Laboratorio med . Manuscrito del autor; Disponible en PMC 2016 el 1 de octubre.

Publicado en forma final editada como:

Laboratorio med. Otoño 2015; 46 (4): 290–298.
doi: 10.1309 / LM9SISYYKBA2ZDBY
PMCID: PMC4757486
NIHMSID: NIHMS758657
PMID: 26489673

Medición de HbA1c en sangre crevicular gingival mediante un

procedimiento de cromatografía líquida a alta presión
Michael A. Pesce , PhD, 1, * Shiela M. Strauss , PhD, 2 Mary Rosedale , PhD, 2 Jane Netterwald ,
MT (ASCP), 1 yHangli Wang , MT (ASCP) 1

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Resumen
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Introducción
Según la hoja informativa de la Diabetes Nacional de los Centros para el Control y la
Prevención de Enfermedades de 2011, la diabetes afecta a unos 25.8 millones de
estadounidenses ( 1 ). De estos, 7 millones no saben que tienen diabetes. Se estima que
79 millones de adultos en los Estados Unidos tienen pre-diabetes. La prediabetes es una
afección en la que los niveles de glucosa en sangre, plasma o suero y / o hemoglobina
glucosilada (HbA1c) son más altos de lo normal, pero no lo suficientemente altos como
para ser clasificados como diabetes. Las personas con pre-diabetes tienen la
oportunidad de mejorar su salud porque la progresión de la pre-diabetes a la diabetes
tipo 2 es reversible. Con cambios saludables en el estilo de vida, algunas personas
pueden volver sus niveles de glucosa a la normalidad y otras pueden retrasar la
progresión a la diabetes.
En 2014, la American Diabetes Association indicó que la HbA1c podría usarse para
diagnosticar pacientes con diabetes y prediabetes y para controlar el control glucémico
en pacientes con diabetes ( 2 ). El rango de diabetes se definió como un nivel de HbA1c
≥ 6.5%. Después del tratamiento, el objetivo de la mayoría de los pacientes adultos con
diabetes es un nivel de HbA1c de <7.0%. El rango de pre-diabetes se definió como un
nivel de HbA1c entre 5.7 y 6.4%.
En este artículo, los resultados de HbA1c se informarán en porcentaje de unidades de
HbA1c, según lo recomendado por el Programa Nacional de Normalización de
Glicohemoglobina (NGSP). Los resultados de HbA1c también se pueden informar en
mmol / mol, según lo recomendado por la Federación Internacional de Química Clínica
y Medicina de Laboratorio (IFCC). La conversión del porcentaje de HbA1c en mmol /
mol es mediante la siguiente ecuación:

% De HbAlc = ( 0.0915mmol / mol ) + 2.15.

Algunas de las ventajas de usar HbA1c para las pruebas de diabetes incluyen su baja
variación pre-analítica y biológica y el hecho de que los resultados de HbA1c reflejan
una exposición glucémica general sin el requisito de que el paciente esté en ayunas. La
HbA1c a menudo se mide en un laboratorio hospitalario utilizando sangre extraída
mediante punción venosa en tubos vacutainer de ácido etilendiaminotetraacético
(EDTA). La detección de diabetes fuera del laboratorio de un hospital (es decir, en el
consultorio de un proveedor de atención primaria) a menudo involucra la extracción de
sangre mediante punción con el dedo y la medición de HbA1c en el sitio con un
analizador de punto de atención o la detección de sangre en papel de filtro y el envío de
la sangre seca. Spot (DBS) a un laboratorio clínico para su análisis. La HbA1c se ha
medido en DBS obtenida mediante punción con punción digital mediante cromatografía
líquida de alta presión de intercambio iónico (HPLC) (3 , 4 ), cromatografía de afinidad
( 5 ) y ensayos inmunoquímicos turbidimétricos ( 6 - 8 ).
En este documento, presentamos análisis para respaldar el uso de otra fuente de
muestras de sangre, la sangre crevicular gingival (GCB), para detectar la diabetes en
pacientes dentales. Un estudio piloto que usó niveles de HbA1c de GCB para detectar
diabetes en pacientes dentales mostró que se podía detectar pre-diabetes o diabetes
( 9 ). Sin embargo, se presentaron datos analíticos limitados para validar el método de
HPLC y el 26% de las muestras no pudieron analizarse debido a un pico de
interferencia en el cromatograma. Por lo tanto, en este documento, proporcionamos
datos analíticos detallados y optimizados para validar un procedimiento de HPLC de
intercambio iónico para medir HbA1c en GCB manchado en papel de filtro.
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Materiales y métodos
Este estudio fue aprobado por las juntas de revisión institucional del Centro Médico
Langone (NYU) de la Universidad de Nueva York y el Centro Médico de la
Universidad de Columbia (CUMC). La GCB y la punción sanguínea (FSB) se
recolectaron de pacientes en las clínicas de práctica general del Colegio de Odontología
de la Universidad de Nueva York. FSB fue recolectado por enfermeras registradas o
estudiantes de enfermería capacitados y GCB fue recolectado por proveedores dentales
o estudiantes entrenados en higiene dental y dental. La HbA1c se midió en CUMC.

Coleccion de especimenes

Especímenes GCB
Todos los dentistas e higienistas dentales fueron capacitados para recolectar la muestra
de GCB de los pacientes mientras estaban sentados en el sillón dental. Después de
explorar y seleccionar un sitio que presentaba eritema y / o edema, el proveedor dental
aisló el área utilizando rollos de algodón para evitar la contaminación de saliva, escale
el área, secó el área con una gasa para eliminar contaminantes del diente y luego volvió
a sondear el área. sitio, lo que conduce a un flujo constante de sangre libre de
residuos. El proveedor dental extrajo sangre con una micropipeta y la transfirió a 2–3
discos en papel de filtro Whatman 903. La sangre se dejó secar a temperatura ambiente
durante una hora antes de la refrigeración antes de la transferencia al laboratorio para el
análisis de HbA1c.

Especímenes FSB
FSB también se recogió de los pacientes mientras estaban sentados en el sillón
dental. Después de limpiar el lado de la yema del dedo con una almohadilla de
preparación con alcohol, se dejó evaporar el alcohol y, después de que la piel se secó, se
perforó el lado de la punta del dedo con una lanceta estéril. La primera gota de sangre
se limpió con una gasa estéril. Con la palma de la mano del paciente boca abajo, la
sangre del paciente se recogió mediante una micropipeta y se transfirió a 2–3 discos en
papel de filtro Whatman 903. Al igual que con la muestra de GCB, se dejó que el FSB
se secara a temperatura ambiente durante una hora antes de la refrigeración en previsión
de la transferencia al laboratorio para el análisis de HbA1c.

Muestras de sangre entera (WBS)

La sangre para el análisis de HbA1c se recogió en CUMC mediante punción venosa en
tubos vacutainer con EDTA de 5 ml de Becton-Dickinson. Las manchas de sangre seca
de estas muestras se obtuvieron al detectar suficiente sangre en el papel de filtro
Whatman 903 para cubrir completamente el disco.

Instrumentación y Reactivos.
La HbA1c se midió utilizando el procedimiento de sangre completa por cromatografía
líquida de alta presión de intercambio iónico D-10 de Bio-Rad Laboratories (Hercules
Ca, 94547) que es rastreable a los métodos de referencia del Programa Nacional de
Normalización de Glicohemoglobina y la Federación Internacional de Química Clínica
y Medicina de Laboratorio. El programa de software D-10 calcula el área de HbA1c
utilizando un algoritmo gaussiano modificado de manera exponencial que excluye las
áreas de A1c y carbamilato responsables del área de pico de HbA1c.
Los reactivos se obtuvieron de Bio-Rad y consistieron en tampones de elución con bis-
trifosfato de pH 6.0 y 6.7, una solución diluyente de lavado de agua desionizada, una
resina de intercambio catiónico y un cebador de sangre total.

Procedimiento

Para muestras GCB, FSB y WB manchadas en papel de filtro

La precisión del resultado de la HbA1c depende del método de recolección de muestras
de sangre que, cuando se realiza correctamente, evita la introducción de contaminantes
durante la recolección de la muestra y permite la recolección de un volumen suficiente
de sangre que se mancha en el papel de filtro. Si había suficiente sangre para cubrir todo
el disco, se usó un punzón de 3/16 pulgadas. Si había una pequeña cantidad de sangre
en el disco, pueden haber sido necesarios 2–4 golpes. El (los) disco (s) de cada lugar de
papel de filtro se colocaron en un vial que contenía 1 ml de diluyente. Después de dejar
reposar a temperatura ambiente durante 1 hora, se retiraron los discos del vial, se
invirtió el vial y se colocó en el analizador.

Para muestras de WB
La muestra se preparó mezclando 5 ul de sangre con 1 ml de diluyente. Todos los viales
se mezclaron antes de colocarlos en el analizador.

Ensayo de HbA1c
El programa extendido Bio-Rad D-10 es un procedimiento de 6,5 minutos que se utilizó
para medir la HbA1c. Después de colocar los viales en el analizador, las muestras se
inyectan automáticamente en una columna que contiene una resina de intercambio
catiónico cargada negativamente que tiene una afinidad por las hemoglobinas cargadas
positivamente. Los tampones que aumentan la fuerza iónica pasan a través de la
columna y las fracciones de hemoglobina se separan en función de sus interacciones
iónicas con la columna. Las fracciones de hemoglobina separadas pasan a través de la
celda de flujo del fotómetro de filtro, donde las absorbancias se miden a una longitud de
onda de 415 nm. El ruido de fondo se reduce al medir la absorbancia a una longitud de
onda de 690 nm.
Los controles de HbA1c en sangre total altos (9,1%) y normales (5,2%) de Bio-Rad se
midieron antes de cada serie de muestras. Al comienzo del estudio, el material de
control se detectó en un papel de filtro Whatman 903 y se midió la HbA1c. Cuando se
midió la HbA1c directamente del vial (5 µl de control con 1 ml de diluyente) y se
comparó con los resultados del control de DBS, no hubo diferencia significativa en los
valores de HbA1c. El material de control directamente del vial se utilizó para este
estudio.
Todas las muestras se almacenaron a 4 ° C o -70 ° C y se analizaron dentro de los 5 días
posteriores a la extracción de sangre. Después del análisis, las muestras sobrantes se
almacenaron a -70 ° C.
Estudios de precisión
Se eligieron muestras que tenían valores de HbA1c en los rangos normales y de
diabetes. La precisión se determinó utilizando muestras de GCB, FSB y WB manchadas
en papel de filtro. Para el estudio de precisión intraensayo, se prepararon cinco
diluyentes de cada muestra a partir de cinco puntos de sangre diferentes y cada uno se
midió por duplicado. Para la precisión entre ensayos, las diluciones se prepararon
diariamente a partir de las manchas GCB, FSB y WB y se midió la HbA1c por
duplicado durante 5 días.

Linealidad
La linealidad se determinó midiendo la HbA1c en WB manchada en papel de filtro. Una
muestra con un nivel de HbA1c del 12,4% se diluyó con una muestra que contenía
HbA1c a una concentración del 4,2% para obtener niveles de HbA1c del 10,4%, 8,3%,
6,3%, 5,3% y 4,5%.

Estudios de traspaso
La transferencia se determinó mediante 4 mediciones sucesivas de HbA1c en GCB,
FSB y WB muestras manchadas en papel de filtro con altos niveles de HbA1c, seguidas
de 4 mediciones sucesivas de HbA1c en GCB, FSB y WB muestras con bajos niveles
de HbA1c.

Rango de área legible

El rango del área legible del ensayo se determinó detectando muestras de WB con
niveles de HbA1c normales, pre-diabetes y diabetes en papel de filtro. Las muestras se
prepararon mediante: 1. Utilizando el procedimiento estándar: un punzón de 3/16 y 1 ml
de diluyente; 2. Aumentar el área legible agregando 1 ml de diluyente a 2, 3 o 4
golpes; y 3. Disminuyendo el área legible mediante 1 golpe y agregando 2 ml de
diluyente y realizando diluciones en serie de 1.5 y 2.0 veces. La HbA1c se midió en
estas muestras por duplicado.

Estudios de Estabilidad HbA1c

La estabilidad se determinó utilizando muestras con valores de HbA1c en los rangos
normales, pre-diabetes y diabetes. Las muestras de GCB, FSB y WB manchadas en
papel de filtro se almacenaron a temperatura ambiente, 4 ° C y -70 ° C, y la HbA1c se
midió hasta 28 días.

Comparación de métodos
La HbA1c se determinó en: 1. Cincuenta muestras de GCB y FSB apareadas en papel
de filtro; y 2. Sesenta muestras de WB y las muestras de WB correspondientes
manchadas en papel de filtro.
Análisis estadístico
Los cálculos estadísticos se realizaron utilizando el programa Graphpad Prism versión
5.0 de GraphPad Software Inc, LaJolla, CA. Se determinaron promedios, desviaciones
estándar (SD), coeficientes de variación (CV), coeficientes de correlación (r 2 ), errores
estándar de la estimación (SE) y gráficos de Bland-Altman.
Ir:

Resultados

Estudios de precisión
La Tabla 1 muestra los medios, las SD y los CV para los estudios inter e intraensayos
para las muestras GCB, FSB y WB manchadas en papel de filtro. El promedio de CV
para la precisión entre ensayos para muestras con niveles de HbA1c normales y
elevados fue de 1.5% y 1.0%, respectivamente. El promedio de CV para la precisión
intraensayo para muestras con niveles de HbA1c normales y elevados fue de 1.4% y
0.9%, respectivamente. No hubo diferencia en los CV cuando se usaron muestras de
GCB, FSB o WB manchadas en papel de filtro para medir la HbA1c. Los CV obtenidos
con este método cumplieron con las especificaciones de precisión entre ensayos de
<3.0% recomendadas por Sacks ( 10 ).
tabla 1
Estudios de Precisión de Ensayos Inter e Intra.

N=5 Muestras GCB Muestras FSB Muestras de WB

Intra- Intra- Intra-

Interensayo ensayo Interensayo ensayo Interensayo ensayo

Media% de 5.28 8.65 5.20 9.12 5.03 8.91 5,49 8.04 4.22 13.12 4.3 13.16
HbA1c

Dakota del Sur 0.08 0.09 0.07 0.08 0.10 0.10 0.02 0.11 0.04 0.11 0.10 0.10
N=5 Muestras GCB Muestras FSB Muestras de WB

Intra- Intra- Intra-

Interensayo ensayo Interensayo ensayo Interensayo ensayo

CV% 1.6 1.1 1.4 0.90 1.8 1.2 0.5 1.0 1.1 0.8 2.3 0.8

Estudios de traspaso
La transferencia se realizó utilizando GCB y FSB de pacientes dentales, y WB venosa
de pacientes del hospital, todos manchados en papel de filtro. Los niveles de HbA1c
altos y bajos en las muestras de GCB fueron de 8.9% y 4.2%, en las muestras de FSB
fueron de 9.1% y 4.3%, y en las muestras de WB fueron de 13.1% y 4.2%. No se
realizaron estudios de transferencia con muestras de GCB y FSB con niveles de
HbA1c> 10% debido a la falta de muestras con HbA1c en estos niveles. Cuatro
mediciones consecutivas de HbA1c en una muestra con un nivel alto de HbA1c fueron
seguidas por 4 mediciones de HbA1c en una muestra con un nivel bajo de HbA1c. El%
de arrastre se calculó utilizando la siguiente fórmula:

Por cientoLlevarOver = L 1 - ( L 3 + L 4 ) / 2H2+ H32- L3+ L42× 100

donde H es la concentración de HbA1c en la muestra con un nivel alto de HbA1c, y L
es la concentración de HbA1c en la muestra con un nivel bajo de HbA1c. El% de
transferencia en las muestras de GCB y FSB fue de 2.0%, y en la muestra de WB fue de
1.1%. No hubo arrastre de muestras con este método.

Linealidad
La linealidad se determinó midiendo la HbA1c por duplicado en las muestras de WB
manchadas en papel de filtro. El análisis de regresión lineal de los resultados esperados
y medidos de HbA1c dio una pendiente de 0.991, una intersección de 0.01 y un error
estándar de la estimación de 0.08. El% de recuperación promedió 101% (rango 100–
102%). La linealidad del método se extiende desde el 4,2% hasta al menos el 12,4%.

Rango de área legible

Bio-Rad recomienda que el rango del área legible para medir la HbA1c con el
procedimiento D-10 6.5min sea entre 1 y 4 millones de voltios / segundo.
La Tabla 2 muestra los rangos del área legible y los niveles de HbA1c para muestras en
los rangos normales, pre-diabetes y diabetes. Se obtuvieron resultados de HbA1c
aceptables cuando el área de análisis legible total estuvo entre 0.7 y 5.0 millones de
voltios / segundo. Cuando el área legible es <0.7 millones μvolt / segundo y el nivel de
HbA1c está en el rango normal, el área bajo la curva para HbA1c es pequeña. Cuando
el área legible es> 5.0 millones μvolt / segundo y el nivel de HbA1c es> 10%, el área
bajo la curva para HbA1c es grande y para algunas muestras, no se generan
resultados. Ambas condiciones pueden dar como resultado resultados erróneos de
HbA1c. En este estudio, el rango del área legible para la mayoría de las muestras fue de
entre 0.8 y 2.0 millones de voltios / segundo. Los niveles de HbA1c no se informaron
cuando el rango era <0.7 o> 5.0 millones μvolt / segundo.
Tabla 2
Efecto del área total de análisis en los resultados de HbA1c

% De resultados de HbA1c

Área legible en millones de voltios / Rango Rango de

seg. normal Rango de prediabetes diabetes

0.5 - 0.69 4.5 DAKOTA DEL 9.8

NORTE

0.7 - 1.9 4.6 6.2 9.9

2.0 - 3.5 4.6 6.3 9.9

3.6 - 5.0 4.6 6.2 9.9

 % De resultados de HbA1c

Área legible en millones de voltios / Rango Rango de

seg. normal Rango de prediabetes diabetes

> 5.0 4.7 DAKOTA DEL Sin lectura

NORTE

ND = No determinado

Comparación de métodos
La Figura 1 muestra el análisis de regresión lineal para 50 muestras GCB y FSB
emparejadas. Las concentraciones de HbA1c oscilaron entre 4,8 y 9,9%. Se obtuvo una
pendiente de 0.981 (IC del 95%: 0.946 a 1.016), intercepción de 0.13 (IC del 95%: -
0.08 a 0.34), error estándar de la estimación de 0.12 y un coeficiente de correlación de
0.993. Hubo 17 muestras con niveles de HbA1c entre 4.8 y 5.6%, 23 muestras con
niveles de HbA1c entre 5.7 y 6.4% y 10 muestras con niveles de HbA1c entre 6.5 y
9.9%. Se obtuvo una excelente correlación entre los resultados de HbA1c utilizando
muestras de GCB y FSB.
Figura 1
Análisis de regresión lineal de los resultados de 50 GCB y FSB HbA1c. La ecuación de
regresión fue y = 0.981x + 0.13. El error estándar de la estimación fue 0.12, el coeficiente de
correlación fue 0.993 y el coeficiente de determinación fue 0.985.
La Figura 2 muestra el gráfico de Bland-Altman de las diferencias en los resultados de
HbA1c obtenidos con las muestras de GCB y FSB. Los valores medios de HbA1c de
6.03% se obtuvieron de las muestras de FSB y 6.04% de las muestras de GCB. La
diferencia de medias entre los resultados fue de 0.01%. No hubo diferencias
significativas en los resultados de GCB y FSB en toda la gama de análisis.
 Abrir en una ventana separada
Figura 2
Gráfico de Bland-Altman de las diferencias entre los resultados de GCB y FSB HbA1c.
También se realizó un análisis de regresión lineal para los resultados de HbA1c
obtenidos de 60 muestras de WB y WB pareadas manchadas en papel de filtro. HbA1c
varió de 4.0 a 13.8%. Hubo 21 muestras con niveles de HbA1c entre 3.7 y 5.4%, 14
muestras con niveles entre 5.9 y 6.6%, 12 muestras entre 7.0 y 9.5% y 13 muestras
entre 10.0 y 13.8%. Se obtuvo una pendiente de 0.975 (IC del 95%: 0.957 a 0.993), una
intersección de 0.09 (IC del 95%: -0.04 a 0.23), un error estándar de la estimación de
0.16 y un coeficiente de correlación de 0.997. Se obtuvo una excelente correlación entre
los resultados de HbA1c de WB y WB manchados en papel de filtro.

Estabilidad de la muestra
La Tabla 3 muestra la estabilidad de HbA1c en muestras de GCB, FSB y WB
manchadas en papel de filtro y almacenadas a temperatura ambiente, 4 ° C y -70 ° C. A
concentraciones de HbA1c> 9.5%, HbA1c es estable por hasta 28 días en muestras de
GCB, FSB y WB almacenadas a temperatura ambiente, 4 ° C y -70 ° C.
Tabla 3
Estabilidad de las muestras de HbA1c manchadas en papel de filtro

Muestras con HbA1c> 9.5%.

WBS GCB FSB

Dias RT 4 ° C −70 ° C 4 ° C RT

0 9.9 9.9 9.9 9.6 9.7

6 9.7 9.8 10.0 9.5 9.5

21 9.8 9.9 9.9 9.5 9.7

28 9.9 9.9 9.8 9.6 9.9

Muestras con HbA1c 5.7 - 6.4%

GCB FSB
 Muestras con HbA1c> 9.5%.

WBS GCB FSB

Dias RT 4 ° C −70 ° C 4 ° C RT

Dias RT 4 ° C −70 ° C 4 ° C −70 ° C

0 5.8 6.4 5.7 5.8 5.8

6 5,9 6.3 5.7 5,9 5,9

14 6.6 6.7 5,9 6.0 5,9

21 7.0 6.7 6.2

28 7.1 7.0 6.5

Muestras con HbA1c <5.7%.

GCB FSB
 Muestras con HbA1c> 9.5%.

WBS GCB FSB

Dias RT 4 ° C −70 ° C 4 ° C RT

Dias RT 4 ° C −70 ° C RT 4 ° C −70 ° C

0 5.0 5.2 5.0 5.2 5.2 5.0

6 5.4 5.3 5.0 5.8 5.3 5.0

14 6.0 5.5 5.2 6.1 5.6 5.1

21 6.3 5.6 6.5 5.7

28 6.8 5,9 6.8 5,9

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HbA1c es estable en muestras de GCB y FSB con niveles de HbA1c pre-diabetes que se
almacenan a 4 ° C o temperatura ambiente hasta 6 días, después de lo cual hay un
aumento en HbA1c. Para las muestras de GCB y FSB almacenadas a 4 ° C, hay un
aumento del 4% después de 14 días, un aumento del 6% después de 21 días y un
aumento del 11% después de 28 días. Para la muestra de GCB almacenada a
temperatura ambiente, la HbA1c aumentó 14% después de 14 días, 21% después de 21
días y 22% después de 28 días.
Para las muestras de GCB y FSB con niveles normales de HbA1c que se almacenaron a
temperatura ambiente, los valores de HbA1c aumentaron en aproximadamente un 10%
después de 6 días, 19% después de 14 días, 26% después de 21 días y 33% después de
28 días. Cuando las muestras de GCB y FSB se almacenaron a 4 ° C, los valores de
HbA1c aumentaron un 7% después de 14 días, un 9% después de 21 días y un 14%
después de 28 días. La HbA1c no es muy estable en muestras de GCB y FSB con
niveles normales de HbA1c cuando se almacena a temperatura ambiente o 4 ° C.
HbA1c es estable en muestras de GCB y FSB con niveles normales y de pre-diabetes
durante al menos 14 días si se almacena a -70 ° C. No probamos la estabilidad después
de 14 días en las muestras de GCB y FSB debido a un volumen de muestra insuficiente.
Aunque no se muestra en la Tabla 3 , la estabilidad de HbA1c en muestras de WB con
niveles normales y de pre-diabetes observados en papel de filtro muestra el mismo
patrón que se observa en las muestras normales y de pre-diabetes GCB y FSB.
Ir:

Discusión
El escenario ideal para validar un método para medir la HbA1c en GCB sería recolectar
sangre venosa y GCB y medir la HbA1c en ambos conjuntos de muestras. Aunque los
dentistas están familiarizados con el uso de la punción en el dedo para medir la glucosa
( 11 , 12 ), es posible que no puedan recolectar sangre venosa. En nuestro estudio,
utilizamos GCB y FSB recolectados y manchados en papel de filtro en un entorno
dental y WB y WB manchados en papel de filtro de una población hospitalaria para
evaluar el análisis de HPLC. Las excelentes correlaciones entre los niveles de HbA1c
de WB y WB manchados en papel de filtro y entre los niveles de HbA1c de GCB y FSB
manchados en papel de filtro sugieren que los resultados de GCB HbA1c son precisos.
Para las 50 muestras de GCB, hubo 3 muestras con rasgo de hemoglobina AS y 2 que
tenían concentraciones de hemoglobina F entre 5 y 7%. El examen de los
cromatogramas para estas muestras mostró una buena separación de las fracciones de
hemoglobina. Los estudios han demostrado que con el ensayo D-10, no hay
interferencia de las muestras con hemoglobina AS ( 13 ) y de hemoglobina F en
concentraciones de hasta el 12,5% ( 14 ).
Para que se analice un valor de HbA1c preciso, es necesario recopilar GCB
adecuado. Nuestro protocolo requiere que el técnico de laboratorio examine la mancha
de sangre, y si hay una pequeña cantidad de sangre presente, se realizan varios
golpes. En este estudio, solo una de las 50 muestras fue rechazada por falta de una
cantidad suficiente de sangre. El área bajo la curva para esta muestra fue de 0,4
millones de voltios / segundo, que es inferior a los 0,7 millones de voltios / segundo que
se requieren para el análisis.
La detección de la sangre de la punción del dedo en el papel de filtro y el envío del DBS
a un laboratorio para el análisis de HbA1c se ha utilizado para la detección en el hogar y
para detectar la diabetes en pacientes de terceros países. En particular, la estabilidad de
HbA1c en la DBS juega un papel importante en estos programas de detección. En este
estudio, encontramos que la tasa de aumento de HbA1c en muestras de GCB, FSB o
WB manchadas en papel de filtro depende del nivel de HbA1c y la temperatura a la que
se almacena la DBS. La tasa de aumento es mayor cuando la muestra se almacena a
temperatura ambiente y cuando el nivel de HbA1c está en el rango normal. El aumento
en la HbA1c podría deberse a una continua glicación de la hemoglobina. El perfil de
estabilidad de HbA1c en GCB, FSB y WB manchado en papel de filtro es
esencialmente el mismo y no varía según la fuente de la muestra.5 , 6 ), o que la HbA1c
es estable cuando las muestras de DBS se almacenaron a temperatura ambiente oa 4 ° C
( 4 , 7 , 15 ). Se ha demostrado que la HbA1c es estable durante años si el DBS se
almacena a -70 ° C ( 3 ). Sugerimos que las muestras de sangre seca se almacenen a 4 °
C y se analicen dentro de los 6 días posteriores a la recolección. Si esto no es posible,
las muestras deben almacenarse a -70 ° C.
Utilizamos el programa de 6,5 min en lugar del programa de 3,0 min D-10 para medir la
HbA1c. Cuando se usó un programa de 3.0 minutos para medir la HbA1c en sangre
manchada en un papel de filtro con el analizador Variant II de Bio-Rad, no fue posible
cuantificar la HbA1c en algunas muestras debido a la separación inadecuada de las
fracciones de hemoglobina y la identificación de variantes de hemoglobina falsas
( 3 ). Cuando se utilizó el programa Variant II de 6,5 min en lugar de 3,0 min, se mejoró
la separación de los picos de hemoglobina ( 3 ). En un estudio anterior, cuando se midió
la HbA1c en GCB utilizando el analizador Variant II, no se pudo informar de HbA1c en
el 26% de las muestras debido a un pico no identificable en el cromatograma que co-
eluyó con HbA1c ( 9). La separación deficiente de las fracciones de hemoglobina
podría deberse al uso del programa de 3.0 minutos para medir la HbA1c. Usamos el
programa de 6,5 minutos en el analizador D-10 para medir la HbA1c y encontramos una
buena separación entre la HbA1c y las otras fracciones de hemoglobina para las 50
muestras de GCB.
En un estudio reciente realizado para determinar si los niveles de HbA1c de GCB
podrían usarse para detectar diabetes en pacientes dentales ( 16 ). La GCB se recolectó
y se observó en un papel de filtro de 245 adultos mayores de 45 años y de 96 pacientes
con un rango de edad entre 18 y 44 años. Estos son pacientes de alto riesgo para la
diabetes a los que nunca se les dijo que tenían diabetes. La HbA1c se midió en las
manchas de sangre seca utilizando este procedimiento de HPLC D-10. El cincuenta y
uno por ciento de los pacientes que tenían más de 45 años y el 23% de los pacientes de
18 a 44 años tenían niveles de GCB HbA1c que estaban en los rangos de prediabetes o
diabetes. Estos resultados muestran que los niveles de HbA1c obtenidos a partir de
GCB podrían usarse para detectar la diabetes en pacientes dentales no diagnosticados.
Las pruebas de HbA1c durante una visita al dentista representan una oportunidad para
evaluar a un gran segmento de la población estadounidense que tal vez no sepa si tiene
diabetes o pre-diabetes. Los estudios han demostrado que la mayoría de los pacientes
dentales apoyan las pruebas de diabetes en el consultorio dental y que la mayoría de los
dentistas están dispuestos a recolectar sangre para el examen de diabetes
( 17).). Muchos pacientes que tenían GCB y FSB recogidos para la detección de
diabetes preferían GCB porque la colección GCB se sentía como una limpieza dental de
rutina, mientras que la colección FSB podría ser dolorosa. Muchos proveedores dentales
también prefirieron GCB a FSB porque a menudo ven un sangrado considerable
relacionado con la inflamación gingival. Si bien deben tomarse controles y medidas de
seguridad para obtener GCB que esté tan libre de residuos como sea posible, la
recolección de sangre oral aún se consideró más fácil que la recolección de FSB.
En conclusión, este documento valida la medición de HbA1c en GCB manchada en
papel de filtro. Este método de HPLC de intercambio iónico es preciso, los CV son
<3%, la linealidad es de al menos el 12,4% y no hay transferencia de muestras. Se
obtuvo una excelente correlación (r = 0.993) entre los niveles de HbA1c en GCB y las
muestras correspondientes de FSB detectadas en papel de filtro. Los niveles de HbA1c
obtenidos de GCB detectan a los pacientes con pre-diabetes o diabetes y representan
otra fuente de muestras de sangre que se puede usar para detectar diabetes en pacientes
dentales.
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Expresiones de gratitud
Agradecemos a Bio-Rad por proporcionar el analizador de HPLC D-10 para este
estudio. Esta investigación fue financiada, en parte, por una subvención del Instituto
Nacional de Investigación Dental y Craneofacial de los Institutos Nacionales de la
Salud (Subvención 1R15DE023201).
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Abreviaturas

DBS manchas de sangre seca

GCB sangre gingival crevicular

FSB dedo palo sangre

WBS muestras de sangre entera

HPLC cromatografía líquida de alta presión

CV coeficiente de variación

EDTA ácido etilendiaminotetraacético

Dakota del Sur desviación estándar

SE error estándar de la estimación