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Palabras clave: (SAN) en salchicha china. El SAN se preparó mediante gelificación iónica, seguido de un secado natural al aire durante 20 días.
Ácido sórbico Después de la preparación, las actividades antimicrobianas y antioxidantes de varios grupos de tratamiento fueron analizadas
Nanopartículas de quitosano/tripolifosfato intermitentemente durante el almacenamiento a temperatura ambiente. Las muestras tratadas con SAN tuvieron niveles
Salchicha china
significativamente más bajos de bacterias, mohos y levaduras que el control en blanco (pb 0.05) durante los 72 días de
almacenamiento. Adicionalmente, las muestras tratadas con SAN también tenían niveles más bajos de bacterias sobrevivientes
que las muestras de quitosano/tripolifosfato después de 31-56 días de almacenamiento (pb 0.05). El valor de ácido tiobarbitúrico
y el pH de las muestras tratadas con SAN también fueron significativamente más bajos que los del control en blanco (pb 0,05).
Estos resultados indicaron que el SAN podría ser una buena estrategia de intervención para retardar la oxidación de lípidos e
inhibir el crecimiento microbiano en las salchichas chinas.
2018 Elsevier B.V. Todos los derechos reservados.
Historial del artículo: Los conservantes en la carne procesada plantean preocupaciones significativas asociadas con el cáncer intestinal y la diabetes,
Recibido el 13 de abril de 2018 e implican varios problemas de salud pública. Esto introduce la necesidad de conservantes más seguros para mantener las normas
Recibido en forma revisada el 23 de julio de 2018 de salud pública. Sin embargo, el desarrollo de alternativas más seguras a estos conservantes supone un reto importante para la
Aceptada el 7 de agosto de 2018 industria alimentaria. Una posible solución a este problema es el uso de nanopartículas cargadas como agentes conservantes.
Disponible en línea el 8 de agosto de 2018 Este estudio investigó los efectos antimicrobianos y antioxidantes de las nanopartículas de quitosano/tripolifosfato cargadas de
ácido sórbico.
2.1. Materiales
⁎ Autores correspondientes.
Direcciones de correo electrónico: dingwu10142000@hotmail.com (W. Ding), El ácido 2-tiobarbitúrico, el ácido tricloroacético, el triclorometano, el
dqzhang0118@126.com (D. Zhang), kevin_reed@student.uml.edu (K. Reed), alcohol anhidro (99%), el éter de petróleo (30-60 °C) y el éter anhidro fueron
Boce_zhang@uml.edu (B. Zhang).
suministrados por Kelong Chemical, Chengdu, China. Chitosan (grado de
deacetylation de 0.95 y viscosidad de 100-200 mPa-s), tripolifosfato de sodio
https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2018.08.034 0141-8130/© 2018 (98%), ácido sórbico (99%) fueron suministrados por Aladdin, Shanghai,
Elsevier B.V. Todos los derechos reservados. China. Todos los demás reactivos eran de calidad analítica. Aobox, Beijing,
Los aditivos naturales para la carne procesada son una prioridad para la China, suministró agar nutriente y medio de cultivo de rosa de Bengala. La
industria cárnica. Esta es una importante estrategia de mitigación de riesgos carne cruda fue comprada en Mart Supermarket, Yangling, China. 2.2.
para prevenir las enfermedades transmitidas por los alimentos, el cáncer, la Preparación y caracterización de SAN
diabetes y otros problemas de salud.
En este estudio, la salchicha china es seleccionada como el alimento La CTN fue preparada de acuerdo con nuestra publicación anterior[12].
modelo para investigar un conservante más seguro que pueda servir como una La preparación de SAN ha sido optimizada en nuestra investigación previa.
alternativa en todos los productos cárnicos procesados. De acuerdo con el mejor proceso de fabricación de SAN, se agregó 0,5 mg/mL
La salchicha china es uno de los productos cárnicos curados tradicionales de ácido sórbico (disuelto en etanol puro) a la solución de 1 mg/mL de CS con
más populares en todo el mundo, especialmente en Asia. A pesar de las ligeras agitación suave a 600 rpm durante 30 min a temperatura ambiente, y luego se
diferencias de sabor, la salchicha china comparte una composición de agregó 1 mg/mL de solución TPP gota a gota a la mezcla con agitación suave
ingredientes similar con otros productos cárnicos procesados importantes, con a 600 rpm durante otros 30 min. La tasa de masa entre CS, TPP y ácido sórbico
un alto contenido de agua, azúcar, proteínas y grasas. Como toda la carne fue de 5:1:1. Para la eficiencia de encapsulación de SAN, se encapsuló 0.7
procesada, la salchicha china a menudo se complementa con conservantes mg/mL de ácido sórbico por cada 1 mg/mL de ácido sórbico añadido en SAN.
como profilaxis del deterioro microbiano y la oxidación de los lípidos. De esta SAN podría liberar la mitad del ácido sórbico encapsulado en SAN en 24 h.
manera, debido a su popularidad, similitud con otras carnes, y al haber sido El CTN en este estudio fue fabricado de acuerdo con el proceso de preparación
sometida comúnmente a conservantes, la salchicha china es un modelo ideal de SAN sin ácido sórbico.
para probar conservantes alternativos. El tamaño de partícula de SAN es determinado por Malvern Zetasizer
El ácido sórbico fue elegido como agente conservante en este estudio, ya Nano ZS90 como 327.6 nm. El espectrograma de espectroscopia infrarroja
que es un agente no tóxico, antimicrobiano y antioxidante recomendado por por transformada de Fourier (FTIR) también confirmó la encapsulación del
la Organización de las Naciones Unidas para la Agricultura y la Alimentación
ácido sórbico. Las micrografías electrónicas de transmisión confirmaron que
(FAO) y la OMS. El ácido sórbico y su forma alcalina, los sorbatos, se
clasifican como generalmente reconocidos como seguros (GRAS)[3]. Se la SAN tenía una forma esférica. Las características de las partículas son
encontró que el ácido sórbico es un agente antimicrobiano de grado consistentes con nuestro informe anterior[12]. 2.3. Preparación de salchichas
alimentario contra las bacterias, el moho y la levadura presentes en los chinas
alimentos[4-8]. Sin embargo, la aplicación de ácido sórbico en los alimentos
es limitada debido a la baja solubilidad del ácido activo en el agua, lo que De acuerdo con el proceso básico de preparación de la salchicha china[21],
plantea importantes problemas en el procesamiento y almacenamiento de los se prepararon 10,0 kg de carne de cerdo para cada tratamiento de acuerdo con
alimentos. el proceso descrito a continuación. Estas salchichas se elaboraban con magro
Una solución potencial para abordar la solubilidad limitada es encapsular de cerdo (70%) y tocino (30%), que se picaba por separado en cubos de 1
el ingrediente activo en un sistema de administración a nanoescala que pueda cm2. Los siguientes aditivos fueron mezclados y añadidos a la mezcla de
mejorar la solubilidad y la estabilidad. La gelificación iónica se considera una carne de cerdo: 30 g/kg de cloruro de sodio, 70 g/kg de sacarosa, 2 g/kg de
de las formas más sencillas de desarrollar sistemas de administración a glutamato monosódico, 10 mL/kg de salsa de soja, 20 mL/kg de aguardiente
nanoescala[9-12]. Las nanopartículas de quitosano/tripolifosfato (CTN) son de 53° (Mart Supermarket, Yangling, China) y 50 mg/kg de nitrito de sodio.
uno de los sistemas de liberación más prometedores que se pueden preparar El cloruro de sodio, la sacarosa y la salsa de soja se utilizaron para ajustar el
por gelificación iónica sin disolventes orgánicos, ni agentes reticulantes sabor de la salchicha. Se utilizó glutamato monosódico para aumentar el sabor
tóxicos como el glutaraldehído[13]. En experimentos celulares con Calu-3 y de la salchicha. El alcohol blanco puede eliminar el olor de la carne cruda y
A549, la toxicidad de la CTN fue menor que la del quitosano[14,15], a la vez suavizar la textura de la salchicha. Se agregó nitrito de sodio para hacer que
que presentaba una capacidad superior de encapsular ingredientes activos para la salchicha exhibiera un buen color, inhibir el crecimiento de
conferir una mejor estabilidad y solubilidad[16-18]. Esto infiere que el CS y microorganismos causantes de enfermedades y la oxidación de lípidos que
el TPP son portadores superiores de nutrientes y fármacos con múltiples conduce a la ranciedad.
ventajas, incluyendo la liberación controlada in vitro de catequinas de té[19], Hubo cuatro tratamientos en total: control en blanco (BC), CTN, SAN y
la protección de la vitamina C en el tracto gastrointestinal de la trucha arco sorbato de potasio (PS). 20 mL de agua destilada (DW) se agregó a 100 g de
iris (Oncorhynchus mykiss) bajo condiciones severas para promover el muestra de salchicha como el BC. Se agregó el mismo volumen de CTN, SAN o
sistema inmunológico innato de los peces[16], o la expresión de la actividad PS como grupos de tratamiento. La concentración de cada ingrediente añadido
antimicrobiana mediante el uso de nanopartículas Ag-CS/TPP[20]. en la salchicha china antes del secado al aire se muestra en la Tabla 1.
Existen estudios limitados centrados en los efectos antimicrobianos y Utilizando una embutidora (Moffe, MO-385, Foshan Peach Blossom Island
antioxidantes del CTN cargado con ácido sórbico en productos cárnicos Electric Company, China), las mezclas de los cuatro grupos de tratamiento se
llenaron herméticamente en tripas de cerdo (Mart Supermarket, Yangling, China) de calidad analítica. El valor del TBARS se calculó de acuerdo con la siguiente
y posteriormente se dividieron en cajas de comida a una longitud de unos 15 cm ecuación:
por unidad. Los embutidos se colgaron en alambre metálico, se etiquetaron y se
secaron a 20 °C con una humedad relativa del 35%. Los indicadores pertinentes
TBARS=ðmg=kgÞ ¼ ðA532nm-A600nmÞ=155 ð1=10Þ 72:6 1000: ð1Þ
se midieron en los días 21, 31, 46, 56, 66 y 72 de almacenamiento, y se
necesitaron aproximadamente dos meses y medio para realizar una prueba de
almacenamiento. Todos los experimentos se realizaron en triplicados. Se
Además, las cantidades de TBARS se expresaron en mg de malondialdehído
utilizaron 360 g de salchichas chinas para el tratamiento durante cada prueba de
(MDA) por cada 100 g de muestra.
almacenamiento. Cada muestra constaba de 3 muestras paralelas, por lo que se
detectaron 24 muestras cada vez y 432 muestras acumulativas.
2.6. Medición del valor de pH
2.5. Evaluación de la oxidación de lípidos 3.1. Efectos antimicrobianos del SAN en la salchicha china
Los POV (valores de peróxido) y AV (valores de acidez) se midieron de Como muestra la Fig. 1, los recuentos totales de bacterias (TBC) en todos los
acuerdo con la norma nacional GB/T 5009.37-2003[24] de la República Popular grupos de tratamiento y muestras de grupos de BC aumentaron durante el período
China, con pequeñas modificaciones. Muestras de diferentes grupos de de almacenamiento. Después de 72 días de almacenamiento, el TBC en el grupo
tratamiento fueron picadas, y el componente orgánico fue extraído con éter de SAN estaba por debajo de 7 Log CFU/g, que es el Límite Máximo Permitido
petróleo por un evaporador rotativo (RE-52A, Yarong Biochemical Instrument, (LMP) recomendado por la ICMSF (Comisión Internacional de Especificaciones
Shanghai, China). Los siguientes pasos fueron los mismos que los descritos en Microbiológicas para la Agricultura y la Alimentación).
la norma. Para estos experimentos, se realizaron pruebas en blanco bajo las
mismas condiciones.
Por el método de Nam[25], con algunas modificaciones, el valor de las
sustancias tiobarbitúricas reactivas al ácido (TBARS) se midió por el valor de
Dual-
Cuadro 1
Concentración (μg/g) de los ingredientes añadidos en la salchicha china antes del secado al aire. a
Tratamiento CS TPP Ácido sórbico P.D.
Grupo BC 0 0 0 0
Grupo CTN 125 25 0 0
Grupo SAN 125 25 25 0
Grupo PS 0 0 0 33.5
a Se
utilizaron concentrados cuando se los complementó en la muestra de salchichas. Concentrados
de nanopartículas formadas por CS, TPP y ácido sórbico con un contenido de 1 mg/mL, 1 mg/mL,
0,5 mg/mL, y
alimentos)[27], mientras que los otros tres tratamientos tenían un TBC más alto
0,67 mg/mL del principio activo, respectivamente. que el valor de MPL.
30 Q. Wang et al / International Journal of Biological Macromolecules 120 (2018) 28-33
Espectrofotometría de longitud de onda. En resumen, se homogeneizaron 10 g El conteo total de glóbulos rojos en los grupos de SAN fue
de salchichas chinas picadas con 50 mL de solución de ácido tricloroacético al significativamente menor que en los grupos de BC y PS durante el
7,5% (incluyendo 0,1% EDTA), se mezclaron en un agitador durante 30 min a almacenamiento, y fue significativamente menor que en el grupo de CTN
una velocidad moderada y luego se filtraron a través de papel de filtro cualitativo desde el día 56 hasta el día 66. Estos resultados sugieren que el ácido sórbico
para recuperar el sobrenadante. Luego, se colocaron 5 mL de sobrenadante cargado por nanopartículas CS/TPP podría ejercer eficazmente sus efectos
recolectado de diferentes grupos de tratamiento en un matraz de precipitados y antimicrobianos y de liberación sostenida.
se agregaron 5 mL de solución de ácido 2tiobarbúrico 0.02 mol/L. Las mezclas Como muestra la Fig. 2, el número total de mohos y levaduras (YM) en
se incubaron en un baño de agua hirviendo durante 40 minutos y luego se todos los embutidos del grupo de tratamiento y del grupo BC aumentó durante
enfriaron a temperatura ambiente durante 1 h. Se añadieron 5 ml de cloroformo el período de almacenamiento. El YM en los grupos SAN fue
a las mezclas para agitarlas. Después de la estratificación estática, el significativamente menor (p b 0,05) que en los grupos CTN durante el período
sobrenadante se determinó a 600 nm y 532 nm en un espectrofotómetro (UV- de almacenamiento posterior. Durante todo el período de almacenamiento, el
2500, SRLS, Japón). El análisis se realizó por triplicado. Todos los reactivos eran YM en los grupos SAN fue significativamente menor (p b 0,05) que en los
Q. Wang et al / International Journal of Biological Macromolecules 120 (2018) 28-33 31
grupos BC y PS. Los resultados indicaron que las nanopartículas de CS/TPP 3.2. Efectos antioxidantes del SAN en la salchicha china
cargadas de ácido sórbico podrían ejercer sus efectos de liberación sostenida
para inhibir el crecimiento de mohos y levaduras. El POV es el indicador de la rancidez oxidativa de los lípidos durante la
La misma concentración de SAN y PS, la primera tiene un mejor efecto etapa inicial[34]. La Fig. 3 muestra los cambios en el POV de la salchicha
antibacteriano en el embutido chino, o se puede decir que la concentración china por diferentes tratamientos. Durante el almacenamiento, el POV del
requerida para lograr el mismo efecto bacteriostático, la primera debe ser grupo SAN (excepto el día 31) y el grupo CTN fueron significativamente más
mucho menor. Combinado con el análisis teórico, la razón esencial de los bajos que el grupo BC (p b 0,05), lo que indica la actividad antioxidante de
resultados experimentales anteriores es que la PS tiene un mayor grado de SAN y CTN. Hubo una diferencia significativa (p b 0,05) entre los grupos
disociación en el sistema neutro, y es difícil formar una molécula de ácido SAN y CTN durante el período de almacenamiento inicial, pero los resultados
sórbico que sea verdaderamente bacteriostática[28]. La SAN resuelve se invirtieron durante el período de etapa posterior. La función antioxidante
eficazmente este problema, utilizando la nanotecnología para proporcionar del SAN fue mejor que la de la
más moléculas ácidas no disociadas para matar microorganismos.
Hasta la fecha, aunque la actividad antimicrobiana del ácido sórbico y el
quitosano ha sido ampliamente reportada en los envases de alimentos
antimicrobianos[29-32], se dispone de pocos informes sobre su efecto en los
productos cárnicos. Lei[31] estudió las actividades antimicrobianas de las
películas de politereftalato de etileno/polipropileno tratadas con plasma
ensambladas con quitosano y varios conservantes para el envasado de
alimentos antimicrobianos. Los resultados indicaron que los índices de
inhibición contra Escherichia coli alcanzaron casi el 100%. Hsu y Sun[33]
reportaron que el tratamiento con PS resultó en una disminución en el conteo
de bacterias en albóndigas emulsionadas. Se requieren estudios adicionales
para evaluar las actividades antimicrobianas de la SAN añadida a las
salchichas y otros productos cárnicos.
Fig. 1. Cambios en el TBC de la salchicha china tratada por diferentes procesamientos durante el El POV del grupo de BC fue significativamente más alto que el de otras
almacenamiento. Diferentes letras en una columna significan una diferencia significativa (p b 0,05). muestras del grupo de tratamiento (b0.05), excepto el día 31, lo que indica
BC: Blank Control; CTN: nanopartículas CS/TPP; SAN: nanopartículas CS/TPP cargadas con
que la adición de conservantes podría retardar la oxidación. La POV en la
ácido sórbico; PS: sorbato de potasio.
Fig. 2. Cambios en el número de mohos y levaduras (YM) del embutido chino tratado por SAN fue significativamente menor (p b 0,05) que la del grupo PS durante todo
diferentes procesos durante el almacenamiento. Diferentes letras en una columna significan una el período de almacenamiento y fue significativamente menor (p b 0,05) que
diferencia significativa (p b 0,05). BC: Blank Control; CTN: nanopartículas CS/TPP; SAN: la del grupo CTN durante el período de almacenamiento posterior. Esto
nanopartículas CS/TPP cargadas de ácido sórbico; PS: sorbato de potasio. demuestra que el progreso de la etapa de preoxidación y la degradación de los
peróxidos creados fueron moderados[38]. Los resultados sugirieron que el
SAN podría tener un mejor efecto que el CTN y el PS en la inhibición de la
oxidación de la salchicha china.
Como se muestra en la Fig. 4, los valores del TBARS de todas las muestras
del grupo de tratamiento aumentaron durante los primeros 50 días de
almacenamiento y luego disminuyeron. El MDA, el producto intermedio de
la oxidación en las salchichas chinas, puede oxidarse a ácidos orgánicos que
evitan la reacción entre el MDA y el TBARS[39,40].
El valor TBARS del grupo BC fue significativamente más alto que el de
otras muestras del grupo de tratamiento (p b 0,05), lo que indica que la adición
de conservantes podría retardar la oxidación. El valor TBARS del grupo SAN
fue
Fig. 3. Cambios en el POV de la salchicha china tratada por diferentes procesamientos durante
el almacenamiento. Diferentes letras en una columna significan una diferencia significativa (p
b 0,05). BC: Blank Control; CTN: nanopartículas CS/TPP; SAN: nanopartículas CS/TPP
cargadas con ácido sórbico; PS: sorbato de potasio.
3.3. Valor pH