EVALUACIÓN DE LA TOXICIDAD DEL RÍO RÍMAC EN EL PUENTE SURCO,

CARRETERA CENTRAL KM 65, MEDIANTE BIOENSAYOS CON Lemna minor

Rocio BUSTINZA1, Brisayda GONZALES1, Karen HUIZA1, Carmen LAZARO1, Yoselin

LEON1 y Ruth ROCHA1*
1
Carrera de ingeniería ambiental, Facultad de Ciencias Ambientales, Universidad Científica
del Sur, Panamericana Sur Km 19, Villa El Salvador- Lima, Perú

* Autor de correspondencia: brisaydagonzales@gmail.com, clazaro02@gmail.com,

ruthmilagrosrochayupanqui@gmail.com

RESUMEN

En este estudio se evaluó una muestra de agua proveniente de la cuenca media del Río Rimac,
aguas debajo de una planta de fabricación de carburo de calcio, se evaluó cinco
concentraciones (6.25%, 12.5%, 25%, 50% y 100%) y control, cada uno con cuatro
repeticiones, sobre lentejas de agua (Lemna minor). El ensayo fue de tipo estático con tiempo
de exposición de siete días. Se utilizó 240 colonias de dos frondas, posteriormente se analizó
las respuestas subletales de clorosis, necrosis, formación de hojas nuevas, ruptura de
colonias, número de frondas totales, peso húmedo, peso seco, CE50, LOEC y NOEC. Se
utilizó un estereoscopio para evaluar dichos parámetros, demostrando así una relación directa
entre incremento de la concentración y el efecto en la especie L.minor, siendo más sensible
el parámetro clorosis.

Palabras clave: Bioensayo, Lemna minor, metales, rio Rímac

ABSTRACT

In this study, a sample of water from the middle basin of the Rimac River, downstream of a
calcium carbide manufacturing plant, was evaluated. Five concentrations were evaluated
(6.25%, 12.5%, 25%, 50% and 100%). and control, each with four repetitions, on lentils of
water (Lemna minor). The test was of a static type with a seven-day exposure time. 240
colonies of two fronds were used, later the sublethal responses of chlorosis, necrosis,
formation of new leaves, colony rupture, number of total fronds, wet weight, dry weight,
EC50, LOEC and NOEC were analyzed. A stereoscope was used to evaluate these
parameters, thus demonstrating a direct relationship between the increase in concentration
and the effect in the L.minor species, the chlorosis parameter being more sensitive.

Key words: Bioassay, Lemna minor, metals, Rímac river.

INTRODUCCIÓN
Los metales pesados se caracterizan por su
alto peso molecular, los cuales a elevadas
concentraciones causan efectos adversos
al ser humano (Romero 2009), estos
también son definidos como elementos
metálicos y poseen densidades mayores a
la del agua (Tchounwou et al. 2012), que
varían entre 3.5 y 7 g/cm3 (Gautam et al.
2015). Cuando los metales ingresan al
medio acuático, por medio de procesos
biogeoquímicos se distribuyen en las
especies (Reyes et al. 2016). Los seres
vivos requieren mínimas cantidades de
metales para sus funciones biológicas, no
obstante, si exceden la concentración
requerida, tienen la capacidad de alterar
procesos fisiológicos o bioquímicos en el
organismo (Molina et al. 2012, Hernández
y Hansen 2011).
La contaminación del agua por metales
pesados afecta en gran magnitud la
seguridad alimentaria y la salud pública
(Huang et al. 2014, Reyes et al. 2016). La
severidad y los síntomas o alteraciones en
el organismo están en función de las
cantidades, el tiempo de exposición y la
vía de entrada del metal (Londoño-Franco
2016), es por ello que los metales son los
contaminantes más comunes presentes en
el agua, entre sus fuentes de
contaminación se consideran tanto
naturales como antrópicas, tales como,
desperdicios mineros, lixiviados, aguas
residuales industriales y actividades
tecnológicas (Gautam et al. 2015).
Tal es el caso del río Rímac, el cual se
divide en tres cuencas, en la cuenca alta se
desarrolla una intensa actividad minera,
donde se realiza la explotación de diversos
metales como plomo, zinc, cobre, plata,
oro y antimonio, que vierten sus aguas
residuales sin previo tratamiento
directamente al río, mediante relaveras u
otros canales (DIGESA 2005); en la
cuenca media y baja del río Rímac, se han
identificado centrales hidráulicas,
actividad industrial que incluyen fábricas
de productos químicos, curtiembres,
textilerías, entre otros (DIGESA 2011), en
consecuencia, existe un alto riesgo de
contaminación por metales pesados que
tienen un impacto negativo en el ambiente
y en la salud.
El distrito de San jerónimo de Surco,
provincia de Huarochirí, departamento de
Lima, se ubica en la cuenca media del río
Rímac a una altitud entre 1800 msnm a
4000 msnm. Se caracteriza por ser una
zona templada húmeda con invierno seco
y un verano templado, de acuerdo a la
clasificación climática Koppen, con una
precipitación media anual de 300 mm y
una temperatura media anual de 15.6 °C
(Buendía et al., 1999). En la zona se
desarrolla agricultura, ganadería, turismo a
pequeña escala y en el km 65, en el puente
Surco, se ubica una fábrica de carburo de
calcio que vierte sus efluentes en el río
Rímac. Además, en dos monitoreos de la
calidad del agua del río Rímac en el 2011
y en el 2014 el valor de arsénico total
sobrepasó el ECA agua (ANA 2014). Por
ello, es necesario realizar monitoreos con
especies bioindicadoras.
Las plantas acuáticas o también conocidas
como macrófagas viven en lagunas, ríos y
quebradas, la más conocida es la Lemna
minor, perteneciente a la familia
Lemnaceae (Arroyave 2004), usada
también como especie bioindicadora de
calidad de agua (Mohamed et al. 2017). La
forma de su cuerpo es taloide (plano), de
color verde, su tamaño varía entre dos y
cuatro milímetros de longitud y dos
milímetros de ancho, su reproducción es
asexual por gemación, se puede desarrollar
entre temperaturas de 5 °C a 30 °C,
presentando un crecimiento óptimo entre
15 °C y 18 °C, son tolerantes a los rangos
de pH entre 4.5 y 7.5 (Arroyave 2004).
Asimismo, esta especie es considerada
ideal para estudios de toxicidad acuática
por su rápido crecimiento (Iannacone et al.
2000, Arroyave 2004), con estructura
simple, de fácil manejo y cultivo, alto
grado de homogeneidad y sensibilidad a
diferentes contaminantes (Tarrahi et al.
2018, Mohamed et al. 2017). Por ello, el
objetivo de este investigación es evaluar
de la toxicidad del río Rímac en el puente
Surco, carretera central km 65, mediante
bioensayos con L. minor.
MATERIALES Y MÉTODOS
Lemna minor
La lenteja de agua, L. minor, se colectó de
una de las lagunas ubicadas en el Refugio
Silvestre “Pantanos de Villa”, en el distrito
de Chorrillos, Lima, Perú (Fig.1) con
coordenadas geográficas: 12°12'43.1"S y
76°59'24.7"W. Dichas muestras fueron
trasladadas al laboratorio de la
Universidad Científica del Sur (UCSUR)
en un balde de 8 L de capacidad.
Posteriormente se utilizaron 240 colonias
de dos frondas de aproximadamente del
mismo tamaño. Las pruebas se realizaron
en un fotoperiodo de 12 horas de luz/ 12
horas de oscuridad y a temperatura
ambiente.

Mapa del distrito Chorrillos Pantanos de Villa

Punto de recolección de
L. minor

Figura1. Localización del punto de recolección de L. minor, en el Refugio de Vida Silvestre

“Pantanos de Villa”, Chorrillos, Lima.

Fuente: Google Maps (2018)

Muestra de agua
La muestra utilizada se colectó de la
Cuenca Media del Río Rímac, con
coordenadas geográficas: 11°53'14.6"S y
76°27'08.9"W, aguas abajo de la planta de
fabricación de carburo de calcio. Este se
Mapa del distrito San Jerónimo de Surco
Figura 2. Localización del muestreo de agua en la Cuenca Media del Río Rímac, San
Jerónimo de Surco, Huarochirí.
Fuente: Google Maps (2018)
Diseño del bioensayo
El diseño experimental consistió en
evaluar cinco concentraciones más el
control, con cuatro réplicas por
tratamiento. La lenteja de agua, L.
minor, se evaluó en bioensayos estáticos
utilizando 10 colonias por envase (una
colonia consta de dos frondas de
aproximadamente el mismo tamaño) con
volúmenes de muestras de agua de 300mL
(Iannacone et al. 2000), con un factor de
dilución de 0.5, siendo las
encuentra ubicado en la carretera central
Km 65 en el distrito de San Jerónimo de
Surco, Provincia de Huarochirí en el
departamento de Lima (Fig.2). Se
recolectó en dos botellas de 3 L para luego
ser trasladado al laboratorio de la UCSUR.
Planta de Fabricación de
Carburo de Calcio
Punto de muestreo
concentraciones: 100% (T5), 50% (T4),
25% (T3), 12.5% (T2), 6.25% (T1) de
contaminante y el control. Se empleó agua
embotellada de la marca Cielo, tanto para
las diluciones como para el control.
Posteriormente se midieron los parámetros
de pH, temperatura, sólidos totales
disueltos y conductividad eléctrica del
control, mediante el uso de un
potenciómetro, Conductímetro y
multiparámetro marca HANNA (Cuadro
1).
 CUADRO 1. PARÁMETROS, CONDICIONES Y CRITERIOS DE ACEPTABILIDAD
RECOMENDADAS PARA CONDUCIR LA PRUEBA DE TOXICIDAD CON L. minor
Parámetros
Tipo de bioensayo
Tiempo de exposición
Tóxico
Temperatura
pH
Conductividad
Calidad de la luz
Fotoperiodo
Tamaño de envase
Volumen de solución
N° colonias de 2 frondas
N° de réplicas por concentración
N° de concentración más control
N° de colonias por envase
Agua de control y dilución
Fuente: Iannacone (2018)
Los condiciones de evaluación para
detectar toxicidad en L. minor fueron
formación de hojas nuevas (se registró el
número de brotes y hojas nuevas totales),
necrosis (fronda con el 50% de color pardo
o quemado), clorosis (fronda con 50% de
coloración amarilla), ruptura de colonias
(presencia de una sola hoja), peso húmedo
(se registró el peso de humedad de
colonias por envase) y peso seco (se
registró el peso de las colonias luego de ser
secadas a 37-40°C), (Iannacone et al.
2011).
La duración de la prueba fue de siete días
(Arroyave, 2004); al final de la prueba se
evaluó cada respuesta bajo el microscopio
estereoscópico. El peso húmedo de las
colonias por envase se midió mediante una
balanza analítica, separándolos por
concentración y número de repetición en
pequeños sobres rotulados (se pesó los
Condiciones
Estático crónica
7 Días (168 horas)
Muestra ambiental
25 ± 2 °C
7.79
782 μS/cm
Iluminación de laboratorio
12 horas luz /12 horas oscuridad
500 mL
300 mL
240
4
6
10
Agua embotellada marca Cielo
sobres solos y los sobres con L. minor),
para luego ser llevados a la estufa a 40ºC,
después de 48 horas nuevamente fueron
pesados para obtener el peso seco.
Análisis de datos
Se utilizó el programa estadístico SPSS
versión 22, así mismo, se realizó el análisis
de los resultados mediante la evaluación
de los 7 parámetros observados. Se
emplearon las pruebas de normalidad,
homogeneidad de varianza,
comparaciones múltiples (prueba de
Dunnett), la prueba no paramétrica de
Kruskal Wallis y la prueba de ANOVA
junto con Tukey, para poder identificar si
los datos obtenidos son estadísticamente
iguales o diferentes. Se determinaron los
valores de CE50 (Concentración efectiva
media), LOEC (Concentración más baja
de efectos observables) y NOEC
(Concentración de efectos no CI 50 (Concentración de Inhibición media)
observables). Por otro lado, se calculó la para la formación de hojas nuevas.

RESULTADOS los parámetros subletales clorosis>

En el Cuadro 2 se observa los valores
finales del ensayo ecotoxicológico con la
L.minor con diferentes porcentajes de
muestra ambiental perteneciente al rio
Rímac ubicado a unos metros del puente
Surco. De mencionado experimento se
obtuvieron respuestas de sensibilidad en
necrosis> ruptura de colonias> número de
frondas respectivamente en orden
decreciente (Fig. 4) de referido al CE 50,
siendo necrosis el parámetro más sensible.
Asimismo, se observa los parámetros
fisicoquímicos (Fig.3). tales como pH y
conductividad eléctrica.

CUADRO 2.VALORES DE CE Y CI PARA LAS RESPUESTAS SUBLETALES EN LA L.MINOR

Ensayo ecotoxicológicos : Muestra ambiental del Río Rímac

Parámetros NOEC LOEC CE 50 (%) CI 50 (%)
subletales
Lemnaminor (336h) Formación
de hojas <6.25 6.25 12
nuevas
Lemna minor (336h) Clorosis <12.5 12.5 21.63
Lemna minor (336h) Necrosis <12.5 12.5 31.55
Lemna minor (336h) Ruptura <12.5 25 32.51
Lemna minor (336h) Numero de <25 50 68.87
frondas
Fuente: Elaboración propia

a. Potencial de Hidrógeno
8.6
8.4
8.2
8
7.8
pH

7.6
7.4
7.2
7
6.8
CONTROL (0%) T1 (6.25%) T2 (12.5%) T3 (25%) T4 (50%) T5 (100%)

Tratamientos Día 1 Día 7

 900
b. Conductividad (us/cm)
800
700
Conductividad(us/cm)

600
500
400
300
200
100
0
CONTROL (0%) T1 (6.25%) T2 (12.5%) T3 (25%) T4 (50%) T5 (100%)

Tratamientos
Día 1 Día 7

Figura 3. Valores de parámetros del agua evaluados en el día 1 y día 7 este ensayos ecotoxicologicos, a)
potencial de hidrogeno y b) conductividad eléctrica.

a b
% Necrosis Peso húmedo (g)
10.00% 0.1000
5.00% 0.0500
0.00% 0.0000

c
% Clorosis d % Ruptura de Colonias
100.00% 3.00%
2.00%
50.00%
1.00%
0.00% 0.00%

e f
% Hojas Nuevas Peso seco (g)
20.00% 0.0080
15.00% 0.0060
10.00% 0.0040
5.00% 0.0020
0.00% 0.0000
 g Numero total de frondas
60

40

20

0
Control T1 (6.25%) T2 (12.5%) T3 (25%) T4 (50%) T5 (100%)
(0%)

Figura 4. Valores de parámetros subletales en L.minor evaluados en el día 1 y día 7 este ensayos
ecotoxicologicos, a) clorosis, b)ruptura de colonias, d)Peso húmedo e)porcentaje de hojas nuevas f)peso seco y
g)número total de frondas.

DISCUSIONES (Artetxe et al. 2002) de la muestra

La L. minor es una especie acuática de
crecimiento extendido que crece en
arroyos, lagos, estanques y otros espejos
de agua. Por su pequeño tamaño,
morfología simple, rápido crecimiento,
periodo de vida corto y por su sensibilidad
a los contaminantes ambientales,
usualmente es empleada como modelo en
estudios ecotoxicológicos (Balen et al.
2011) como son los estudios de calidad del
agua para monitorear metales pesados y
otros contaminantes acuáticos (Radic et al.
2011), y en fitorremediación (Appenroth
et al. 2010, Forni y Tommasi 2016), esto
debido a su poder de proliferación,
capacidad de adsorción de nutrientes y
bioacumulación de sustancias
contaminantes en el agua. Asimismo, son
herramientas en el tratamiento de aguas
residuales (Arroyave 2004).
En las respuestas subletales, se observa
(cuadro 2) mayor sensibilidad en clorosis
con los tratamientos T4 y T5 que puede
considerarse una respuesta general
asociada con la toxicidad de los metales
ambiental, tal como es el caso de Radic et
al., (2011), donde las hojas de la lenteja
de agua mostraron signos de clorosis
(pérdida de pigmento) luego de una
exposición de 7 días a muestras de agua.
Song (2016) señala que los efectos tóxicos
del CuO son mayores en la disminución de
número de frondas y aumento en la
necrosis, sin embargo, en los resultados no
se observó sensibilidad representativa en
necrosis, pero si se determinó diferencia
significativa entre el T5, T4, T3, T2 y T1
en la disminución de frondas totales
respecto al control.
Con respecto a la ruptura de colonias, este
presentó una relación directa a la
concentración de la muestra ambiental.
Resultados similares se evidenciaron en el
estudio de Valenzuela (2013) quien
visualizó desprendimiento de frondas de
las colonias.
Calow (1993) señala que la formación de
hojas nuevas es el parámetro más sensible
de evaluación en Lemna spp. En los
resultados al igual que los encontrados por
Iannacone et al. (2000) y Iannacone et al.
(2011), presentan una alta sensibilidad
para este parámetro frente a la muestra
ambiental del rio Rímac. En el estudio se
determinó un 95 % de inhibición en la
formación de hojas nuevas en los T4 Y T5
con respecto al control.
Los resultados de peso húmedo y seco
presentan una relación inversamente
proporcional con cada tratamiento.Sin
En cuanto al pH inicialmente presento
valores altos, debido a que a 30m del punto
de muestreo se encontraba la planta de
fabricación de carburo de calcio que vertía
sus efluentes al río (ANA 2014).
Los resultados de las respuestas subletales
en L. minor se asocian al lugar donde se
extrajo la muestra de agua, ya que tiene
antecedentes de presencia de coliformes
termotolerantes, Escherichia coli en
elevadas concentraciones y presencia de
algunos metales tales como Arsénico(As),
Boro (B), los cuales superaban los
Estándares de Calidad del Agua (D.S N°
004-2017-MINAM) y Cobre (Cu) en bajas
concentraciones respecto a la legislación
peruana. Esto también se puede relacionar
CONCLUSIONES
La clorosis fue la respuesta subletal con
mayor sensibilidad en L. minor ante la
muestra ambiental del rio Rímac a 100 m
del puente Surco.
embargo, Clostre & Suni (2007),
encontraron que L. minor, incrementó su
peso húmedo en elevadas concentraciones
de potasio, y disminuyó el peso seco a
bajas concentraciones de nitrato, debido al
estar expuesto a agentes exógenos L.
minor absorbe el agua de su medio para
equilibrar la presión del agente exógeno en
el medio y generar un balance que proteja
al organismo. Caso contrario, cuando se
lleva la especie a la estufa, el agua se
evapora y disminuye considerablemente el
peso seco.
con la presencia de vertimientos de aguas
residuales domésticas e industriales en el
rio Rímac (ANA 2014).
El LOEC es la concentración más baja en
el cual se observa efecto que según los
resultados se encontraban alrededor del
6,25% y 50 %. Asimismo, el NOEC que
es la mayor concentración de un tóxico
para el cual no se observa un efecto
estadísticamente significativo respecto al
control (Planes & Fuchs 2015) se
encontraba por debajo de 25 % a 6,25%.
Esto quiere decir que los organismos que
se encuentran alrededor del efluente están
teniendo efectos adversos por causa del
agua contaminada (Cowgill 1991).
La ruptura de colonias tiene una relación
directa a la concentración de la muestra
ambiental en el estudio.
Los resultados de peso húmedo y seco
presentan una relación inversamente
proporcional con cada tratamiento, es
decir que a mayor concentración de la
muestra ambiental menor es el peso de la
L. minor.
El agua tomada para realizar el bioensayo
presenta niveles bajos de toxicidad según
los resultados para parámetros físico-
químicos
L. minor es un organismo sensible e ideal
para estudiar la toxicidad de un cuerpo de
agua y determinar los efectos negativos
que puede generar en cada especie
acuática, asimismo se puede usar para
tratamiento de aguas residuales, absorción
RECOMENDACIONES
Se recomienda establecer criterios para la
evaluación de clorosis y necrosis.
Colocar el bioensayo en un lugar donde
haya luz y realizar agujeros en la tapa del
envase lo suficientemente grande para que
el agua pueda se aireada.
Es recomendable que para los fines de este
ensayo se obtenga una muestra
contaminada con algún compuesto
inhibidor del metabolismo de la L. minor,
para enriquecer el estudio.
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de contaminantes y monitoreo de cuerpos
de agua.
A mayor concentración de agua
contaminada, mayor porcentaje de
clorosis, ruptura de colonias y menor
formación de hojas nuevas.
Los resultados obtenidos evidenciaron que
a partir de las concentraciones de 12.5% en
adelante, se muestran efectos riesgo para
esta especie y otras especies acuáticas que
se encuentran en el rio Rímac a 100 m del
puente Surco.
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