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Feathers as agro industrial waste: Their biotechnological utilization to develop

new added value products

Article  in  Revista de la Facultad de Ingenieria · January 2003

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6 authors, including:

Carolina Bernal Annalisse Bertsch

Central University of Venezuela Laval University
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Omar Estrada
Venezuelan Institute for Scientific Research
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 Revista de la Facultad de Ingeniería de la U.C.V., Vol. 18, N° 3, pp. 00-00, 2003

LAS PLUMAS COMO RESIDUO AGROINDUSTRIAL: SU UTILIZACIÓN

BIOTECNOLÓGICA PARA PRODUCIR INSUMOS DE INTERÉS INDUSTRIAL
COELLO, N.1, BERNAL, C.1, BERTSCH, A.2, ESTRADA, O.3, MOCCÓ, Y.1, HASEGAWA, M.3
1
Laboratorio de Procesos Biotecnológicos. IBE. Facultad de C iencias. 2Instituto de Química y Tecnología. Facultad
de Agronomía. 3Laboratorio de Productos Naturales. Escuela de Química. Facultad de Ciencias. Universidad Central
de Venezuela. mcoello@reacciun.ve

Recibido: Noviembre de 2002 Recibido en forma final revisado: Octubre de 2003

RESUMEN

Las plumas son un subproducto de la industria avícola, ricas en proteína (principalmente queratina), que se generan
en grandes cantidades como resultado del procesamiento de las aves de corral. Por muchos años las plumas han sido
objeto de estudios alimenticios para utilizarlas como suplemento proteico en la nutrición animal. Así, la industria
avícola se ha beneficiado de su uso a la vez que contribuye a disminuir el impacto ambiental producto de su
acumulación. Industrialmente las plumas se procesan a alta presión y temperatura para producir la harina de plumas.
Sin embargo, este producto tiene dos limitaciones importantes: desequilibrio aminoacídico y baja digestibilidad. A
pesar de ello la harina es utilizada en la nutrición de aves de corral (5%), trucha arco iris (15%), camarones (33%) y
salmones (40%), pero requiere ser suplementada con aminoácidos, especialmente L-lisina. Su valor nutricional
puede ser mejorado mediante acción microbiana por la modificación de la estructura de la queratina e incremento del
contenido aminoacídico. De allí el creciente interés en desarrollar métodos alternativos para el tratamiento de las
plumas con el fin de mejorar su calidad nutricional e incluso desarrollar nuevos productos de mayor valor agregado.

El presente trabajo se realizó con una cepa bacteriana de Kocuria rosea, aislada del suelo, para determinar su
potencial productor de harina de plumas fermentadas, enzimas y pigmentos carotenoides en fermentación sumergida
de plumas. Bajo estas condiciones: 1) K. rosea excreta al menos dos actividades proteolíticas, capaces de degradar
queratina, colágeno y elastina. 2) la harina de plumas enriquecida con las células de K. rosea contiene principalmente
proteína (67%), cuya digestibilidad in vitro (88%) es similar a la reportada para la harina de plumas convencional. La
biomasa bacteriana mejora el contenido de los aminoácidos esenciales lisina, histidina y metionina en la harina
fermentada. Además, por datos espectrométricos se detectó que la bacteria sintetiza astaxantina, un pigmento rosa-
naranja, de utilidad en la agroindustria para mejorar la pigmentación de ciertos alimentos y en la acuicultura de
salmónidos.
Palabras claves: plumas, Kocuria rosea, proteasas, fermentación, harina de plumas, carotenoides, astaxantina.

LAS PLUMAS COMO RESIDUO AGROINDUSTRIAL: SU UTILIZACIÓN

BIOTECNOLÓGICA PARA PRODUCIR INSUMOS DE INTERÉS INDUSTRIAL
ABSTRACT

The feathers as agro-industrial waste: their biotechnological utilization to develop new added value products
Feathers are a poultry by-product rich in protein (mainly keratin), generated in very large amounts as a waste product
from the poultry-processing industry. For many years, feathers have been subject to nutritional studies in order to
incorporate them as protein supplement in animal feedstock. This allows poultry industry to take advantage of their
usefulness and eliminates the environmental problem of their accumulation. Industrially, a great part of the feather
waste is cooked under high pressure and temperature, producing a feather meal. However, this product has two
important nutritional limitations: an amino acid imbalance and poor digestibility. In despite of this the meal is used in
nutrition of chicken poultry (5%), rainbow trout (15%), shrimp (33%) and salmon (40%) but need amino acids
supplementation, especially feed-grade L-lysine. Their nutritional value might be improved by microbial action by
modification of the structure of keratin and increasing the amino acid content. Thus, there is a growing interest in
alternative methods for the treatment of feathers to improve the nutritional quality of the feather meal and to develop
new added value products (enzymes, pigments, etc).
This research has been conducted on bacterial strain of Kocuria rosea isolated from soil, to determine their potential
use to produce fermented feather meal, enzymes and carotenoid pigments in feathers submerged fermentation. Under
these conditions: 1) K. rosea excretes at least two proteolytic activities, able to degrade keratin, collagen and elastin.
2) The feather meal enriched with cells of K. rosea mainly contains protein (67%), with an in vitro digestibility
(88%) similar to the value of the commercial non fermented feather meal. The bacterial cells incorporated into the
final product improve the content of essential amino acids lysine, histidine and methionine. Additionally, by
spectrometric data it was detected that this bacterium synthesizes an orange-pink carotenoid pigment astaxanthin,
that may useful in alimentary industry for increase colour of some foods and salmonids feed in aquaculture
operations.
Keywords: poultry feathers, Kocuria rosea, proteases, fermentation, feather meal, carotenoids, astaxanthin

INTRODUCCIÓN Si se considera el alto costo termo-energético del

La biotecnología permite la bioconversión de residuos
agroindustriales en insumos de interés industrial
mediante el uso microorganismos (Crueger y Crueger,
1982). Además del interés económico que ello supone
para la producción de insumos de mayor valor agregado
(enzimas, proteína unicelular, pigmentos, antibióticos,
etc.), la utilización de subproductos agroindustriales
tiene incidencias en la preservación de la calidad del
medio ambiente al considerar el desarrollo de
tecnologías "limpias" orientadas hacia una
transformación sustentable de los recursos naturales. La
búsqueda de materias primas de bajo costo y fácil
adquisición que puedan ser utilizados como sustratos
fermentables (fuentes de C o N) en la preparación de
medios de uso microbiológico constituye uno de los
retos más interesantes de la biotecnología actual. En
este sentido, existe un gran número de subproductos de
la agroindustria que podrían ser utilizados como
sustratos no convencionales, tales como desechos de
camarones, pescado y plumas entre otros.
Las plumas son los residuos queratinosos más
abundantes en la naturaleza (88% queratina). De
acuerdo a la Federación Nacional de Avicultores
(FENAVI) en Venezuela existen 54 plantas
beneficiadoras de aves que en el año 2000 generaron
671.077 Ton de carne de pollo (aproximadamente
49.208 Ton de plumas). El aumento sostenido en el
procesamiento de las aves de corral ha intensificado la
búsqueda de procedimientos para la utilización de los
subproductos resultantes de su beneficio (como las
plumas), con los consecuentes beneficios económicos y
ambientales. En la actualidad gran parte de las plumas
son procesadas a alta temperatura y presión para la
obtención de harina destinada a la alimentación animal
(Onifade et al., 1998). Sin embargo, aunque el
contenido proteico de las plumas es alto (95%), la
harina obtenida tiene escaso valor nutricional debido a
desbalances en los aminoácidos esenciales y a la
formación de aminoácidos no nutritivos (lantionina)
durante su procesamiento físico-químico (Wang y
Parsons., 1997).
proceso convencional para la obtención de la harina de
plumas, la bioconversión de este sustrato en harina de
plumas fermentadas, mediante microorganismos,
constituye una estrategia interesante (Shih et al., 1998).
En primer término, producto de la acción microbiana la
queratina de las plumas resultará hidrolizada hasta
obtener péptidos y aminoácidos que harán a la harina
de plumas fermentadas más digestible. Por otra parte, el
producto obtenido tendría mayor valor nutricional
debido al aporte aminacídico de la proteína microbiana
(Elmayergi y Smith, 1971; Williams et al., 1991). Al
nivel mundial existe una demanda creciente en fuentes
proteicas alternativas ya que ellas representan un alto
porcentaje de los costos en los sistemas de producción
animal (pollos, cerdos, truchas, camarones, etc.). Los
procesos biotecnológicos para la degradación de las
plumas, además de incrementar su valor agregado
permiten reducir el impacto ambiental resultante de su
acumulación y procesamiento.
El uso de plumas como sustrato fermentable implica la
secreción, por parte del microorganismo, de queratinasas
capaces de degradarlas. Este fenómeno está asociado a
la necesidad de la célula de hidrolizar sustratos proteicos
de gran tamaño en moléculas pequeñas para su
aprovechamiento como fuente de nutrientes. Entre los
microorganismos con actividad queratinolítica se han
reportado hongos (Böckle et al., 1995; Santos et al.,
1996) y en menor número especies bacterianas
(Williams et al., 1990; Coello y Vidal, 2001). Para fines
comerciales estas enzimas han sido purificadas o
utilizadas como extractos crudos obtenidos del jugo de
fermentación (Nickerson, 1961). El mercado mundial de
las enzimas proteolíticas está por encima de los 1,5
billones de dólares y se anticipa que para el año 2008
esta cifra habrá duplicado su valor (Lowe, 2001). Las
proteasas de origen microbiano representan cerca del
24% de las enzimas comerciales y han sido incluidas
con éxito en numerosos procesos de la industria
alimenticia, farmacéutica, cosmética y peletera como
agentes catalizadores; además por su naturaleza
biodegradable, las enzimas se consideran aliadas en la
conservación del medio ambiente
Por su parte, los pigmentos carotenoides son derivados
polisopreicos de 40 átomos de carbono, las cuales en su
mayoría son moléculas simétricas, lineales o
parcialmente cicladas con abundancia de dobles enlaces
conjugados. Carotenoides como la astaxantina y
cantaxantina dan la coloración característica a algunos
invertebrados marinos (langosta, camarón, etc.), a la
musculatura de los salmónidos y al plumaje de ciertas
aves como flamingos y canarios. Una de las aplicaciones
comerciales de los pigmentos en la agroindustria es su
utilización para mejorar la pigmentación de salmones y
truchas de granja, pero se trata de una práctica costosa.
A título de ejemplo, Roche-vitaminas (2002) produce
astaxantina a un costo aproximado de $US 185 el
kilogramo, en gránulos que contienen 8% del pigmento.
La síntesis de pigmentos carotenoides ha sido reportada
en hongos y bacterias (Cooney y Berry, 1981;
Sandmann, 1994; Meyer y Du Preez, 1994;
Chattopadhyay et al., 1997; Kusdiyantini et al. 1998).
En los microorganismos los pigmentos se sintetizan a
partir del isopentenil pirofosfato, por la vía del
mevalonato, para la formación de tetraterpenos y se
localizan en la membrana celular; su presencia en
bacterias no-fotosintéticas parece estar asociada con una
función fotoprotectora de macromoléculas vitales
(ADN) de las radiaciones ultravioleta (Nelis y De
Leenheer, 1991). La búsqueda de una producción
microbiana de astaxantina puede constituir una
alternativa económica interesante, sobretodo si se
considera la utilización de plumas como sustrato
fermentable, ya que además de obtener un concentrado
proteico enriquecido en la biomasa microbiana, la
astaxantina presente incrementaría su valor agregado.
El presente trabajo tiene como propósito presentar los
resultados de investigación obtenidos con Kocuria
rosea, bacteria capaz de degradar plumas y mostrar su
potencial productor de enzimas, pigmentos microbianos
e hidrolizados proteicos.
MATERIALES Y MÉTODOS
Microorganismo
En este estudio se utilizó la cepa Kocuria rosea (LPB-3)
perteneciente al cepario del Laboratorio de Procesos
Biotecnológicos del Instituto de Biología Experimental
(IBE) de la Universidad Central de Venezuela. La cual
fue aislada de un depósito colector de desechos avícolas
(Coello y Vidal, 2001). La conservación de la cepa se
realiza en estrías de medio sólido que contienen harina
de plumas (20 g/l) obtenida de la Planta Proagro de
Protinal (Edo. Carabobo, Venezuela).
Medio de fermentación y condiciones de cultivo
La cepa LPB-3 se cultivó en un fermentador Bioflow III
(New Brunswick Scientific, NJ, USA) de 5 L de
capacidad en un medio salino (Williams et al., 1990)
que contiene (g/l): NH4Cl, 0.5; NaCl, 0.5; K2HPO4, 0.3;
KH2PO4, 0.4; MgCl2.6H2O, 0.1 y extracto de levadura,
0.1 (pH 7,5). Este medio fue suplementado con 20 g/l de
plumas molidas colectadas en una planta de tratamiento
de subproductos avícolas (CODALSA C. A., Edo.
Aragua, Venezuela). Posteriormente el medio fue
esterilizado por autoclave 121º C por 15 minutos. La
fermentación se llevó a cabo durante 24 horas a 40oC,
1,8 vvm, 400 rpm de agitación y estimación en línea del
pH (electrodo Ingold, MA, USA). Un medio precultivo
(5 g/l de plumas) en una proporción de 10 % sirvió de
inóculo del fermentador con un volumen de trabajo de 4
litros.
Determinaciones analíticas
Finalizada la fermentación el caldo fue filtrado a través
de papel Whatman No. 4 para retener las plumas no
degradadas. Alícuotas del caldo fueron utilizadas para la
medición de la densidad celular por turbidimetría
(DO600nm) y la absorbancia fue posteriormente
transformada en biomasa (peso seco, g/l), a través de
una curva de calibración (DO*0.1817). Para tal fin las
células fueron centrifugadas a 5.000 g por 20min a 10oC,
lavadas dos veces con agua y secadas por 24 h a 105 o C.
El resto del caldo filtrado fue centrifugado (5.000 g por
10 min a 10oC), el sobrenadante recuperado para los
ensayos enzimáticos y el sedimento celular utilizado
para la extracción de los pigmentos microbianos.
Ensayos enzimáticos
Las actividades enzimáticas fueron estimadas por
espectrofotometría utilizando para ello sustratos
específicos para cada enzima.
(a) La actividad queratinolítica fue determinada
utilizando como sustrato keratin azure (SIGMA®)
(Letourneau et al., 1998). La mezcla de reacción (1 ml)
contiene: 30 mg del sustrato en buffer carbonato 50 mM
(pH 10) y un volumen de caldo de fermentación
equivalente a 0.01 µg de proteína. La reacción se llevó a
cabo a 40oC por 1 h con agitación constante (250 rpm) y
se detuvo colocando los tubos en baño de hielo.
Posteriormente, la mezcla de reacción es centrifugada
(10.000 g por 10 min) y el sobrenadante recuperado para
estimar la absorbancia DO595 nm (Shimadzu UV2101PC,
Tokyo, Japón). Como blanco de la reacción se realizó un
ensayo sin enzima bajo las condiciones descritas. Una
unidad de actividad queratinolítica es definida como la
cantidad de enzima requerida para causar el incremento
de 0.01 unidades A595nm en 1 h.
(b) Las actividades colagenolítica y elastinolítica fueron
determinadas siguiendo el método de Bressollier et al.,
(1999), el cual utiliza como sustratos colágeno tipo I de
bovino y elastina (SIGMA®) respectivamente. La
mezcla de reacción (1 ml) contiene: 0,5% (p/v) de cada
sustrato en buffer Tris-HCl 50 mM (pH 8,5) y un
volumen de caldo de fermentación equivalente a 0.01 µg
de proteína. La reacción se llevó a cabo a 50 oC por un
periodo de 120 min con agitación constante (900 rpm) y
se detiene por adición de 10 µl de ácido acético 10 M.
Posteriormente, la mezcla de reacción es centrifugada
(10.000 g, 10 min, 4º C) y el sobrenadante recuperado
para la determinación de los grupos amino libres a
DO578 nm utilizando ninhidrina (SIGMA®). Una unidad
de actividad colagenolítica o elastinolítica es definida
como la cantidad de enzima requerida para liberar
1µmol de glicina en 1 h. El contenido de proteínas se
determinó utilizando como estándar albúmina bovina y
el reactivo Bio-Rad (Munich, Germany) de acuerdo al
método de Bradford, (1976). Todos los ensayos
enzimáticos fueron realizados por triplicado.
Zymogramas
Este tipo de geles permiten visualizar las actividades
proteolíticas presentes en los caldos de fermentación
como bandas claras sobre un fondo azul. Para tal fin se
utilizó un gel PAGE-SDS (7,5 %) co-polimerizado con
gelatina (10 mg/m) bajo las condiciones descritas por
Laemmli (1970). Después de la electroforesis, el gel fue
lavado con Triton X-100 2,5 % (v/v) por 30 min a
temperatura ambiente e incubado por 1 h a 40 o C en
buffer carbonato 50mM (pH 10) para el desarrollo de la
reacción enzimática. Posteriormente, el gel fue teñido
con Coomassie brilliant blue R-250 (SIGMA®) y
decolorado con ácido acético glacial-agua-metanol
(1:4,5:4,5) para revelar las bandas claras de actividad
proteolíticas. Los siguientes estándares de peso
molecular (Bio-Rad, USA) fueron corridos bajo las
mismas condiciones electroforéticas: miosina 209 kDa,
ß-galactosidasa 124 kDa, ovolbúmina 49,8 kDa y
anhidrasa carbónica 34,8 kDa.
Obtención y caracterización de la harina de plumas
fermentadas
Para la obtención de la harina de plumas fermentadas se
realizaron varias tandas de fermentación y la totalidad
del jugo fue filtrado mediante un tamiz de 1 mm para
retener las plumas no degradadas. Posteriormente, el
filtrado fue pasteurizado en un tanque agitado de doble
camisa a 70-72°C por 5 minutos y deshidratado en un
secador de doble tambor a una presión de 400-420 KPa,
0,106 mm de holgura y una velocidad de giro de 5 rpm.
El producto fue conservado en envases sellados y
almacenado a 5°C hasta su posterior utilización. La
harina de plumas fermentadas fue analizada en términos
de su contenido de aminoácidos utilizando un analizador
de proteínas (Beckman, SYSTEM 300), su composición
(materia seca, cenizas, extracto etéreo, proteína cruda,
fibra y carbohidratos) y digestibilidad in vitro de
acuerdo a las metodologías descritas por la A. O. A. C.
(1990). Muestras de plumas sin tratar fueron analizadas
en su composición y digestibilidad in vitro siguiendo la
metodología descrita, para su comparación con la harina
de plumas fermentadas.
Extracción y caracterización de los pigmentos
carotenoides de K. rosea.
El sedimento celular producto de la centrifugación del
caldo de fermentación fue utilizado para la extracción de
los pigmentos microbianos. Para tal fin, las células
fueron lavadas (5.000 g por 10 min a 10o C) una vez con
agua destilada y repetidamente con metanol hasta quedar
incoloras. Para el análisis de los pigmentos de K. rosea
todos los sobrenadantes metanólicos se unieron y
posteriormente se llevó a sequedad a presión reducida en
un rota-vapor. Al residuo resultante (2,3 g) se le realizó
una partición en una mezcla de hexano-agua-metanol
(5:1:5) para obtener dos fases: hexano-metanol y
metanol/agua (método modificado de Lorquin. et al.,
1997). Ambas fases fueron evaporadas a presión
reducida y analizadas por su comportamiento en
cromatografía de capa fina (CCF). El residuo de la fase
hexano/metanol (1,5 g), debido a la coloración
característica de los pigmentos carotenoides, fue disuelto
en acetona y la fase soluble resultante fue llevada a
sequedad (200 mg) y aplicada a una columna de fase
reversa RP-18 (columna LoBar de Merck), eluida con
una mezcla de acetonitrilo y metanol (9:1), para la
separación de la mezcla de pigmentos. De esta
cromatografía se obtuvieron 5 fracciones: A (4 mg), B
(7 mg), C (12 mg), D (20 mg) y E (25 mg), las cuales
fueron analizadas por cromatografía de gas acoplada con
espectrometría de masas (Varian Saturn 2000), equipada
con las librerías Nist y Willey, resonancia magnética
nuclear de protones y carbono 13 (Jeol Eclipse 270).
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Actividades proteolíticas presentes en el caldo de
fermentación de K. rosea
El zimograma del caldo de fermentación de K. rosea en
medio de plumas muestra la presencia de dos
actividades proteolíticas (Figura 1), con masas
moleculares aparentes de 90.2 y >200 kDa,
respectivamente.
Con la finalidad de determinar si la actividad
proteolítica observada sobre los zimogramas de gelatina
era capaz de degradar otros sustratos proteicos, se
realizaron ensayos enzimáticos utilizando colágeno,
elastina y keratin-azure. Los ensayos revelaron que las
proteasas presentes en el caldo de K. rosea tienen aprovechado en la preparación de cremas depilatorias.
actividad colagenolítica, queratinolítica y elastinolítica Por otra parte, se conoce que la industria peletera
(Tabla 1). Este resultado sugiere que las enzimas incluye enzimas queratinolíticas en diversas etapas para
proteolíticas excretadas por K. rosea poseen un amplio el ablandamiento, remoción del pelo y
espectro de acción en lo que se refiere a su capacidad de acondicionamiento de las pieles. Productos patentados
degradar sustratos proteicos diversos. como el Basozym® han sido desarrollados para este
propósito (BASF, 2002).
KDa
> 200 Caracterización de la harina de plumas fermentadas
209 por K. rosea

La tabla 2 muestra que la harina de plumas fermentadas

está compuesta principalmente de proteína (67%).
90, 2 Adicionalmente, la proteína de la harina de plumas
fermentadas es 3,5 veces más digestible que la obtenida
49, 8 con las plumas crudas. La digestibilidad es un parámetro
crítico en la evaluación de la calidad nutricional y de
acuerdo a la norma COVENIN (1981), su valor debe ser
al menos 80% en este tipo de producto. El incremento
observado en la digestibilidad resulta de la acción
34, 8 proteolítica de las enzimas excretadas por K. rosea
durante la fermentación. Acerca del mecanismo
enzimático de hidrólisis de la queratina se sugiere que en
primer lugar, la estructura compacta de la pluma es
Figura 1. Zimograma en gelatina de las actividades alterada por el rompimiento de los puentes disulfuro
proteolíticas presentes en el caldo de fermentación de K. entre las moléculas de cisteína presentes en la proteína.
rosea cultivada en medio con plumas (20 g/l). Posteriormente, el ataque enzimático a los enlaces
Marcadores de peso molecular: miosina 209 kDa, ß- peptídicos llevan a la degradación de la queratina hasta
galactosidasa 124 kDa, ovoalbúmina 49,8 kDa y péptidos y aminoácidos libres, moléculas que el
anhidrasa carbónica 34,8 kDa. microorganismo utiliza como nutrientes para su
propagación (Kunert, 1989). Por otra parte, el producto
Actividad enzimática (Unidades . mg-1) fermentado contiene fibra, carbohidratos y supera a las
Actividad Queratinolítica 51 plumas en cuanto a minerales y grasa (Tabla 2).
Actividad Colagenolítica 186
Actividad Elastinolítica 9 Análisis (%) PLUMAS HPF

Tabla 1. Actividades enzimáticas del caldo de Materia seca 93 ± 1,88 93,79 ± 0,07
fermentación de K rosea con diferentes sustratos
Proteína cruda 83 ± 1,71 67 ± 0,26
La versatilidad de actividad de estas enzimas puede ser
una ventaja a nivel aplicado, ya que podrían ser
incorporadas en procesos de industrias tan diversas Grasa 2,01± 5,10-3 4,60 ± 0,19
como la alimenticia, cosmética y peletera. Las
colagenasas y elastasas han sido incluidas con éxito en Cenizas 0,91 ± 0,11 15,60 ± 0,12
la industria alimenticia para el ablandamiento de la
carne y en el tratamiento de úlceras dérmicas y Fibra Cruda 0,60± 0,045 0,39 ± 0,035
quemaduras en el área biomédica (Ward, 1985). Con
respecto a la industria cosmética, es poca la información
que las empresas suministran acerca de la formulación Carbohidratos 6,48± 2 6,2 ± 0,07
de sus productos ricos en queratina. Sin embargo,
resaltan las bondades de los hidrolizados de queratina de Digestibilidad
peso molecular determinado, en conjunto con ceramidas 26±4,04 88± 0,64
"in vitro"
y vitaminas, para el tratamiento y restauración del
cabello. Adicionalmente, la inclusión de queratinasas
para facilitar la remoción del vello capilar y lograr un Tabla 2. Composición de las plumas y harina de plumas
proceso de depilado menos agresivo podría ser fermentadas (HPF).
En cuanto al contenido aminoacídico, las plumas se
caracterizan por presentar deficiencias en aminoácidos
esenciales (Wang y Parsons, 1997). La Figura 2 muestra
que la harina de plumas resultante del proceso
fermentativo presentó, respecto a las plumas, mayor
proporción de ciertos aminoácidos esenciales (lisina,
metionina, histidina, isoleucina, leucina, fenilalanina,
valina), producto del aporte aminoacídico de la biomasa
de K. rosea al producto obtenido por fermentación.
La literatura reporta que la calidad nutricional de las
harinas obtenidas por fermentación resultan enriquecidas
en su contenido de aminoácidos esenciales cuando se
incorpora al producto final, la biomasa microbiana
derivada del proceso fermentativo, lo cual incrementa su
valor agregado (Elmayergi y Smith, 1971; Williams et
al. 1991). A este respecto, cabe mencionar el carácter no
patógeno de la cepa LPB-3, por lo que se podría
considerar su uso en la alimentación animal.
Dada la composición del producto obtenido por
fermentación, su uso en la formulación de alimentos
para animales podría disminuir los costos de producción
al reducir la necesidad de incorporar aditivos, tales como
aminoácidos, vitaminas-minerales o alguna fuente
9
7
Contenido del aminoácido (%)
0
lys met
Figura 2. Comparación del contenido de aminoácidos esenciales entre las plumas sin tratar (■) y la harina de plumas
fermentada, HPF (□).
energética (grasa). No obstante, se requieren ensayos
adicionales de digestibilidad in vivo y pruebas
zootécnicas, que indiquen el valor nutricional y su efecto
sobre el crecimiento y desarrollo de animales de cría
(aves de corral, truchas entre otros), a fin de conocer el
uso potencial de este hidrolizado como suplemento
proteico. En este sentido, los resultados del presente
estudio, aunque preliminares, constituyen una evidencia
del mejoramiento del valor nutricional de este
subproducto de la agroindustria, por vía biotecnológica,
para ser usado como una fuente proteica alternativa.
Caracterización de los pigmentos carotenoides de K.
rosea.
De la cromatografía en columna las fracciones A y B, no
revelaron señales que pudieran ser atribuibles al ion
molecular de algún carotenoide. La fracción C la cual es
un sólido amorfo de color amarillo, arrojó el ion
molecular M-2 de m/z 578 el cual es consistente en la
literatura con el compuesto adorinubina (Stradi et al.,
1995a). Las fracciones D y E son sólidos amorfos de
color rojo.
his val ile phe leu cys thr arg
Aminoácidos
 O

H3C R´
H3C CH3 CH3 CH3

H3C CH3
CH3 CH3
R CH3 R=R´=H cantaxantina

O R=R´=OH astaxantina
R=OH,R´=H adorinubina

Figura 3. Estructura molecular de la astaxantina, cantaxantina y adorinubina.

En el espectro de masas, la fracción D presentó un ion AGRADECIMIENTOS

molecular m/z 564 el cual es consistente con la fórmula
molecular C40H52O2 correspondiente a lo reportado para Proyecto S1-2001-000728 de el Fondo Nacional de
el carotenoide cantaxantina. El espectro de masas de la Ciencia y Tecnología, Ministerio de Ciencia y
fracción E arrojó el ion molecular m/z 564 y el ion Tecnología.
molecular M-1 de m/z 595, este último consistente con
la fórmula molecular C40H52O4 lo cual indica que esta REFERENCIAS
fracción es una mezcla de los carotenoides cantaxantina
y astaxantina (Stradi et al., 1995a; 1995b; 1996; 2001). ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL
Las estructuras químicas de los carotenoides CHEMISTS. 1990. Official Methods of Analysis of
mencionados están presentadas en la Figura 3. the A.O.A.C. 15th edition. Washington D.C. pp. 69-
88.
BASF. 2002. Leather topics and technical information.
Estos pigmentos de color rojo-naranja son ampliamente
www.basf.com/leather.
utilizados por la industria de alimentos para intensificar
BÖCKLE, B., GALUNSKY, B. & MÜLLER, R. 1995.
el color de salmónidos y peces ornamentales, entre otras
Characterization of keratinolytic Serine proteinases
aplicaciones. Industrialmente son producidos por
from Streptomyces pactum. Applied Environmental
síntesis orgánica o extraídos de fuentes vegetales
Microbiology 61: 3705-3710.
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El proceso biotecnológico definido con la cepa de K.
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rosea puede ser de interés industrial, por cuanto incluye
VERNEUIL, B. 1999. Purification and
la valorización de las plumas y su bioconversión en
characterization of keratinolytic serine proteinases
productos de mayor valor agregado, con los
from Streptomyces albidoflavus. Applied and
consecuentes beneficios económicos y de la calidad del
Environmental Microbiology. 65: 2570 - 2576.
ambiente. No obstante, esta bacteria requiere de
CHATTOPADHYAY, M., JAGANNADHAM, M.,
investigación adicional (bioquímica, genética y pruebas
VAIRAMANI, M. & SHIVAJI, S. 1997. Carotenoid
de escalamiento, entre otras), con el fin de incrementar
pigments of an Antarctic psychotropic bacterium
la productividad de las enzimas proteolíticas y los
Microccocus roseus: temperature dependant
pigmentos carotenoides. Por otra parte, las pruebas
biosynthesis, structure and interaction with
zootécnicas de ganancia de peso y aceptabilidad son
synthetic membranes. Biochemical and Biophysical
necesarias para evaluar el uso de la harina de plumas
Research Communications 239: 85-90.
fermentada en truchas, salmones, etc. Adicionalmente,
COELLO, N. & VIDAL, L. 2001. Kocuria rosea as a new
los estudios de mercadeo y factibilidad económica son
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