Universidad Austral de Chile

Facultad de Ciencias
Instituto de Química

QUIM 248 ANALISIS INSTRUMENTAL

Profesor: Dra. Sandra Orellana Donoso

Instituto Ciencias Químicas
Facultad de Ciencias
Universidad Austral de Chile
Fono: 63 2 293577
- Referencias Bibliográficas

Título: Análisis instrumental Autor: Skoog, Douglas A. Edición: 4a. ed. Editor: Madrid :
McGraw-Hill, 1994. Descripción: 935 p. Otros autores: Leary, James J. Fecha
publicación: 1994.

Título: Spectrometric identification of organic compounds Autor: Silverstein,

Robert M. Edición: 4a. ed. Editor: New York John Wiley 1981 Descripción: 442 p.
Otros autores: Bassler, G. Clayton Morrill, Terence C. Fecha publicación: 1981
Espectroscopía: Se basa en la interacción entre
la radiación electromagnética y el analito, o
bien en la producción de radiaciones por los
analitos

Espectroscopía de absorción molecular: Se

basa en la medida de transmitancia T o de
absorbancia A de disoluciones que se encuentran
en cubetas transparentes que tiene un camino
óptico de b cm.
La radiación electromagnética (REM) es una forma de E que se transmite por el
espacio a gran velocidad. Se describe como una onda con propiedades de longitud
de onda, frecuencia, velocidad y amplitud. Se denomina luz a la REM en las
regiones UV-vis
 La REM puede presentarse como ondas
consistentes en campos eléctricos y
magnéticos que oscilan perpendicularmente.

REM =

Campo eléctrico de una onda

sinusoidal en el espacio y
tiempo; es representado como
un vector.

CE es ┴ a la dirección de la propagación de la REM.

 Absorción Molecular
Cada molécula es capaz de absorber
longitudes de onda características del
espectro de radiación electromagnética
 En el vacío la luz tiene una máxima velocidad: c= 2,99792*108 m s-1

REM = =

En un medio con materia, la luz viaja a una velocidad

menor que c, n es cte y l debe reducirse cuando la
luz pasa de vacío a un medio con materia
La luz del sol (blanca) está compuesta por
una gama de radiaciones

a
mayor frecuencia Espectro Visible menor frecuencia

Violeta: 400-420 nm
¿Porqué algunas sustancias se ven
coloreadas (clorofila) y otras se ven
Indigo: 420-440 nm
blancas (aspirina)?
Azul: 440 -490 nm
Verde: 490-570 nm
Parte del espectro visible es absorbido
Amarillo: 570-585 nm y otra parte reflejado (color
Naranja: 585-620 nm complementario)
Rojo: 620-780 nm:
¿Porqué una solución roja se ve roja?
Una solución como la de Fe(SCN)2+ es roja no porque el
complejo agregue radiación roja al disolvente, sino porque
absorbe la radiación verde de la luz blanca que le llega y
trasmite inalterado el componente rojo. Así pues, en una
determinación colorimétrica del hierro que se basa en la
formación de un complejo con tiocianato, el cambio
máximo de la absorbancia con la concentración ocurre con
la radiación verde; mientras que el cambio de absorbancia
con la radiación roja es insignificante.
En general, La radiación utilizada para
un análisis colorimétrico debe ser el color
complementario de la solución del
analito.

La tabla siguiente muestra esta relación

para algunas regiones del espectro
visible.
 Espectro Visible

Intervalo de longitudes de Color de la luz Color complementario

onda (nm) absorbida trasmitido
400 - 435 Violeta Amarillo verdoso
435 - 480 Azul Amarillo
480 - 490 Azul verdoso Anaranjado
490 - 500 Verde azulado Rojo
500 – 560 Verde Púrpura
560 – 580 Amarillo verdoso Violeta
580 – 595 Amarillo Azul
595 – 650 Anaranjado Azul verdoso
650 – 750 Rojo Verde azulado
Espectro electromagnético, abarca amplio intervalo de energías

Métodos ópticos
Espectroscopia de absorción, se mide la cantidad de luz absorbida en fn de l.
Espectroscopia de fotoluminiscencia, se mide la emisión de fotones después de la absorción.
Estados vibratorios y rotacionales

No gira con libertad, no se observa la

estructura fina del espectro
 “Indica cuantitativamente la forma en que el grado de atenuación
depende de la concentración de la moléculas absorbentes y de la longitud
del trayecto en el que ocurre la absorción”
A= -log T = log P0
P
• Transmitancia: T = I/I0 A = -logT

• Valores de T y A:
• T : 0-1
• %T: 0 - 100%

• Valores de A:
• ∞ - 0 se usa ~ 0,05-1,2
 En las paredes de la
celda son posibles
perdidas por reflexión y
dispersión

Por ej; ~ el 8,5 % de un

haz de luz amarilla se
pierde por reflexión a su
paso por una celda de
vidrio
• Compensación de los efectos por pérdida requiere una comparación de E
Blanco o disolvente

Solución de analito

Absorbancia experimental

Constante de proporcionalidad: absortividad

Absortividad molar; Lmol-1 cm-1

Bloque de materia absorbente

Corte transverso del bloque de

• Es posible calcular la absortividad molar de especies cuando se conoce la
concentración.
• Se puede utilizar el valor medido de A para obtener la concentración si se tienen
valores absortividades y longitud de trayecto.
• Sin embargo, la absortividad depende de variables como el disolvente, la
composición de la solución y T°.
• Para trabajos cuantitativos es mejor calcular la absortividad en el momento del
análisis.
 • La ley de Beer puede aplicarse también a soluciones que contienen
dos o más tipos de sustancias absorbentes. Siempre y cuando no
haya interacción de las diversas especies, la absorbancia total de un
sistema de componentes múltiples a una sola longitud de onda es la
suma de las absorbancias de todos ellos. En otras palabras:

Atotal  A1  A2  A3  ......... An
  1bc   2bc   3bc  .........  nbc

La A total de un sistema de componentes múltiples a una sola l es la suma de

las A de todos ellos.
 Especie poliatómica absorbe
• Para que el paso del electrón de un orbital radiación IR, UV, vis

atómico o molecular de baja energía a otro de

alta energía, la energía hn del fotón debe
corresponderse exactamente con la diferencia de
energía entre los dos orbitales

Bandas de
absorción de mayor
E, formadas por
líneas muy juntas
 Absorción molecular

• Las moléculas cuando son excitadas por radiaciones UV; visible; o IR,
experimentan tres tipos de transiciones fotónicas.

Transiciones vibratorias Transiciones electrónicas Transiciones rotacionales

Causa vibraciones Relaciona Guarda relación

interatómicas, electrones en con la rotación de
relacionados con orbitales la molécula
los enlaces exteriores de la alrededor de su
químicos molécula centro de
gravedad.
 Absorción molecular

• Las moléculas cuando son excitadas por radiaciones UV; visible; o IR,
experimentan tres tipos de transiciones fotónicas.

Transiciones vibratorias Transiciones electrónicas Transiciones rotacionales

Como un todo a Relaciona Guarda relación

causa de electrones en con la rotación de
vibraciones orbitales la molécula
interatómicas exteriores de la alrededor de su
molécula centro de
gravedad.
Concentración alta de electrolitos
 Estas desviaciones aparecen cuando la especie

(+)
absorbente experimenta asociación,

(-)
disociación o reacción con el disolvente y se
generan productos cuya absorción es diferentes
a la del analito.

¿cómo se detecta?, a partir del  y de las Keq

En la práctica se utilizan fuentes
policromáticas, con distribución continua de
l junto con una rendija o filtro para aislar una
banda simétrica de l en torno a la l que se
requiere.

Una luz policromática,

(luz multicolor) consta
de muchas l.

En general, con un buen equipo es poco

probable que las desviaciones a Beer se
deban a radiación policromática
 La absortividad del
analito varía poco con l.

Gráfica ley de Beer

 Ps es la E radiante de la luz parásita

A’ (aparente) es menor frente

a luz parásita, y es más
significativa con A
(verdadera) más altas.
Si las celdas del analito y del blanco son de diferentes longitud de trayecto, o no son equivalentes en sus
características ópticas
in
Como se obtiene un espectro de absorbancia
La línea base
 Ejercicios
1) Una forma habitual de determinar el fósforo en la orina es tratar la muestra con molibdeno
(VI) después de separar las proteínas y luego reducir el 12-molibdofosfato resultante con ácido
ascórbico para obtener una especie de color azul intenso, llamado azul de molibdeno. La
absorbancia puede medirse a 650 nm. Un paciente produce 1122 mL de orina en 24 horas.
Se trata una alícuota de 1,00 mL de la muestra con molibdeno (VI) y se diluye hasta 50,00 mL.
Se prepara una curva de calibración al tratar alícuotas de 1,00 mL de soluciones patrón de
fosfato de la misma manera que la muestra de orina. Las absorbancias de los patrones y la
muestra de orina se determinan a 650 nm y se obtienen los siguientes resultados:

Solución Absorbancia a
650 nm (a) Calcule la pendiente, intersección y coeficiente de
1,00 ppm P 0,230 correlación de la curva de calibración. Determine los ppm de
2,00 ppm P 0,436
P en la muestra de orina.
3,00 ppm P 0,638
4,00 ppm P 0,848 (b) ¿Cuál es la masa en gramos de fósforo que elimina
Muestra de 0,518 diariamente el paciente?
orina
(c) ¿Cuál es la concentración de fosfato en la orina en mM?
Las características mas importantes de los métodos espectrofotométricos y fotométricos son:

1.Aplicabilidad; Gran cantidad de especies orgánica, inorgánicas, bioquímicas

absorben radiación UV-vis, se pueden determinar cuantitativamente. Las especies
que no absorben también pueden determinarse después de derivatizarlos.

2. Alta sensibilidad; Los limites de detección varían entre 10-4 y 10-5 M.

Con ciertas modificaciones se puede ampliar a 10-6 ó 10-7 M

3. Selectividad moderada a alta; Se puede identificar una l en que sólo absorbe el

analito. Aun cuando hay bandas sobrepuestas.

4. Buena exactitud; los errores relativos de concentración en un procedimiento

espectrofotométrico UV-vis se encuentran entre 1 y 5%, pudiéndose reducir aun más.

5. Facilidad y comodidad; estas mediciones se llevan a cabo de manera fácil y

rápida con loso instrumentos modernos, llegando incluso automatizarse.
Recipientes de

Convierte E
radiante en
señal eléctrica
medible
Las celdas, ventanas, lentes, espejos y elementos de selección de
l deben transmitir radiación en la región de l que se empleen.
 Una fuente apropiada debe generar un haz de radiación energético.
 El voltaje de salida debe ser estable.
 Las fuentes espectroscópicas son de dos tipos: fuentes continuas que emiten radiación
en que la intensidad varía de manera gradual en fn de l y fuentes de líneas que emiten
un N° limitado de líneas espectrales, en rango limitado de l.
Doble vida útil que W
Se utiliza un monocromador
o filtro para aislar la banda
de l deseada

Ancho de banda,
esta dado por el
intervalo de l que
pasa por un
monocromador
Comúnmente una
rejilla para la región
UV-vis contiene
entre 1200 y 1400
surcos/mm
Consisten en absorber toda la radiación de una fuente continua
 Corte transversal esquemático de un Filtro de Interferencia

Se utilizan con la radiación UV y visible, hasta 14 mm de l en el IR

 La energía transmitida tiene que ser detectada de alguna manera y convertida en una
cantidad cuantificable
Un detector es un dispositivo que indica la existencia de algún fenómeno físico

Producen electrones
( fotoemisión o
fotoconducción)
 La respuesta de un fototubo o
+ fotomultiplicador se base en el
Foto efecto fotoeléctrico
cilíndrico

Emisión de
Sellados dentro

y medible

Fotocorriente
 PMT es similar en construcción
al fototubo pero
significativamente más sensible

Su fotocátodo
es similar al
fototubo, ya (electrodos)
que emite
electrones
cuando se
expone a la
radiación
Cuando este proceso se repite en cada dinodo se han
producido entre 105 y 107 e por cada fotón incidente.

Electrones
emitidos

La amplificación resultante en el
ánodo puede ser de 106 o mayor.
 El Si es un semiconductor.

La conductividad del Si
mejora con la adición de
impurezas
(+)
(-)
Quedando un exceso de huecos que
Quedando un electrón libre para conducir
refuerzan la conductividad
Actualmente, se fabrican unión pn o un diodo pn que conducen en una sola dirección

Polarizacion
Inversa:
Cuando se
aplica voltaje al
diodo pn, para
que el
semiconductor
tipo p sea (-)
c/r al
semiconductor
tipo n.

Un detector de diodo de Si es más sensible que un simple fototubo al vacío,

pero menos que un tubo fotomultiplicador.
Se pueden monitorear todas las longitudes de onda simultáneamente,
con extrema rapidez (ns)

Espectroscopia de alta velocidad

• Detectores de transferencia de carga (CTD), para aumentar la sensibilidad

como los de los fotomultiplicadores.
• Detectores térmicos: IR, el rendimiento es mucho menor que los vistos
anteriormente.
Es un dispositivo electrónico que amplifica la señal eléctrica del detector, se puede
utilizar para hacer operaciones matemáticas sobre la señal y filtra lo no deseado.
EJ. Medidores digitales, registradores y monitores de computadores.

Celdas o probetas, transparentes a la

región del espectro que se desea detectar
Espectrofotómetros en la región UV y visible