DEMOSTRACIÓN DE LA PRESENCIA DE MICROORGANISMOS EN

DIFERENTES AMBIENTES
Casas Juan David, Osorio Jorge Hernan, Chaspuengal Recalde Elmer
Escuela de Ingeniería de Alimentos- Universidad del valle
Práctica: Septiembre 5 de 2018 - Entrega: Septiembre 19 2018

RESUMEN
En esta práctica de laboratorio se demostró la presencia de microorganismos en ambientes
comunes para el ser humano; para ello se tomaron muestras de saliva, de la suela del
zapato, de una moneda y de la exasperacion humana, se enumeró respectivamente cada
muestra y a cada una se le es incorporada en una caja de petri con agar nutritivo.
Adicionalmente, se suministro la bacteria E.coli para su cultivo en un caldo nutritivo y en un
Agar inclinado.Todas las muestras que se tomaron fueron incorporadas en una incubadora
a 37 o C durante 48 horas. Como resultado, se obtuvo que en todos y cada uno de lo
medios utilizados hubo un crecimiento de colonias bacterianas. Para la bacteria E.coli se
obtuvo un crecimiento en ambos medios de cultivo, destacando que en el caldo nutritivo la
bacteria creció en forma de sedimento y en el agar inclinada tuvo un crecimiento
rosariforme.

​ gar, colonias, bacterias, cultivo, crecimiento

Palabras clave: a

INTRODUCCIÓN
Los microorganismos viven en ambientes naturales, donde su crecimiento es afectado tanto
por las interacciones con otras poblaciones (sinergísticas, antagónicas, etc.) como por las
características físicas y químicas de su entorno. Consecuencia de esas interacciones, se
producen metabolitos secundarios, con actividades biológicas variadas, que juegan un
papel importante en su sobrevivencia.[1] Además, se ha encontrado que son esenciales en
los procesos globales que contribuyen a mantener el estado de salud de los humanos y la
calidad ambiental, lo que hace de la ecología microbiana un campo de estudio científico de
extraordinaria importancia. Son enormemente resistentes y tienen una gran capacidad de
adaptación a condiciones ambientales extremas.[2]
La estructura de la comunidad de microorganismos depende de factores fisiológicos, tales
como temperatura, humedad, nutrientes y sustancias inhibitorias, entre otros. Se ha
encontrado que este microbioma juega un papel importante en el mantenimiento de la salud
y de las funciones normales del organismo.[3]

OBJETIVOS
General
Conocer los medios en los que una bacteria puede cultivarse y desarrollarse a través del
tiempo, además, reconocer su forma y tipo de colonia que conforman
Específico
Reconocer la existencia de los microorganismos en cualquier medio de cultivo, así mismo,
reconocer que son parte de nosotros y de todo lo que nos rodea.

MATERIALES Y MÉTODOS
Instrumentos y materiales utilizados

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Los instrumentos utilizados en la práctica fueron los siguientes:
Agar nutritivo e inclinado​: es una sustancia similar a la gelatina que se extrae de las algas
rojas, es usado comúnmente para cultivar microorganismos. Se le agregan varios nutrientes
para favorecer el crecimiento bacteriano y se coloca tanto en placas planas como en tubos
de ensayo. Cuando se coloca en un tubo de ensayo, el agar está en forma líquida. Estos
luego son colocados en ángulo para que se enfríen y solidifiquen, creando una superficie
inclinada, o un agar inclinado
Caldo nutritivo: Es un medio líquido compuesto por una infusión de carne, CINa,peptona,
extracto de levadura y tambien fosfato disódico. Es usado como base para otros caldos que
puedan contener más nutrientes.
Mechero: ​Instrumentos utilizados para calentar muestras entre otras cosas.
Asa bacteriológica: ​Hecho de acero con la punta en forma de aro de un tamaño de 5mm.
Se utiliza para transportar pequeñas muestras de la bacteria o de la solución a un medio de
cultivo
Cajas de Petri: ​Recipiente redondo de cristal con una cubierta de la misma forma que la
placa pero algo más grande de diámetro para que se pueda cerrar.

METODOLOGÍA
Para llevar a cabo el estudio o realización de la práctica de demostración de presencia de
microorganismos en diferentes ambientes se tomaron cuatro muestras microbiológicas de
distintos medios para realizar su cultivo en agar nutritivo.
Recolección de muestras microbiológicas: las muestras para el cultivo y estudio
microbiológico realizado se obtuvieron de distintos medios:
saliva: se escupió directamente en la caja petri que contenía agar nutritivo y con ayuda de
un hisopo se esparció delicadamente y en forma circular sobre la superficie disponible.
Zuela de zapato: con un hisopo se recogió muestra del borde de la suela de un zapato y
se sembró en agar nutritivo trazando pequeñas líneas horizontales.
Moneda: se colocó una moneda directamente sobre el agar nutritivo y se retiró luego de
unos segundos en contacto con el agar.
Exasperación humana: ​Se expectoró sobre la caja de petri

Todas las muestras fueron debidamente rotuladas y selladas con papel film luego de ser
sembradas.

Siembra de E. Coli: se realizó la siembra de E. Coli el agar inclinado y caldo nutritivo de la

siguiente manera:
Siembra de E. Coli en agar inclinado: A fuego directo se calentó un asa en un mechero
hasta que se tornase rojo y se dejó enfriar, luego se tomó una muestra de E. Coli realizando
un suave raspado a la superficie que lo contenía. seguidamente se sembró introduciendo el
asa en el tubo de agar inclinado y moviéndolo en forma de zig zag. Se tapó el tubo de agar
y se flameo o calentó el asa nuevamente en el mechero.

2
Siembra de E. Coli en caldo nutritivo: ​se calentó el asa en el mechero hasta que se
tornase rojo, se enfrió y se tomó una muestra de E. Coli que se introdujo en el caldo
nutritivo, se dejó actuar por unos segundos y finalmente se volvió a calentar o flamear el asa
en el mechero.
Todas las muestras tanto las que estaban en cajas petri con agar y las muestras de E. Coli
en los tubos de agar inclinado y caldo nutritivo se dejaron incubar en un horno a 37 o C por
un periodo de 48 horas. Luego del tiempo de incubación se observó el desarrollo y
crecimiento de las colonias a simple vista y con ayuda de un microscopio.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
En la actualidad se emplean diversos medios para la cultivación de bacterias como lo son
solidos, semisolidos y liquidos. Cada uno de estos medios presentan diferentes propiedades
tanto físicas como químicas las cuales favorecen o limitan el crecimiento dependiendo de la
especie a la cual pertenezcan los inóculos.
En la tabla 1, se presenta la clasificación de las colonias encontradas por cada muestra
utilizada en la práctica.
tabla 1. Clasificación de las colonias encontradas a partir de las muestras cultivadas

De la primera muestra (ilustración 1) se pudo observar el crecimiento de colonias

bacterianas, donde a simple vista se notan de forma circular y de un color amarillento, sin
embargo, al tomar una foto y acercarla, se logra percibir que la forma de estas es más
irregular caracterizadas además por una superficie rugosa y brillosa, no obstante, su
crecimiento no es invasivo como el de otras muestras. Lo anterior podría deberse a
aspectos tanto físicos como nutricionales. Segun Junco Díaz y Rodríguez Pérez (2001),
factores como la concentración de iones de hidrógeno, concentración de oxígeno, presión
osmótica, disponibilidad de carbono, nitrógeno y otros minerales pueden afectar al
crecimiento microbiano.[4]

Ilustración 1. Muestra de moneda

3
en la ilustración 2 se logró determinar que hubo una colonización bastante amplia del medio
de cultivo, pero los microorganismos nunca salieron o se dispersaron más allá de donde
fueron plantadas, es decir no invadieron o trataron de colonizar todo el agar sino que su
crecimiento se limitó en quedarse simplemente en la parte o superficie del medio cultivado
en que fue aplicada; esto pudo ser causado por varios factores entres ellos la falta de
humedad, pues como ya se sabe la boca es un medio bastante humedo, calido y con
diferentes superficies, un medio ideal para el crecimiento de microorganismos.

Ilustración 2. Muestra de saliva

De la tercera muestra (ilustración 3) se apreció el desarrollo limitado de las colonias
bacterianas, esto se puede ver afectado por diversos factores como el tamaño de la
muestra, ph, humedad, temperatura, contenido de humedad, entre otros ​[5]​. Basados en la
morfología de la muestra se pudo observar algunas características como que su forma es
circular y la elevación es plana. Estas características morfológicas de esta muestra varían
según el medio que la contenga, sin embargo, estas pueden mantenerse constantes bajo
condiciones controladas​[6]​.

Ilustración 3​. ​Muestra de tos

En la muestra número cuatro (ilustración 4) se puede observar la presencia de varias

colonias bacterianas con diferentes morfologías, por lo cual se puede intuir que la muestra
está contaminada, pero, esta contaminación no es debida a ningún medio externo al cultivo,
sino que, es debido a la microbiota normal de los zapatos, ya que al estar siempre en

4
contacto con los diferentes suelos se van adhiriendo bacterias derivadas de los desperdicios
orgánicos generados por lo seres vivos, por lo tanto, se puede creer que en la suela de este
abundan los microorganismos, según un estudio de la universidad de Arizona publicado en
el libro “Adios las alergias” afirma que en la suela de los zapatos se han encontrado más de
cuatrocientas mil bacterias, incluyendo coliformes y E. coli ​[11].

Ilustración 4. Muestra de zapato

Cultivo de Escherichia coli
La Escherichia coli es el microorganismo que con más frecuencia se encuentra implicado en
infecciones nosocomiales y comunitarias, patógeno responsable en la etiología de
infecciones de vías respiratorias altas, infecciones del tracto urinario, heridas quirúrgicas,
sangre o gastroenteritis.[7] Esta bacteria se puede reproducir a temperaturas entre 6 a 50
o
C , por lo tanto, al someterse a una temperatura de 37 o C durante 48 h, se nota un
crecimiento notable de esta bacteria en ambos medios de cultivo (ilustración 5 y 6). Sin
embargo, el crecimiento no es el mismo para ambos medios. Para el cultivo en un medio
líquido ( ilustración 5), se notó un crecimiento en forma de sedimento, es decir, creció en la
parte inferior del tubo de ensayo, esto puede deberse, debido a que el caldo nutritivo es un
medio líquido y por ende la bacteria se puede mover libremente. Según la Fundación Vasca
para la Seguridad Agroalimentaria (2003) este tipo de bacterias pueden crecer en medios
con NaCl hasta un 6% lo que podría indicar el por que de su crecimiento en este medio [8].

Ilustración 5. E. coli en caldo nutritivo

5
El crecimiento de la bacteria en el agar inclinado (ilustración 6) muestra ser de una forma
rosariforme, lo que quiere decir que sus colonias están separadas aunque no por tanto. Este
medio en especial, ayuda a que las bacterias tengan una mayor superficie donde crecer,
pues es una sustancia semi- sólida formada por nutrientes como extracto de carne y
peptona, además, ayuda a mantener la humedad de la muestra. Al ser hecho por los
mismos nutrientes que el medio líquido ( caldo nutritivo) su crecimiento es evidente, pues
los medios físicos y nutricionales se convierten en un cultivo ideal para que la escherichia
coli se reproduzca.

Ilustración 6. E. coli en Agar inclinado

CONCLUSIONES
En el desarrollo de la práctica se logró demostrar la gran presencia de organismos
microbianos o colonias bacterianas en ambientes y lugares muy comunes; incluso
presentes en los humanos ya que hacen parte de su microbiota normal. Además, también
se logró demostrar las características morfológicas (forma, borde, elevación y superficie)
que presentan los microorganismos y las variaciones que este puede presentar,
dependiendo del tipo de bacteria que conforma la colonia y el recipiente contenedor de esta.

BIBLIOGRAFÍA
[1] Manzi, LV, & Mayz, JC. (2003). Valorando los microorganismos.. ​Revista de la Sociedad
Venezolana de Microbiología,​ ​23(​ 1), 85-88. Recuperado en 09 de septiembre de 2018, de
http://www.scielo.org.ve/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1315-25562003000100018&lng
=es&tlng=es​.

[2] Bartha, R. (2002) ​Ecología microbiana y Microbiología ambiental​. 4th edn. Pag 223

[3] Parra Rodriguez, H. F. (2015) ‘Los microorganismos un mundo por descubrir, una
estrategia de aula para desarrollar habilidades cientificas para estudiantes de ciclo dos’, p.
206. Available at: ​http://www.bdigital.unal.edu.co/51953/​.

6
[4] Junco Diaz y M Rodriguez Pérez, C.(2001) 'Cultivo y crecimiento de los
microorganismos’,(junio 2001), por. 45-54

[5] Montoya, H. H. (2008). Microbiología básica para el área de la salud y afines. ​Editorial
Universidad Antioquia. 2da Edición. Colombia 222p​.
[6] laboratoristasplantel5. (2013). MORFOLOGÍA DE LAS COLONIAS BACTERIANAS.
Cardenas.
[7] García, M. (2013) ‘Escherichia coli portador de betalactamasas de espectro extendido.
Resistencia’, Revista de Sanidad Militar Español, 69(4), pp. 244–248.
[8] Fundación Vasca para la Seguridad Agroalimentaria (2013) ‘Escherichia coli’, ​Elika​, pp.
1–5. Available at: http://www.elika.eus/datos/pdfs_agrupados/Documento84/3.Ecoli.pdf.
[9] DE, M., ROSA, M. M., & Ullán, C. (2002). El aire: hábitat y medio de transmisión de
microorganismos. ​Observatorio medioambiental,​ ​5​(2002), 375-402.
[10] Negroni, M. (2009). ​Microbiología estomatológica​. Ed. Médica Panamericana​.
[11] Leo Galland, J. G. (2017). Adiós a las alergias. Ciudad de México: Penguin Random
House.

ANEXOS
1. ¿Qué es una colonia bacteriana?
Una colonia bacteriana es una población de bacterias geneticamente identicas las cuales se
forman por medio de la fisión binaria (proceso de división celular), este proceso suele
repetirse de manera continua y exponencial permitiendo visualizar los tipos de colonias que
habitan en dicho cultivo, además también permite determinar la pureza del cultivo ya que si
en este habitan otros tipos de colonias se dice que el cultivo está contaminado.
2. ¿Podría usted observar colonias bacterianas en un medio líquido?
Es posible observar el crecimiento colonial de las bacterias en medio de cultivos líquidos,
pero no la mayoría de características morfológicas que puedan presentar dichos cultivos,
debido a que al estar presente en un medio acuoso este mismo distorsiona la imagen, por
eso se recomienda cultivar en medios sólidos debido a que estos sí permiten percibir con
mayor facilidad y claridad todas las características que presenten.
3. ​¿De qué modo podrían incidir los microorganismos del aire en los trabajos del
laboratorio?
En el aire existe una microbiota natural la cual no es tan relevante en el laboratorio, pero
este es un medio para dispersar otros microorganismos (esporas, bacterias, virus y hongos),
que provienen de otros ambientes ​[9]​. Un claro ejemplo de esto es cuando dejamos el agar
en la caja de petri expuesta al aire, el tiempo para que el agar se contamine es
relativamente corto por lo cual se recomienda mantener sellado el agar para evitar que el
aire impregne a los microorganismos en el agar.
4.​ ​¿Cómo evitaría que los trabajos del laboratorio se contaminen?
La forma de evitar que los trabajos de laboratorio queden contaminados es no dejando

7
expuesto el recipiente contenedor del cultivo al aire durante mucho tiempo, otro es
cumpliendo todas las normas de seguridad del laboratorio como utilizar bata, guantes,
tapabocas y cofia, debido a que un posible agente contaminante puede filtrarse debido a
que somos portadores de microorganismos.
5. ​¿Al incrementar el tiempo de incubación se presenta un aumento indefinido en el
tamaño de las colonias?
No, las colonias de microorganismos no pueden estar en un proceso de crecimiento
indefinido, debido a que después de cierto tiempo empiezan a morir y por consiguiente hay
un descenso en la población bacteriana. El crecimiento bacteriano se caracteriza por tener
cuatro etapas, las fases latencia, exponencial, estacionaria y muerte ​[10]​. El periodo de
crecimiento se presenta entre las fases de latencia y exponencial que es donde crece de
forma alarmante, luego, siguen la fase estacionaria que es donde se para el crecimiento y
finalmente se mueren las colonias, por lo cual se puede concluir que las bacterias
independientemente del tiempo que estas estén incubadas tienen que llegar a la fase
estacionaria que es donde se paraliza la tasa de crecimiento.
6.​ ​¿Qué factor podría limitar ese crecimiento?

El crecimiento de las bacterias depende fundamentalmente del tipo a la cual esta pertenece,
también influye la cantidad de nutrientes presentes en el medio, la edad del cultivo,
composición del medio, entre otros, por lo que la alteración de estos factores limitaría
considerablemente el crecimiento. También existen otros factores más externos
relacionados con el medio donde residen que impiden de forma drástica el crecimiento
microbiano como :

● EL ph
● Actividad de agua
● Temperatura
● Humedad
● Oxígeno

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