Tabla 1.

Aislamiento y características para la identificación de microorganismos

TÉCNICA CARACTERÍSTICAS IMAGEN

Dilución La técnica de dilución consiste en inocular una serie de frascos tipo
antibiótico que contienen 9 ml del medio de cultivo apropiado según
el tipo de bacteria que se quiera evaluar.
● Se obtiene 1 ml de la muestra usando una jeringa
descartable, estéril, de 1 o 2 ml de capacidad.
● Se inocula el primer frasco, sin retirar la aguja se agita el
mismo, se invierte y se retira 1 ml que se inocula en el 2°
frasco.
● Con una nueva jeringa, se retira 1 ml del frasco N° 2,
previamente agitado, y se inocula el frasco N° 3 y así
sucesivamente, utilizando una nueva jeringa para cada frasco.

Estría cruzada Consiste en la dilución de un cultivo mediante el estriado en la

superficie de un medio sólido, en una caja Petri.

Con este procedimiento se puede conseguir una buena separación de

las colonias y aislarlas fácilmente.

● Con el asa previamente esterilizada se toma material de un

cultivo heterogéneo y se descarga sobre la superficie del
medio formando estrías.
● Al comienzo se coloca el inoculo, luego se continúa con las
estrías. Cuando se quiere obtener colonias muy separadas se
puede utilizar dos o tres placas de Petri, para lo cual se repite
la operación sin tomar con el asa nuevo material.
● Se puede dividir la placa de Petri en cuatro cuadrantes; una
vez depositado el material en el primero, siguiendo el sentido
de las agujas del reloj, se hace una estría luego en el segundo,
tercero y cuarto cuadrante sin cargar nuevamente el asa; en
el último cuadrante aparecerán las colonias aisladas.
● El inóculo se extiende sobre una pequeña zona de la placa,
próxima al borde, se esteriliza el asa y se traza otra estría a
partir del depósito y así sucesivamente.
Morfología colonial
(Macroscópica)
Forma

● CIRCULAR

● PUNTIFORME

● IRREGULAR

● RIZOIDE
 ● FUSIFORME

Borde

● ENTERO

● ONDULADO

● LOBULADO
 ● FILAMENTOSO

Elevación

● PLANA

● CONVEXA

● ELEVADA

Pruebas bioquímicas
-Indol
Enzima triptofanasas
Reacción positiva: Color rosa en la superficie
Reacción negativa: Negativa amarillo (sin cambio de color)
-Rojo de metileno
Los productos finales son ácidos orgánicos, que disminuyen el
pH del medio, lo que se manifiesta con el Rojo de metilo.

-Voges proskaver
Los productos finales, como butanodiol y etanol, son neutros y
producen como intermediarios acetoina, que puede detectarse
con el reactivo de Voges Proskauer, el react. A que es KOH, y el
B alfa-naftol, estos reaccionan con la acetoina originando
coloraciones violáceas

-Citrato

Las bacterias que metabolizan el citrato liberan iones amonio al

medio (degradación del fosfato amónico) lo que provoca que
este se alcalinice y el indicador vire azul.

-Oxidasa
Se realiza en un trocito de papel de filtro, de forma que
colocamos una gota del reactivo de Kovacs en el papel y
posteriormente tomamos parte de nuestra colonia con el asa de
siembra, que frotaremos sobre el papel. El resultado será positivo
se produce una reacción de color a los pocos segundos.
-Catalasa
En un tubo de ensayo colocamos 2 o 3 ml de peróxido de
oxígeno, tomamos muestra con el asa de siembra y la
introducimos en el tubo, el resultado será positivo si se observa
la producción de pequeñas burbujas.

-Coagulación

En un tubo de ensayo se pone una muestra del cultivo posterior

mente se deja reposar unos minutos para saber si coagula
correctamente es que el cultivo si se hizo bien si este coagula
diferente o no en su totalidad es porque hubo una falla en el
procedimiento.

-Ureasa
El medio lleva como indicador Rojo fenol, que se torna amarillo
cuando es negativo y rosa cuando es positivo.
Hay que tener precaución porque también puede ocurrir que no
se produzca cambio de coloración, en este caso es negativo.

Pruebas moleculares
PCR simple Y PCR VENTAJAS
múltiple. · Mayor rapidez que los métodos basados en cultivos (4-24
 h vs. 5-7 días).
· Alta especificidad y sensibilidad.
· PCR múltiple: detecta varios patógenos al mismo tiempo.
· Automatizados.
· Resultados precisos y exactos a partir de la detección genética
específica.
· Diferenciación de varios serotipos de microorganismos.
DESVENTAJAS
· Dificultad para distinguir entre células vivas
y muertas.
· Técnicamente puede ser un reto optimizar
las condiciones de PCR.
· Se requiere enriquecimiento para detectar
células visibles.
· Se necesita procesamiento post-PCR de
los productos (electroforesis).
PCR en tiempo real VENTAJAS
· Es más específica y sensible que los métodos de cultivo.
· No se encuentra influenciada por la amplificación no
específica;
la amplificación puede ser monitoreada en tiempo real.
· Confirmación de amplificación específica mediante curvas
de fusión.
DESVENTAJAS
· Dificultad en ensayos múltiples.
· Labilidad del ARNm.
· Posibilidad de contaminación cruzada.
Microarreglos VENTAJAS.
· Más rápido que los métodos basados en cultivo (2-4 h vs.
5-7 días).
· Análisis múltiple (hasta 100 perlas diferentes disponibles).
· Alta sensibilidad y especificidad, se pueden caracterizar
cepas.
· Labor efectiva, puede aplicarse a un formato de 96 pocillos
(pueden ensayarse 9600 muestras).
· Si debe ser incluido un blanco adicional en el ensayo, puede
Añadirse
DESVENTAJAS.
 · Dificultad para distinguir entre células vivas
y muertas.
· Requiere kits o PCR para marcar los genes
blanco.
Biosensores VENTAJAS.
· Alta selectividad y sensibilidad.
· Automatizables y miniaturizables.
· Reproducibilidad, velocidad en el análisis y ejecución en
tiempo real.
· Análisis múltiple de patógenos en alimentos perecederos y
semiperecederos.
· Permite la existencia de varias configuraciones por la
diversidad
de las propiedades transductoras.
· Larga vida útil de los dispositivos (materiales estables y
resistentes).
· En la mayoría de los casos es innecesario el pretratamiento
de las muestras.
DESVENTAJAS.
· Ciertos biosensores pueden requerir extensos
pretratamiento de las muestras.
· Existen pocas plataformas de biosensores
individuales, disponibles comercialmente.
Pirosecuenciación VENTAJAS.
· Sensible, específica y precisa.
· Secuenciación sin electroforesis.
· Rápido (7-10 h).
· Se realiza en tiempo real.
· Costos de reactivos más bajos en comparación con otros
métodos de secuenciación disponibles actualmente.
DESVENTAJAS.
· No hay detección de células viables sin
preenriquecimiento.
· Las muestras necesitan estar preparadas
y amplificadas.
· Bioinformática compleja.
 Referencias
5, E. (30 de Octubre de 2014). Microbiologia. Obtenido de http://microbiologia3bequipo5.blogspot.com/2014/10/dilucion-bacteriana.html
Carolina, P. C. (11 de Enero de 2014). Revista Peruana de Medicina Experimental y Salud Publica. Urb. Colinas de bello monte, Caracas, Venezuela.
Laboratoristas. (2 de Octubre de 2013). Capacitando. Obtenido de http://perso.wanadoo.es/microdominguez/a.htm

INTEGRANTES DEL EQUIPO:

1. ASTORGA CABANILLAS ESTEBAN.

2. GALVEZ SEPULVEDA JESUS ALFREDO
3. MEZA LOPEZ DAMIAN
4. SOTELO QUINTERO JESUS ALAN
5. VEGA CASTRO MARIA JOSE