EXTRACCION DE ADN

CUANTIFICACION DE ADN POR ESPECTROFOTOMETRIA

ELECTROFORESIS DE GEL AGAROSA

Diego Andrés Buitrago carrillo - Yepsy Katherine Jaimes Ramírez 1611202

Universidad Francisco de Paula Santander
Ingeniería Biotecnológica
Genética molecular, Grupo C
Cúcuta, Norte de Santander, Colombia
Dirigido a: Claudia Yaneth Díaz

RESUMEN
EL ADN es la molécula que contiene la información genética y configuración de los seres vivos,
esta molécula representa la identidad biológica de los individuos , por lo que la manipulación y
conocimiento de la misma es un pilar en la genética molecular, por ellos la práctica se enfoca en el
proceso de extracción de esta importante molécula. En cuanto ala La electroforesis es un método
que se usa para la separación de ciertas biomoleculas a apartir de la acción de un campo eléctrico
que interactúa con las cargas de dichas moléculas, esto y ciertas características estructurales
permiten que dichas moléculas migren hacia uno de los polos (Electrodos).Usando una muestras de
ADN obtenida en una anterior extracción y cuantificación
Palabras claves extracción.. Polos.. Densidad óptica

abstrat
DNA is the molecule that contains the genetic information and configuration of living beings, this
molecule represents the biological identity of individuals, so the manipulation and knowledge of it
is a pillar in molecular genetics, for them the practice is focuses on the extraction process of this
important molecule The electro foresis is a method used for the separation of certain biomolecules
from the action of an electric field that interacts with the charges of these molecules, this and certain
structural characteristics allow these molecules migrate towards one of the poles (Electrodes).
Using a DNA sample obtained in a previous extraction and quantification
Keywords extraction .. poles .. optical density
INTRODUCCION
Uno de los más importantes aportes a la biología ha
sido el reconocimiento del ADN como "la molécula
de la vida". El estudio de sus propiedades
fisicoquímicas y biológicas ha desarrollado, en
menos de 50 años, un enfoque totalmente novedoso
en lo referente al origen, flujo y almacenamiento de
la información genética en todo ser vivo. Debido a
que en el ADN se encuentran cifradas las
instrucciones que definen las características propias
de cada organismo, diversas tecnologías y sistemas
de análisis se han desarrollado para la
caracterización de esta molécula.) (Rocha P.)
La extracción consiste en el aislamiento y
purificación de moléculas de ADN y se basa en las
características fisicoquímicas de la molécula. El
ADN Está constituido por dos cadenas de
nucleótidos unidas entre sí formando una doble
hélice. Los nucleótidos están integrados por un
azúcar (desoxirribosa), un grupo fosfato y una base
nitrogenada (adenina, guanina, timina o citosina).
Múltiples factores parecen incidir en la calidad
molecular (calidad y cantidad de ADN extraíble
sometible a análisis moleculares) de las muestras
parafinadas, como el fijador (naturaleza,
concentración, temperatura, pH), tiempo de fijación,
tamaño del tejido fijado y edad del bloque (Chan
P.)]
.La calidad y cantidad del material genético extraído
destacan como los Factores limitantes para realizar
pruebas Moleculares a partir de este material. Ante
esto, la eficiencia de los procedimientos de
extracción se ha convertido en un punto crítico para
el éxito de la aplicación de las pruebas de
extracción.(Arce G.)
Este ADN extraído puede utilizarse en pruebas
forenses, clonación de genes, identificar desordenes
genéticas o mutaciones, pruebas de paternidad,
detectar agentes patogénicos, identificar
características, etc.
Una vez obtenido tanto el ADN como el ARN se
procede a evaluar su cantidad como su calidad, para
esto utilizamos una serie de técnicas, pero la más
utilizada y la que realizaremos es la
Espectrofotometría. La espectrofotometría es el
método de análisis óptico más usado hoy día, las
ventajas sobre otros métodos de laboratorio diversas;
son rápidas, versátiles y fáciles de usar. La
espectrofotometría es usada para identificar
compuestos por su espectro de absorción y conocer
la concentración de un material o sustancia, esto
último nos permite conocer la concentración de
compuestos, seguir el curso de reacciones químicas
y enzimáticas así como determinar enzima y
proteínas incluso ácidos nucleicos.
Como ya sabemos un espectrofotómetro es un
equipo de laboratorio que mide la cantidad de luz
que pasa por medio de una longitud de onda
específica. La cantidad de luz absorbida por un
medio es proporcional a la concentración del soluto
presente, es entonces así que la concentración de un
soluto colorido en solución puede ser determinada
en el laboratorio mediante la medición de su
absorción de luz a una longitud de onda específica.
Las muestras en estos equipos se utilizan en estado
líquido y se colocan en el compartimiento de las
muestras de celdas transparentes de diferentes
tamaños y materiales. La espectrofotometría
UV/Visible nos permite confirmar que contamos con
cantidad suficiente de ácidos nucleícos (DNA/RNA)
de calidad adecuada antes de llevar a cabo ensayos
de PCR cuantitativa en tiempo real (QRTPCR),
análisis de SNPS (Polimorfismos de nucleótido
único) o la secuenciación automática de muestras de
DNA de plásmidos, cósmidos, productos de PCR.
La principal ventaja de trabajar con el
espectrofotómetro NanoDrop ND1000 es que la
medida se lleva a cabo a partir de 1 ó 1,5 µl de
muestra sin ayuda de ningún tipo de cubeta ya que la
muestra se pipetea directamente sobre la superficie
de medida. El rango de medida para muestras de
DNA es de 2-3700 ng/µl y para RNA de 2-3000
ng/µl
La electroforesis es un método analítico –
semipreparativo, en el que se separan biomoléculas,
en dependencia entre otros factores de su carga y
bajo la acción de un campo eléctrico, La popularidad
de este creció rápidamente y se logró un aumento de
la resolución (Gracia H. 2015).La electroforesis en PROCEDIMIENTO
gel de agarosa es de las más utilizadas para analizar
y caracterizar ácidos nucleicos de distintas
procedencias. (López M. et.2014)
PROCEDIMIENTO EXTRACCIÓN
Existen muchos tipos de electroforesis, que se
engloban en dos categorías fundamentales:
Electroforesis de frente móvil y Electroforesis de
zona. Actualmente, sólo se utiliza la electroforesis
de zona, en la cual la muestra se desplaza sobre un
soporte sólido, Como papel de filtro, celulosa o gel
(Agarosa, acrilamida...) y los componentes de la De la muestra vegetal
Llevar a vortex 5 Guardar a 0°C por 10
macerar con buffer
muestra migran en forma de Pequeñas bandas, de extracción vegetal
segundos minutos
también llamadas zonas. La electroforesis en gel es
Una técnica muy utilizada para separar moléculas o
fragmentos de moléculas de ácidos nucleicos. Los
materiales más comunes para separar moléculas de
El sobrenadante
ácidos nucleicos son polímeros como la Agregar isopropanol Centrifugar a 13.000
pasarlo a otro
1:1 y mezclar rpm por 10 minutos
microtubo
poliacrilamida o la agarosa. (Padilla Carmen 2012)

El gel de agarosa es la manera más efectiva de

separar fragmentos de ácido desoxirribo-nucleico,
sus siglas (DNA, deoxyribonucleic acid).El tamaño Guardar a 0°C por 5 Centrifugar a 13000 Descartar el
de los poros de la matriz del gel depende de la minutos rpm por 5 minutos sobrenadante

concentración de agarosa utilizada y la

concentración de agarosa es inversamente
proporcional al tamaño del poro obtenido; esto es, a
mayor concentración, menor tamaño de los poros, y
Descartar el Centrifugar a 13000 Agregar 500µl de
viceversa, si los poros son pequeños la migración del sobrenadante rpm por 5 minutos etanol al 70%
ácido nucleico es más lenta. (Lopez de la mora D.
2016 )

En biología molecular, la mayoría de los estudios

Dejar secar a
básicos y aplicados requieren el uso de la temperatura Agregar 50µl de TE
electroforesis; sin embargo, este procedimiento ambiente

presenta variaciones de acuerdo al tipo de estudio

que se piensa ejecutar. (Llanos L. 2016)
 Se añade buffer TBE Se deja en la
Se pesa 0.28 g de
1x en un matraz (40 plancha de
agarosa
ml) calentamiento

Se agita
Añadir buffer de Se deja que se
rigurosamente Se
electroforesis hasta solidifique por 30
sirve en la bandeja y
cubrir min
Se colocan los peine

Colocar el gel sobre

Se añade la muestra
un transiluminador
preparada en los
y encender la
pocillos
lámpara de luz UV

RESULTADOS

Pi 1 Pi 2
DISCUCIONES
572,8 ng/µl 948,3 ng/µl

260nm 11.45 18.96

572,8
280nm 7.280 10.43 = 𝟎, 𝟔𝟎𝟒ng/µl
948,3

A260/28 1.57 1.82

0 1.57+1.82
PROMEDIO: = 1,695
2
A280/23 0.65 0.88
0 A280/230(PROM) = 1,695
ERROR = |Xi-PROMEDIO|
|X(1)-PROMEDIO| = |1,58-1,695|= 0.125
|X(2)-PROMEDIO| = |1.82-1,695|= 0,125

∑ 𝐸𝑟𝑟𝑜𝑟 =0.125+0.125= 0,25

0,25
ERROR PROMEDIO= = ± 0, 125
2
 ∑ 𝐸𝑟𝑟𝑜𝑟 = ± 0, 125
A280/230(PROM) =1,695 ± 0, 125
RELACION MANUAL
11.45
PI1= 7.280 = 𝟏. 𝟓𝟕
18.96
PI2= 10.43 = 1.81
Las semillas de avichuela utilizadas en la
extracion presento una nuena consistencia en el
proceso de maceracion
Después del primer procedimiento de
centrifugación de los viales al retirar los
sobrenadantes con el micro pipetas, no se
presentaron levantamientos del precipitado.
Los grupos fosfatos del ADN son los que les
confieren su carga negativa y por tanto son
atraídos hacia el polo positivo de la cámara
de electroforesis. La relación del peso
molecular y el tamaño de la molécula con el
tamaño de los posos del gel agarosa
establecen una relación de velocidad donde a
mayor peso y tamaño de la molécula menor
distancia recorrida por el tiempo. El agente
intercalante cumple la función de poder
observar el movimiento de estas moléculas
(Bandas) de esta relación)
Para el ADN doble hebra en soluciones de
alta pureza se espera A260/A280 ≥1.8, y para
ARN, A260/A280 ≥2.0 según Berenice P. et
al. 2016. Los resultados Para la prueba
realizada con las Muestras de ADN por
nanodrop dieron una relación A260/A280=
1,57 para la primera muestra y A260/A280=
1.82 para la segunda. Si promediamos estos
dos valores con su respectiva error seria
1,695 ± 0, 125. Para un rango de OD 16-1,8
Se considera una muestra pura, en estos
casos podemos considerar que las muestras
obtenidas no son muestras puras pero estando
muy cerca del rango considerado puro.
El error correspondiente para el promedio de
los datos obtenidos fue ± 0, 125 que equivale
a un 12,5% siendo un error bastante
considerable y que no favorece los datos ya
evaluados
CUESTIONARIO
1.Que función cumple el buffer de carga y otros
colorantes se utilizan como buffers de carga?
RTA/: Es un buffer contiene sucrosa o glicerol,
lo cual da peso a la muestrapara que el ADN se
precipite al fondo de los pozos de siembra y
loscolorantes. Su función es ayudar a conducir
corriente y controlar el pH
COLORANTES QUE UTILIZAN COMO
BUFFERS DE CARGA
Preparación de Buffer de Xylene Cyanol 6x
(Migración nominal 4 kbp)
• 25 mg de Xylene Cyanol
• 3 mL de Glicerol o 1.5 grs de Ficoll-400 o 4
grs de Sucrosa
• Aforar a 10 mL con dH20
Preparación de Buffer de Azul de Bromofenol
6x (Migración nominal 300 bp)
• 25 mg de Azul de Bromofenol
• 3 mL de Glicerol o 1.5 grs de Ficoll-400 o 4
grs de Sucrosa
• Aforar a 10 mL con dH20
Preparación de Buffer de Naranja G 6x
(Migración nominal 50 bp)
• Mezcle 18 mL de Glicerol grado ACS con 40
mL de agua destilada.
• Agregue 60 mg de Naranje G y afore a 50 mL.
• Homogeneice la mezcla con vortex.
Preparación de Buffer Mixto 6x (Azul de
Bromofenol y Xylene Cyanol)
• 25 mg de Azul de Bromofenol
• 25 mg de Xylene Cyanol
• 3 mL de Glicerol o 1.5 grs de Ficoll-400 o 4
grs de Sucrosa
• Aforar a 10 mL con dH20
2¿ Que otras macromoléculas se pueden separar
por electroforesis en gel?
RTA/: La electroforesis en gel es una técnica
utilizada para separar fragmentos de ADN (u
otras macromoléculas, como ARN y proteínas)
por su tamaño y carga. La electroforesis
consiste en aplicar una corriente a través de un
gel que contiene las moléculas de interés. Con
base en su tamaño y carga, las moléculas se
desplazarán por el gel en diferentes direcciones
o a distintas velocidades, con lo que se separan
unas de otras.
Todas las moléculas de ADN tienen la misma
cantidad de carga por masa. Debido a esto, la
electroforesis en gel separa los fragmentos de
ADN únicamente por su tamaño. La
electroforesis nos permite ver cuántos
fragmentos diferentes de ADN están presentes
en una muestra y cuán grandes son unos con
respecto a otros. También podemos determinar
el tamaño absoluto de un fragmento de ADN
examinándolo junto a una "escala" estándar de
fragmentos de tamaño conocido.
3.Consulte los tipos de electroforesis que
existen y sus aplicaciones?
RTA/:
1. Tipos de electroforesis Existen
principalmente dos métodos electroforéticos
ampliamente utilizados: la electroforesis
convencional y la electroforesis capilar. La
primera se lleva a cabo sobre papel o sobre un
gel, en los que se aplica la muestra
directamente. La disolución tampón, que será el
medio conductivo, cubre la capa de papel o de
gel. Seguidamente se aplica el potencial de
corriente continua a través de la placa. Cuando
se considera que se han completado las
separaciones se interrumpe el paso de la
corriente y, si es necesario, las muestras se tiñen
para visualizarlas. 1.1 Electroforesis de frente
móvil o libre 1.2. Electroforesis de zona:
• Electroforesis en papel
• Electroforesis en gel
Existe una gran variedad de tipos de
electroforesis en gel, que se pueden agrupar en
dos categorías: a) Electroforesis en gel en una
dimensión (continuo o discontinuo)
○ Electroforesis en geles de poliacrilamida
(PAGE)
○ PAGE en condiciones desnaturalizante
○ PAGE en condiciones no desnaturalizantes
○ SDS
– PAGE
○Isoelectroenfoque
○ Electroforesis en campos pulsantes b)
Electroforesis en gel en dos dimensiones
(bidimensional)
4.Que tipo de marcadores moleculares existen y
son de interés?
RTA/: Marcadores moleculares del tipo
pretranscripción-traducción
Los marcadores moleculares de tipo ADN, son
aquellos capaces de detectar el polimorfismo
genético directamente a nivel de DNA. En este
grupo se encuentran los RFLP (Fragmentos
Polimórficos de Restricción), RAPD (DNA
Polimórfico Amplificado al Azar), AFLP
(Polimorfismo de Longitud de Fragmentos
Amplificados), entre otros y ocupan un peldaño
superior en la escala evolutiva de los
marcadores genéticos, por las nuevas
perspectivas que brindan para identificar y
mapear genes útiles, que pueden ser
posteriormente incorporados y expresados en el
genoma vegetal (Ferreira y Grattapaglia, 1996).
RFLP (Restriction Fragment Lenght
Polimorphic)
Se entiende por RFLP el polimorfismo de los
fragmentos de restricción, obtenidos por el corte
con una endonucleasa en la cadena doble del
ADN, acoplado en el caso de ADN genómico
eucariótico, por hibridación con sondas de
secuencias homólogas de copia única (Botstein
y col., 1980; Beckmann y Soller, 1986).
El empleo de los RFLP permite detectar
variaciones producidas por procesos como las
deleciones, inserciones, o alteraciones en la
secuencia diana de las endonucleasas de
restricción (siendo esta su base genética), tanto
en poblaciones de la misma especie como entre
diferentes especies, lo cual resulta ventajoso
atendiendo a que muy pocas variaciones son
expresadas en el fenotipo, mientras que muchas
otras resultan silentes (Iglesias y Rojas, 1992).
De acuerdo con Beckmann y Soller (1986), se
pueden distinguir dos campos principales de
aplicación de los RFLP en el mejoramiento de
las plantas. El primero está basado en la
utilización de los mismos como marcador
genético para determinar las relaciones
genéticas, incluyendo aspectos esenciales como
su uso en la identificación de variedades, la
protección de los derechos del mejorador y las
determinaciones de parentesco. La segunda área
de aplicación, está basada en el uso de éstos
como marcadores genéticos para identificar y
mapear particularmente aquellos genes
involucrados directamente en la determinación
de caracteres cuantitativos, y el monitoreo de
estos loci durante los programas de introgresión
y selección (Iglesias y Rojas, 1992).
RAPD (Ramdom amplified polymorphic DNA)
En 1990 dos grupos de investigadores
desarrollaron prácticamente al unísono una
tecnología basada en la tecnología de la
reacción en cadena de la polimerasa (PCR). En
esencia la idea consistió en utilizar un cebador
corto y de secuencia arbitraria, que elimina la
necesidad de conocimiento previo de la
secuencia. Estos dos grupos denominaron de
forma diferente esta técnica: AP-PCR
(Arbitrarily Primed Polymerase Chain Reaction
o reacción de la polimerasa con cebadores
arbitrarios) y RAPD (Ramdom Amplified
Polymorphic DNA o ADN polimórfico
amplificado al azar) desarrollada por Williams y
colaboradores (1990).
Posteriormente Caetano-Anolles y
colaboradores (1991) pusieron a punto otra
variante que denominaron DAF (DNA Finger
Printing o amplificación de huellas de DNA).
Actualmente se ha propuesto designar todas
estas tecnologías como MAAP (Multiple
Arbitrary Amplicon Profiling).
La naturaleza molecular del polimorfismo
RAPD no es enteramente conocida. Ferreira y
Grattapaglia (1996), basados en evidencias
experimentales, señalan que diferencias de
apenas un par de bases (mutaciones puntuales)
son suficientes para causar una “no
complementariedad” del cebador con el sitio de
iniciación y así impedir la amplificación de un
segmento. Otras fuentes de polimorfismo
pueden incluir deleciones o inserciones en los
sitios de iniciación, que los coloque a una
distancia superior a lo permisible y así impedir
la amplificación de un segmento (Tingey y Del
Tufo, 1993).
El polimorfismo genético detectado con este
marcador es binario lo que hace que la
naturaleza de la técnica RAPD sea dominante,
los individuos heterocigóticos no pueden ser
diferenciadas directamente de los
homocigóticos, esta característica constituye
una de sus principales limitaciones
determinando un bajo contenido de información
genética por locus (Williams y col., 1990). Sin
embargo, las evidencias existentes, indican que
los loci de los marcadores RAPD están
distribuidos al azar a lo largo del genoma, lo
que permite detectar una gran cantidad de
polimorfismo, incluso en regiones de DNA
repetitivo (Rojas y col.,1994 ).
AFLP (Amplified Fragment Length
Polymorphism)
La técnica del polimorfismo de longitud de
fragmentos amplificados, se considera una
técnica intermedia entre RFLP y RAPD, pues
involucra una digestión del DNA con enzimas
de restricción y la amplificación de los
fragmentos generados mediante un PCR
específico. Los productos amplificados son
usualmente separados sobre un gel de
secuenciación y pueden ser revelados después
por radiografía o fluorescencia. El polimorfismo
creado será el resultado de cambios en los sitios
de corte de las endonucleasas y de la variación
en número y longitud del amplicon seleccionado
para la amplificación de los distintos segmentos
(Caetano-Anolles y col., 1991).
Estos marcadores han encontrado un amplio uso
en muchas aplicaciones de la biología
molecular, especialmente en plantas,
destacándose por la alta identificación de
genotipos y evaluación del germoplasma que
permiten (Paterson y col., 1991).
5.¿El voltaje sugerido para la electroforesis en
gel agarosa es de 1 a 5v/cm explique a que se
refiere esta relación?
RTA/: El voltaje recomendado es 1-5 votl/cm
(distancia entre el ánodo y el cátodo, no
longitud del gel) en electroforesis . Cuando el
voltaje es demasiado bajo la movilidad de las
bandas se reduce, y las bandas se ensanchan
debido a la difusión. Cuando el voltaje es
demasiado alto disminuye la resolución, debido
principalmente al sobrecalentamiento del gel.
La concentración apropiada en cada caso
depende del tipo de agarosa y del tamaño de los
fragmentos que se quieren separar. Como regla
general hay que tener en cuenta que, a mayor
concentración menor es el tamaño de los
fragmentos que se separan
6.¿Que ptros intercalentes se utilizan para
remplazar el bromuro de etidio y que ventajas y
desventajas tienen?
RTA/:
TRIS: Es el nombre común de tris(hidroximetil)
aminometano. Se trata de un compuesto muy
utilizado en el laboratorio para preparar
disoluciones tampón; el grupo ácido-base que
ejerce el tamponamiento es el amino. Se
comercializa en sus formas básica ("Tris base")
y ácida ("Tris hidrocloruro"), aunque la primera
es la de uso más común.
EDTA: Acrónimo de EthyleneDiamine 7¿ Investigue que otros métodos se utilizan en
TetraAcetic acid, ácido etilendiamino la actualidad para realizar en la actualidad para
tetraacético (a veces AEDT en español). En sus realizar las cuantificaciones de cidos nucleicos?
formas desprotonadas (2− y 4−), es un conocido
RTA/: De todos los métodos históricos de
agente quelante de cationes divalentes, en
secuenciación de ácidos nucleicos diseñados por
especial Ca2+ y Mg2+.
Sanger, el método por terminadores dideoxi es
Dado que el Mg2+ es un cofactor requerido por el más exitoso (Sanger, 1988). Este método usa
la mayoría de nucleasas, su secuestro por el nucleótidos modificados con la ausencia del
EDTA evita la degradación del DNA durante la extremo 3'OH, grupo esencial para la
preparación y la electroforesis.En la polimerización por la ADN Polimerasa (figura
electroforesis, es el agente tamponante que 2A). De esta forma, cuando se incorpora un
mantiene el pH. Se incluye tanto en el gel como dideoxinucleótido, queda un trozo trunco de
en el tampón de cubeta. ADN que puede ser separado
electroforéticamente (Sanger et al., 1977). Si
SDS: El dodecilsulfato sódico (Sodium Dodecyl
cada uno de los cuatro monómeros de ADN (los
Sulphate, SDS, laurilsulfato sódico) es un
nucleótidos adenina, guanina, citosina y timina)
detergente aniónico que se une a las proteínas,
se marca con una molécula fluorescente
desnaturalizándolas en una conformación
diferente, se puede determinar rápidamente el
extendida recubierta de moléculas de SDS.
orden de los nucleótidos. La secuenciación con
Como consecuencia, el tamaño de la molécula
el método dideoxi se provee usualmente en
de proteína es directamente proporcional a su
centrales de secuenciación a muy bajo costo. La
longitud en aminoácidos y su carga queda
secuenciación dideoxi acoplada a métodos de
enmascarada por la mayor carga del SDS que la
reconstrucción computacional (Shotgun) ha sido
recubre, que es también proporcional a la
fundamental en la secuenciación de los genomas
longitud. Por lo tanto, la movilidad
modelo de humano, animales y plantas
electroforética de la proteína depende
(Galperin y Koonin, 2010).
exclusivamente de su masa molecular.
8.¿Que es y para que sirve el nanodrop el
En la electroforesis SDS-PAGE se usa (en el
fluorimetro y el fluorometro?
tampón de ruptura o de carga) para
desnaturalizar las proteínas de la muestra antes RTA/: NANODROP
de aplicar ésta y como componente del gel para
Este equipo permite realizar medidas de
mantenerlas desplegadas durante la
espectrofotometría en un amplio rango de
electroforesis.
longitudes de onda (220-750 nm) con gran
GLISEROL: El glicerol (glicerina) se utiliza
exactitud y reproducibilidad, sin necesidadde
como agente denso en la composición del
emplear cubetas. Tan sólo requiere un volumen
tampón de carga. La muestra + tampón de carga
de muestra de 1-2 μl y gracias a supequeño
se deopsita al fondo del pocillo y no difunde por
tamaño y fácil manejo permite medir un gran
el tampón que llena la cubeta y cubre el gel. De
número de muestras en pocotiempo.Su
ese modo no se pierde y se mantiene
funcionamiento se basa en el empleo de un
concentrada.
sistema de retención de muestra que aprovecha
la tensión superficial para formar un puente de
líquido entre el pedestalinferior y un pedestal
superior. En los espectrofotómetros NanoDrop
el pedestal superior es el extremo de una fibra
óptica conectada a una fuente de emisión de
Xenon.
FLUORIMETRO
Un fluorímetro es un dispositivo de laboratorio
utilizado para medir los parámetros de la
fluorescencia: su intensidad y la distribución de
longitudes de onda del espectro de emisión
después de la excitación por un cierto espectro
de luz.1 Estos parámetros se utilizan para
identificar la presencia y la cantidad de ciertas
moléculas específicas en un medio. Los
fluorímetros modernos son capaces de detectar
concentraciones de moléculas fluorescentes tan
bajas como 1 parte por billón.
El análisis mediante la fluorescencia puede ser
varios órdenes de magnitud más sensible que
otras técnicas. Sus campos de aplicación
incluyen química, bioquímica, medicina y
vigilancia del medio ambiente. Por ejemplo, se
utiliza para medir la fluorescencia de la clorofila
y así investigar la fisiología vegetal
FLUOROMETRO
Instrumento usado en la medida de la
fluorescencia de una sustancia e identificar la
presencia y cantidad de moléculas específicas
que se encuentran en la muestra.
CONCLUSIONES
La extracción de ADN es una práctica rigurosa en el
sentido de la pureza de la muestras, ya que al más
mínimo grado de contaminación el trabajo realizado
puede ser desperdiciado por dejar inservible el
precipitado obtenido de ADN.
La centrifugación Cumple una parte muy importante
en los procesos de extracción y separación y
purificación de ADN ya que este mecanismo que el
que más tiempo requirió de la práctica, donde se
centrifugo 3 veces dando un aproximado de 20
minutos en total.
La muestra de ADN presenta una relación de
densidad óptica mayor pero muy cerca a a la
indicada de (1,6-1,8) para ser considerada pura,
por lo tanto la muestra de ADN obtenidas están
muy cerca de ser puras. La cuantificación de
ADN realizada muestra que ambas muestras
obtenidas en la anterior extracción son
relativamente viable para su posterior análisis
en otras pruebas, auque pudiendo tener mejores
resultado con muestras mas puras. Pudiendo
mejorar en la preparación de la muestra
El software utilizado usa datos precisos al
momento de arrojar os datos de la absorbancia y
de la relación de ambas frecuencias de luz, al
momento de hacer el cálculo dela relación
manualmente se presenta una pequeña y
despreciable diferencias debido a que el
software maneja cifras decimales más precisas.
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