I.

INTRODUCCIÓN

Actualmente la identificación de las bacterias se realiza por medio de

métodos convencionales, basados en las características fenotípicas, puesto
que su realización y coste los hace más asequibles. Los métodos
genotípicos suelen reservarse para las bacterias que no se pueden
identificar con métodos convencionales.
Los esquemas tradicionales de identificación fenotípica bacteriana se basan
en las características observables de las bacterias, como morfología,
desarrollo, y propiedades bioquímicas y metabólicas.
El cultivo, cuando es factible, continuo siendo el método diagnóstico de
elección; permite el aislamiento del microorganismo implicado, su
identificación, el estudio de sensibilidad a los antimicrobianos y facilita la
aplicación de marcadores epidemiológicos. En el cultivo es esencial la
correcta elección del medio de crecimiento y las condiciones de incubación.

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II. OBJETIVOS

1. Identificar por el método de tinción de las bacterias Gram positiva y

Gram negativa

2. Comparar y diferenciar entre la bacteria Gram positiva y Gram

negativa

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III. MARCO TEÓRICO

Las bacterias son organismos unicelulares microscópicos, sin núcleo ni clorofila,

que pueden presentarse desnudas o con una cápsula gelatinosa, aisladas o en
grupos y que pueden tener cilios o flagelos.
La bacteria es el más simple y abundante de los
organismos y puede vivir en tierra, agua, materia
orgánica o en plantas y animales.
Tienen una gran importancia en la naturaleza,
pues están presentes en los ciclos naturales del
nitrógeno, del carbono, del fósforo, etc. y pueden
transformar sustancias orgánicas en inorgánicas
y viceversa.

Son también muy importantes en las

fermentaciones aprovechadas por la industria y
en la producción de antibióticos.
Desempeñan un factor importante en la
destrucción de plantas y animales muertos.
En efecto, la vida en nuestro planeta no existiría sin bacterias, las cuales
permiten muchas de las funciones esenciales de los ecosistemas. Una bacteria de
tamaño típico es tan pequeña que es completamente invisible a la vista.
Las bacterias son muy importantes para el ser humano, tanto para bien como para
mal, debido a sus efectos químicos y al rol que juegan en diseminar
enfermedades.
Las bacterias pertenecen a la clase procariota debido a que su núcleo no está
rodeado por una membrana y consiste de una sola molécula de ADN cuya división
es no-mitótica.
En su efecto beneficioso, algunas bacterias producen antibióticos tales como
estreptomicina capaces de curar enfermedades.
Análogamente, las bacterias son muy importantes ya que convierten nitrógeno en
una forma útil por ciertas raíces de plantas o proveen el gusto intenso en yogurt.
Las bacterias se usan en la producción de ácido acético y vinagre, varios
aminoácidos y enzimas, y especialmente en la fermentación de lactosa a ácido
láctico, la cual coagula las proteínas de la leche, y se usan en la fabricación de
casi todos los quesos, yogurt y productos similares.

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Ellas también ayudan a la descomposición de la materia orgánica muerta.
Actualmente, los métodos de la ingeniería genética son usados para mejorar los
tipos de bacterias con fines comerciales y muestran una gran promesa futura.
En cosméticos, muchos de los activos, tales como proteínas y péptidos de bajo
peso molecular, ingredientes antiarrugas y antioxidantes, están siendo creados
con el uso de tipos específicos mejorados de bacterias.
La mayoría de las bacterias pueden clasificarse en tres categorías de acuerdo a
su respuesta al oxígeno gaseoso.

La bacteria aerobia crece en la presencia de oxígeno y lo requiere para su

continuo crecimiento y existencia.
Otras bacterias son anaerobias, y no pueden tolerar el oxígeno gaseoso.
El tercer grupo es el anaerobio facultativo, el cual prefiere crecer en presencia de
oxígeno, aunque puede hacerlo sin él.

Morfología y estructura
Las bacterias son microorganismos procariontes (no poseen membrana nuclear
por lo que su ADN está libre en la célula) de organización muy sencilla.
Pertenecen al reino Protista.
La célula bacteriana consta de:
Citoplasma (todas son citoplasmáticas). Presenta un aspecto viscoso, y en su
zona central aparece un nucleoide que contiene la mayor parte del ADN
bacteriano, y en algunas bacterias aparecen fragmentos circulares de ADN con
información genética, dispersos por el citoplasma: son los plasmidos.
La membrana plasmática presenta invaginaciones, que son los mesosomas,
donde se encuentran enzimas que intervienen en la síntesis de ATP, y los
pigmentos fotosintéticos en el caso de bacterias fotosintéticas.
En el citoplasma se encuentran inclusiones de diversa naturaleza química.
Muchas bacterias pueden presentar flagelos generalmente rígidos, implantados
en la membrana mediante un corpúsculo basal. Pueden poseer también
fimbrias o pili muy numerosos y cortos, que pueden servir como pelos sexuales
para el paso de ADN de una célula a otra
Poseen ARN y ribosomas característicos, para la síntesis de proteínas.
Pared celular, que es rígida y con moléculas exclusivas de bacterias.

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  BACTERIA
GRAM
POSITIVA

Tiene una capa gruesa de Peptidoglicano (mureina) y dos clases de ácidos

teicoicos: Ácido Lipoteicoico que está en la superficie, empotrado en la
capa de peptidoglicano y unido a la membrana citoplásmica. Y Ácido
teicoico de la Pared que está en la superficie y se une sólo a la capa de
peptidoglicano. El ácido Teicoico es el responsable del determinante
antigénico del organismo.

 BACTERIA GRAM NEGATIVA

Tiene una capa delgada de Peptidoglicano (mureina) unida a una

membrana exterior por lipoproteínas. La membrana exterior está hecha de
proteína, fosfolípido y lipopolisacárido. En el lipopolisacárido, la porción de
lípido está embebida en el fosfolípido y el antígeno O polisacárido está en la
superficie. El lípido se llama Lípido A y es tóxico, pero el lipopolisacárido
entero se llama Endotoxina. La pared de la célula tiene poros llamado
Porines para el transporte de substancias de peso molecular bajo. Entre la
membrana citoplásmica y la pared celular hay un espacio periplásmico con
enzimas hidrolíticas, enzimas inactivadoras de antibióticos y proteínas de
transporte.

TECNICA DE TINCION DE BACTERIAS

La técnica de tinción de membranas de bacterias de Gram, desarrollada por Hans

Christian Gram en 1884, ha supuesto un antes y un después en el campo de
la medicina, y consiste en teñir con tintes específicos diversas muestras de
bacterias en un portaobjetos para saber si se han teñido o no con dicho tinte.
Una vez se han adicionado los tintes específicos en las muestras, y se ha lavado
la muestra pasados unos minutos para evitar confusiones, hay que limpiarlas con
unas gotas de alcohol etílico. La función del alcohol es la de eliminar el tinte de las

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bacterias, y es aquí donde se reconocen las bacterias que se han tomado: si la
bacteria conserva el tinte, es una Gram positiva, las cuales poseen una pared más
gruesa constituida por varias decenas de capas de diversos componentes
proteicos; en el caso de que el tinte no se mantenga, la bacteria es una Gram
negativa, la cual posee una pared de una composición diferente. La función
biológica que posee ésta técnica es la de fabricar antibióticos específicos para
esas bacterias.

a) Alimentación

El éxito evolutivo de las bacterias se debe en parte a su versatilidad metabólica.

Todos los mecanismos posibles de obtención de materia y energía podemos
encontrarlos en las bacterias.
Según la fuente de carbono que utilizan, los seres vivos se dividen
en autótrofos, cuya principal fuente de carbono es el CO 2, yheterótrofos cuando
su fuente de carbono es materia orgánica.
Por otra parte según la fuente de energía, los organismos o seres vivos pueden
ser fotótrofos, cuya principal fuente de energía es la luz, y quimiótrofos, cuya
fuente de energía es un compuesto químico que se oxida.
Atendiendo a las anteriores categorías, entre las bacterias podemos encontrar las
siguientes formas, como puede apreciarse en el esquema:
1. Las bacterias quimioheterótrofas, utilizan un compuesto químico como fuente
de carbono, y a su vez, este mismo compuesto es la fuente de energía. La mayor
parte de las bacterias cultivadas en laboratorios y las bacterias patógenas son de
este grupo.
2. Las bacterias quimioautótrofas, utilizan compuestos inorgánicos reducidos
como fuente de energía y el CO 2 como fuente de carbono. Como, por
ejemplo, Nitrobacter, Thiobacillus.
3. Las bacterias fotoautótrofas, utilizan la luz como fuente de energía y el
CO2 como fuente de carbono. Bacterias purpúreas.
4. Las bacterias fotoheterótrofas, utilizan la luz como fuente de energía y
biomoléculas como fuente de carbono. Ejemplos
comoRodospirillum y Cloroflexus.

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 b) Reproducción de las bacterias

Generalmente las bacterias se reproducen por bipartición, como se ve en el

siguiente esquema:

Tras la duplicación del ADN, que está dirigida por la ADN-

polimerasa que se encuentra en los mesosomas, la pared
bacteriana crece hasta formar un tabique transversal
separador de las dos nuevas bacterias.
Pero además de este tipo de reproducción asexual, las
bacterias poseen unos mecanismos de reproducción
sexual o parasexual, mediante los cuales se intercambian
fragmentos de ADN.
Esta reproducción sexual o parasexual, puede realizarse
por transformación, por conjugación o por transducción.

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1.- TRANSFORMACIÓN: Consiste en el intercambio genético producido cuando
una bacteria es capaz de captar fragmentos de ADN, de otra bacteria que se
encuentran dispersos en el medio donde vive.

2.- CONJUGACIÓN: En este proceso, una bacteria donadora F+ transmite a

través de un puente o pili, un fragmento de ADN, a otra bacteria receptora F-. La
bacteria que se llama F+ posee un plasmido, además del cromosoma bacteriano.

3.- TRANSDUCCIÓN: En este caso la transferencia de ADN de una bacteria a otra

se realiza a través de un virus bacteriófago, que se comporta como un vector
intermediario entre las dos bacterias.

a, el virus se acopla a la bacteria

b., el virus rompe la pared bacteriana
c, el virus inyecta su ADN

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c) Clasificación de las bacterias

La identificación de las bacterias es tanto más precisa cuanto mayor es el número

de criterios utilizados. Esta identificación se realiza sobre la base de modelos,
agrupados en familias y especies en la clasificación bacteriológica.
Las bacterias se reúnen en once órdenes:
- Las eubacteriales, esféricas o bacilares, que comprenden casi todas las
bacterias patógenas y las formas fotótrofas.
- Las pseudomonadales, orden dividido en diez familias entre las que cabe citar
las Pseudomonae y las Spirillacae.
- Las espiroquetales (treponemas, leptospiras).
- Las actinomicetales (micobacterias, actinomicetes).
- Las rickettsiales.
- Las micoplasmales.
- Las clamidobacteriales.
- Las hifomicrobiales.
- Las beggiatoales.
- Las cariofanales.
- Las mixobacteriales.

d) Relaciones entre la bacteria y su huésped

Ciertas bacterias viven independientes de otros seres vivos. Otras son parásitas.
Pueden vivir en simbiosis con su huésped ayudándose mutuamente o como
comensales (sin beneficio). Pueden ser patógenas, es decir, vivir de su huésped.
La virulencia es la aptitud de un microorganismo para multiplicarse en los tejidos
de su huésped (creando en ellos alteraciones). Esta virulencia puede estar
atenuada (base del principio de la vacunación) o exaltada (paso de un sujeto a
otro). La virulencia puede ser fijada por liofilización. Parece ser función del
huésped (terreno) y del entorno (condiciones climáticas). La puerta de entrada de
la infección tiene igualmente un papel considerable en la virulencia del germen.
El poder patógeno es la capacidad de un germen de implantarse en un huésped y
de crear trastornos en él.
Dicho poder patógeno está ligado a dos causas:
- La producción de lesiones en los tejidos mediante constituyentes de la
bacteria, como pueden ser enzimas que ella excreta y que atacan tejidos vecinos,
o productos tóxicos provenientes del metabolismo bacteriano.
- La producción de toxinas. Se puede tratar de toxinas proteicas (exotoxinas
excretadas por la bacteria, transportadas a través de la sangre y que actúan a

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distancia sobre órganos sensibles) o de toxinas glucoproteicas (endotoxinas),
estas últimas actuando únicamente en el momento de la destrucción de la bacteria
y pudiendo ser responsables de choques infecciosos en el curso de septicemias
provocadas por gérmenes gramnegativos en el momento en que la toxina es
brutalmente liberada.
A estas agresiones microbianas, el organismo opone reacciones defensivas
ligadas a procesos de inmunidad, mientras que el conflicto huésped-bacteria se
traduce por manifestaciones clínicas y biológicas de la enfermedad infecciosa.

Uso de las bacterias en la tecnología y la industria

Muchas industrias dependen en parte o enteramente de la acción bacteriana. Gran

cantidad de sustancias químicas importantes como alcohol etílico, ácido
acético, alcohol butílico y acetona son producidas por bacterias específicas.
También se emplean bacterias para el curado de tabaco, el curtido
de cueros, caucho, algodón, etc. Las bacterias (a menudo Lactobacillus) junto
con levaduras y mohos, se han utilizado durante miles de años para la preparación
de alimentos fermentados tales como queso, mantequilla, encurtidos, salsa de
soja, chucrut, vinagre, vino y yogur.
Las bacterias tienen una capacidad notable para degradar una gran variedad de
compuestos orgánicos, por lo que se utilizan en el reciclado de basura y
en biorremediación. Las bacterias capaces de degradar los hidrocarburos son de
uso frecuente en la limpieza de los vertidos de petróleo. Así por ejemplo, después
del vertido del petrolero Exxon Valdez en 1989, en algunas playas de Alaska se
usaron fertilizantes con objeto de promover el crecimiento de estas bacterias
naturales. Estos esfuerzos fueron eficaces en las playas en las que la capa
de petróleo no era demasiado espesa. Las bacterias también se utilizan para la
biorremediación de basuras tóxicas industriales. En la industria química, las
bacterias son utilizadas en la síntesis de productos
químicos enantioméricamente puros para uso farmacéutico o agroquímico.
Las bacterias también pueden ser utilizadas para el control biológico
de parásitos en sustitución de los pesticidas. Esto implica comúnmente a la
especie Bacillus thuringiensis (también llamado BT), una bacteria de suelo Gram-
positiva. Las subespecies de esta bacteria se utilizan como insecticidas
específicos para lepidópteros. Debido a su especificidad, estos pesticidas se
consideran respetuosos con el medio ambiente, con poco o ningún efecto sobre
los seres humanos, la fauna y la mayoría de los insectos beneficiosos, como por
ejemplo, los polinizadores.

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 IV. PROCEDIEMIENTO EXPERIMENTAL:

 Desinfectamos la placa y también el asa de siembra poniéndolo al mechero

al rojo vivo.

Muestra 1 Muestra 2

 Cogemos la muestra con el asa de siembra

y luego le agregamos una gota de agua
destilada.

 Echar 1 gota de azul violeta por un intervalo

de un minuto, luego pasaremos a enjuagarlo
con agua para bajar el tono.

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 Echar una gota de alcohol- acetona, para
lavar la muestra.

 Echar una gota de safranina por un

intervalo de un minuto.
 una gota de safranina por un
intervalo de un minuto.

 Enjuagarlo con agua y por ultimo dejarlo secar para

poder analizar la muestra.

 Repetimos los mismos pasos para la segunda muestra.

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 V. ANALISIS DE LOS RESULTADOS Y CONCLUSIONES:

En la figura 1 y 2, se puede apreciar

GRAM POSITIVOS. Esta bacteria se observa de color VIOLETA ya que en el
proceso de tinción donde se le agrego los diferentes colorantes, quedaron teñidas.

Estas bacterias presentan este color ya que la envoltura celular de las bacterias
Gram-positivas cubren la membrana citoplasmática y una pared celular compuesta
por una gruesa capa de peptidoglicano, que rodea a la anterior. La pared celular
se une a la membrana citoplasmática mediante moléculas de ácido lipoteicoico.

La capa de peptidoglicano le proporciona una gran resistencia a estas bacterias y

es la responsable de retener el tinte durante la tinción de Gram
al poseer una gran proporción de este polímero complejo (mureína) la cual no
la hace susceptibles a la acción del solvente orgánico, sino que este
actúa deshidratando los poros cerrándolos, lo que impide que pueda escaparse el
complejo cristal violeta, y manteniendo la coloración azul-violácea.

CONCLUSIONES

1. La tincion gram es una tecnica fundamental a la hora del estudio de

bacterias y microorganismos, ya que según el comportamiento frente a
dicha tecnica , fue posible diferenciar los grupos de bacterias debido al
color que adquirian en su menbrana.

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2. Mediante la tinción de Gram, se logró identificar las bacterias
Gram positivas y Gram negativas gracias al color que tornan después de
ser teñidas ; en el caso de las bacterias Gram positivas se tiñen de
violeta( esto se debe a que gracias a que contienen una pared gruesa
de peptidoglicano) Lo contrario ocurre con el caso de las Gram
negativas, las cuales poseen una pared delgada con menos cantidad
de peptidoglicano .

VI. BIBLIOGRAFIA

1. (METODOLOGIA Y METODO TINCION GRAM)https://es.wikipedia.org/wiki/Tinci

%C3%B3n_de_Gram

2. https://www.seimc.org/contenidos/documentoscientificos/procedimientosmicrobiologia/
seimc-procedimientomicrobiologia37.pdf

3. GRAMPOSITIVA https://es.wikipedia.org/wiki/Bacteria_grampositiva

4. GRAMNEGATIVA https://es.wikipedia.org/wiki/Bacteria_gramnegativa

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