO DE CULTIVO

 Caldo de Dextrosa Saboureaud (Cat. 222400 450 g )

CULTIVO DE HONGOS Y LEVADURAS

Recomendado como medio estándar en las investigaciones de hongos y levaduras que

contaminan los productos farmacéuticos.

Preparación:

1. Disolver 30 g del medio deshidratado en un litro de agua purificada.

2. Distribuir y esterilizar a 121°C durante 15 minutos. No sobrecalentar pues por su alto

contenido en carbohidratos se obscurece y pierde eficacia.

 Agar Dextrosado de Saboureaud (Cat. 210700 450 g )

CULTIVO Y CONSERVACIÓN DE HONGOS

El Agar de Dextrosa Sabouraud se recomienda para el cultivo y conservación de hongos. Es un

medio que ha sido extensamente usado para el aislamiento de hongos y propósitos generales
en trabajos de Micología.

Preparación:

1.- Suspender 65 g del medio deshidratado en un litro de agua purificada.

2.- Remojar de 10 a 15 minutos.

3.- Mezclar bien hasta que se obtenga una suspensión uniforme.

4.- Calentar agitando frecuentemente y hervir durante un minuto hasta disolución.

5.- Distribuir y esterilizar a 121 ºC durante 15 minutos.

  Agar Dextrosa y papa (Cat. 211900 450 g )

CULTIVO E IDENTIFICACIÓN Y RECUENTO DE HONGOS Y LEVADURAS

Preparación:

1.- Suspender 39 g del medio deshidratado en un litro de agua purificada.

2.- Remojar de 10 a 15 minutos.

3.- Calentar agitando con frecuencia.

4.- Hervir durante un minuto y esterilizar a 121°C durante 15 minutos.

5.- Una vez esterilizado, enfriar a 40 - 45 ºC y vaciar en cajas Petri. 6.- Cuando el medio se va a
utilizar para cuenta en placa para determinar el contenido de levaduras y mohos, la reacción
deberá ajustarse, al momento de vaciar las placas, a un pH de 3.5 + 0.1 Agregar 14 mL de ácido
tartárico esterilizado al 10% a cada litro del medio fundido y enfriado a 45°C. No recaliente el
medio después de la adición del ácido tartárico.

MEDIOS PARA EL AISLAMIENTO DE HONGOS A PARTIR DE SUELO Y AGUA

Los medios que se presentan a continuación son usados para el aislamiento de hongos

 AGAR CLORURO DE SODIO - GLUCOSA - DICLORAN

Usado como medio selectivo para el aislamiento de Aspergillus flavus de suelo.

COMPOSICION CANTIDAD
Peptona 5g
KH2po4 1g
NaCl 30g
Glucosa 10g
MgSO4x7H2O 0.5g
Agar-agar 20g
Agua destilada 1L

Preparación:

1. Disolver todos los componentes en agua destilada y calentar suavemente hasta disolverlos
por completo

2. llevar a autoclavar por 15 min a 121°C/15 Lbs de presión

3. después agregar 50 mg de estreptomicina y servir.

  AGAR DEXTROSA-PEPTONA-EXTRACTO DE LEVADURA (DPYA)

Para aislamiento y enumeración de hongos del suelo.

COMPOSICION CANTIDAD
Dextrosa 5g
KH2PO4 1g
Peptona 1g
MgSO4X7H2O 0.5g
NH4no3 1g
Extracto de levadura 2g
Propionato de Sodio 1g
Agar - agar 20g

Preparación:

1. Disolver todos los componentes en agua destilada y calentar suavemente hasta disolverlos
por completo

2. llevar a autoclavar por 15 min a 121°C/15 Lbs de presión

3. después agregar 30 mg de estreptomicina y servir.

 AGAR KRIGSVOLD Y GRIFFIN

Medio de cultivo semiselectivo para aislamientos de Cylindrocladium spp. del suelo.

COMPOSICION CANTIDAD
Sucrosa 10g
KH2PO4 1g
Peptona 15g
MgSO4X7H2O 0.5g
Bacto oxgall 1g
Sulfato de estreptomicina 50mg
Tetraciclina HCL 50mg
Quintozene ( PCNB) 75mg
Agar 20g
Agua destilada 1L

Preparación:

Disolver la sucrosa, el oxgall, la peptona, las sales y el agar en un litro de agua destilada.
Mezclar bien, esterilizar en autoclave, posteriormente adicionar el sulfato de estreptomicina,
la tetraciclina HCI y el quintozene y servir (Plant Dis. Rep. 59:543).
  AGAR EXTRACTO DE SUELO - ACIDO POLIGALACTURONICO

Usado para el aislamiento de Colletotrichum sp. del suelo.

COMPOSICION CANTIDAD
K2HPO4 4g
KH2PO4 1.5g
Extracto de suelo 25ml
Acido poligalacturonico 10g
Agua destilada 1L
Agar - agar 17g

Preparación:

Agregar todos los componentes en agua destilada y calentar suavemente hasta disolverlos por
completo llevar a autoclavar por 15 min a 121°C/15 Lbs de presión, después agregar 30 mg de
estreptomicina y servir. (Sugar, 2006) 35

 AGAR MARTIN

Usado para el aislamiento de hongos de muestras de suelo y agua.

RB - O RB – M1
COMPONENTES CANTIDAD CANTIDAD
Agua destilada 1000ml 1000ml
Agar - agar 20g 18g
KH2PO4 1g 0.5g
K2HPO4 0.5g
MgSO4x7H2O 0.5g 0.5g
Peptona 5g 5g
Dextrosa 10g 10g
Extracto de levadura 0.5g
Rosa bengala 0.033g 0.05g
Sulfato de estreptomicina 0.03g 0.03g

Preparación:

Agregar todos los componentes en agua destilada y calentar suavemente hasta disolverlos por
completo llevar a autoclavar por 15 min a 121°C/15 Lbs de presión, después agregar la
estreptomicina y servir.
  AGAR OAES

Usado para el aislamiento y recuento de hongos a partir de muestras de suelo.

COMPOSICION CANTIDAD
Glucosa 5g
Extracto de levadura 2g
NaNO3 1g
MgSO4x7H2O 0.5g
KH2PO4 1g
Propionato de sodio 1g
Agar - agar 20g
Agua destilada 1000ml

Preparación:

Agregar todos los componentes en agua destilada y calentar suavemente hasta disolverlos por
completo llevar a autoclavar por 15 min a 121°C/15 Lbs de presión y servir.

 AGAR PCNB

Aislamiento de Fusarium spp. a partir de muestras de suelo.

COMPOSICION CANTIDAD
Peptona 15g
Terraclor 0.5g
MgSO4x7H2O 0.5g
KH2PO4 1g
Propionato de sodio 1g
Agar - agar 20g
Clorotetraciclina HCL 50mg
Sulfato de estreptomicina 100mg
Preparación:

Agregar todos los componentes en agua destilada y calentar suavemente hasta disolverlos por
completo llevar a autoclavar por 15 min a 121°C/15 Lbs de presión, después agregar la
estreptomicina y servir.
  AGAR PEPTONA - ROSA BENGALA

Usado para aislamiento y recuento de hongos a partir de muestras de suelo.

COMPOSICION CANTIDAD
Peptona 5g
Dextrosa 10g
MgSO4x7H2O 1g
KH2PO4 20g
Rosa bengala 0.5g
Agar - agar 10g
Agua destilada 1000ml

Preparación:

Agregar todos los componentes en agua destilada y calentar suavemente hasta disolverlos por
completo llevar a autoclavar por 15 min a 121°C/15 Lbs de presión, después agregar 30 mg de
estreptomicina y servir.

 AGAR SUCROSA - PEPTONA - DICLORAN

Usado para el aislamiento y recuento de Aspergillus flavus del suelo.

COMPOSICION CANTIDAD
Peptona 0.5g
Sucrosa 20g
MgSO4x7H2O 0.5mg
KH2PO4 0.5g
Estreptomicina 50mg
Agar - agar 17g
Extracto de levadura 0.5mg
Rosa bengala 25mg
Agua destilada 1000ml

Preparación:

Agregar todos los componentes en agua destilada y calentar suavemente hasta disolverlos por
completo llevar a autoclavar por 15 min a 121°C/15 Lbs de presión, después agregar la
estreptomicina y servir. Ajustar el pH 5.5 usando HCl 1 N o NaOH 1 N.
  CALDO FRIES

Usado para aislamiento de hongos a partir de muestras de suelo

COMPOSICION CANTIDAD
Tartrato NH4 5g SOLUCION DE ELEMNTOS TRAZA
KH2PO4 2.6g Li Cl 167mg
NH4NO3 1g CuCl2XH2O 107mg
MgSO4X7H2O 0.5g H2MoO2 34mg
Extractp de levadura 1g MnCl2x4H2O 72mg
K2HPO4 1.3g CoClx4H2O 80mg
Sucrosa 30g Agua destilada 1000ml
Solucion Stock elementos 2ml
traza
Agua destilada 1000ml

Preparación:

Agregar todos los componentes en agua destilada y calentar suavemente hasta disolverlos por
completo, luego agregar la solución de elementos traza disolver, llevar a autoclavar por 15 min
a 121°C/15 Lbs de presión y servir.

 AGAR RB-M2

Usado para aislamiento de Thielaviopsis basicola de suelo. Este medio de cultivo se siembra
casi siempre por el método de estrías en superficie, a partir de muestras de material vegetal o
muestras de suelo contaminado.

COMPOSICION CANTIDAD
Glucosa 10g
KH2PO4 0.5g
Peptona 0.5g
MgSO4X7H2O 0.5g
Extractp de levadura 0.5g
K2HPO4 0.5g
Sulfato de estreptomicina 30mg
Agar - agar 20g
Quintozene 500mg
Nistatina 30g
Agua destilada 1L

Preparación:

Disolver la peptona, la glucosa, el extracto de levadura, las sales y el agar en un litro de agua
destilada. Mezclar bien, esterilizar en autoclave, luego añadir el sulfato de estreptomicina, el
quintozene y la nistatina, ajustar el pH 7.4 y servir (Phytophatology, 54, 1475).