Año de la Inversión para el Desarrollo Rural y la Seguridad

Alimentaria
Universidad Nacional de Piura
Facultad de Ingeniería Industrial
E.P. Ing. Agroindustrial

Informe de Laboratorio N° 3

Curso: Bioquímica

Docente: Blga. Claudia Ruíz Gonzales

Practica: Efectos de temperatura sobre glucosa

Oxidasa.

Efecto de pH sobre la glucosa oxidasa.

Horario: Lunes 10-12 am

Mesa:
Alumnos: MORE BERECHE EDGARD
HUANCA BOBADILLA HENRY
MOLINA PEDRO
 Efecto de la temperatura sobre glucosa oxidasa

Introducción

La temperatura del medio influye mucho en la actividad de las enzimas. La

temperatura óptima para la acción de enzimas es la temperatura del cuerpo de los
animales que oscila en el intervalo de 36 a 41 ºC. con cierto aumento de la
temperatura del medio ocurre aceleración de la reacción a consecuencia de la
activación de las moléculas de sustrato. A la vez, incluso un aumento pequeño de la
temperatura de las enzimas, necesaria para la manifestación de su actividad catalítica.
Empieza gradualmente, la desnaturalización de la enzima cuando se acelera
bruscamente la temperatura y esta sobrepasa los 50ºC. la inactivación de la enzima
con aumente de la temperatura del medio es irreversible. Al bajar la temperatura la
actividad de la enzima disminuye. El mecanismo de este proceso no está claro. Sin
embargo, el enfriamiento no causa desnaturalización de la enzima por lo tanto su
inactivación puede ser reversible.

Objetivo

El objetivo de la presente práctica es demostrar el efecto de la temperatura sobre la glucosa

oxidasa.

Metodología

TUBO I TUBO II TUBO III

RT 1 ml 1 ml 1 ml
Tº X 10 MIN. 80 ºC 37 ºC 0 ºC
GLUCOSA 10 ul 10 ul 10 ul
Tº : 37ºC 10 min 10 min 10 min

 ANEXOS

Resultados Absorbancia factor [ ]mg/dl T°

Tubo I 0.21 229mg/dl 66.99 80°

Tubo II 0.52 229mg/dl 165.88 37°
Tubo III 0.54 229mg/dl 172.26 0°
 Resultados Absorbancia factor [ ]mg/dl T°

Tubo I 0.22 229mg/dl 70.18 80°

Tubo II 0.53 229mg/dl 169.07 37°
Tubo III 0.49 229mg/dl 156.31 0°

Discusión

La enzima glucosa oxidasa (GOx) (Número EC 1.1.3.4) es una oxidorreductasa que cataliza la
oxidación de la glucosa para formar peróxido de hidrógeno y D-glucono-δ-lactona. En las
células contribuye a degradar los azúcares hacia sus metabolitos.

La glucosa oxidasa es ampliamente utilizada para la determinación y cuantificación de glucosa

libre en los fluidos biológicos, tales como sangre y orina, en materia prima vegetal y en la
industria de los alimentos. Tiene además muchas aplicaciones en biotecnología, y se utiliza
para la fabricación de biosensores sensibles a glucosa.

Conclusión

• A una elevada temperatura predomina la desnaturalización con pérdida precipitada de la

actividad catalítica. Por tanto las enzimas muestran una temperatura óptima de acción. Los
límites de actividad para la mayor parte de las enzimas tiene lugar entre los 10°C y 50°C; la
temperatura óptima para las enzimas en el cuerpo se hall alrededor de 37°C.
• El factor por el cual un proceso biológico aumenta para un incremento de temperatura de
10°C es el coeficiente de temperatura o Q10. El Q10 para la mayor parte de las enzimas varía
entre 1.5 y 3.

Referencias bibliográficas

• Bioquímica ilustrada de HARPER – edición 17ava - Pág.

• Principios de Bioquímica, McGraw Hill, 1989.

• http://html.rincondelvago.com/efecto-de-la-temperatura-y-del-ph-sobre-unaenzima.html

• http://apuntesdebioquimica.tripod.com/id8.html
 Efecto del pH sobre la glucosa oxidasa

Introducción

Para cada enzima existe un óptimo de pH en el que se crean las condiciones más
favorables para el mantenimiento de la conformación funcionalmente activa de la
molécula. Los grupos amino y carboxilo de los restos de aminoácidos ionizados a una
magnitud de pH determinada, participan en el mantenimiento de la conformación de la
molécula proteica necesaria para la confrontación de los centros catalíticos de la enzima
y favorecen también a su ligación con el sustrato. A magnitud de pH distinta se altera la
ionización de los grupos correspondientes, y como resultados se rompen los enlaces
que aseguran la formación de los centros catalíticos, y la enzima se inactiva. A los
valores del pH muy altos o muy bajos las enzimas se desnaturalizan.

El estudio del pH en relación a la actividad enzimática es un tópico de interés en el

estudio de las reacciones biológicas tanto in vivo como en la industria. Debido a sus
propiedades iónicas, cada enzima posee características únicas de actividad con
respecto al pH.

El pH es un factor que ejerce una gran influencia sobre la cinética de las reacciones
catalizadas por enzimas. Dado que los sitios activos de las enzimas están
frecuentemente compuestos de grupos ionizables que deben estar en la forma iónica
apropiada para mantener la conformación del sitio activo, acoplar los sustratos o
catalizar la reacción, las propiedades iónicas del medio ejercen una influencia directa
sobre la cantidad de enzima que tiene los grupos ionizados de la manera correcta para
llevar a cabo la catálisis De hecho, una gran cantidad de estudios que tratan sobre el
comportamiento enzimático involucran a su vez investigaciones sobre la variación de las
actividades enzimáticas de acuerdo al pH. Estudios de este tipo pueden conducir a una
gran cantidad de información útil sobre los mecanismos involucrados en el proceso
catalíticos. Además de afectar directamente sobre la actividad de la enzima, afecta
también la estabilidad de esta debido a su naturaleza proteica, lo cual debe de ser
tomado en cuenta en cualquier estudio que intente relacionar la velocidad de la catálisis
con el pH.

 Identificar los cambios de pH en el reactivo de trabajo, sustancia

buffer con la glucosa oxidasa.

PROCEDIMIENTOS

Calibración del equipo

-Verter agua destilada en un tubo de ensayo e introducirlo en el
espectrofotómetro para su medición.

-Si la medición no es la correcta, debería ser cero ya que el agua destilada deja
pasar completamente la luz, girar las perillas hasta llegar al valor indicado.

-Una vez logrado la medición correcta ya podemos medir las muestras de

cada grupo.

Medición de la Absorvancia

-Preparar la muestra y agregar HCl o NaOH según sea el caso.

-Agregar 1 microlitros de glucosa y homogenizar.

-Incubar por 10 minutos a 37°C.

-Antes de realizar la medición en el espectrofotómetro, limpiar las paredes del

tubo de ensayo para evitar malas lecturas y errores.

-Realizar la lectura en el espectrofotómetro y los cálculos correspondientes.

Metodología

TUBO I TUBO II TUBO III

RT 1 ml 1 ml 1 ml

NaOH 0.01N 0.1 ml - -

HCl 0.01N - - 0.1 ml

Glucosa 1 ul 1 ul 1 ul

Incubar 10min 37 ºC 37 ºC 37 ºC

 ANEXOS

Resultados Absorbancia factor [ ]mg/dl

mesa 1

Tubo I 0.891 229mg/dl 204.039

Tubo II 0.882 229mg/dl 201.978

Tubo III 1.169 229mg/dl 267.701

Discusión

“Factores que afectan la actividad enzimática: Concentración del sustrato.- A mayor

concentración del sustrato, a una concentración fija de la enzima se obtiene la
velocidad máxima. Después de que se alcanza esta velocidad, un aumento en la
concentración del sustrato no tiene efecto en la velocidad de la reacción.
Concentración de la enzima.- Siempre y cuando haya sustrato disponible, un aumento en
la concentración de la enzima aumenta la velocidad enzimática hacia cierto límite.
Temperatura.- Un incremento de 10°C duplica la velocidad de reacción, hasta
ciertos límites. El calor es un factor que desnaturaliza las proteínas por lo tanto si la
temperatura se eleva demasiada, la enzima pierde su actividad”. …
“http://genesis.uag.mx/edmedia/material/quimicaII/enzimas.cfm”

Las buenas condiciones son fundamentales para obtener buenos resultados, es

por ellos que hemos podido observar variaciones en los resultados de ambas
mesas, debido a la presencia de algún factor externo o una manipulación que
puede que haya hecho que nuestros resultados varíen. Como una mala incubación
o adición de los reactivos o sustrato.

“Enzima que oxida la glucosa dando como resultado al D-glucono-delta-lactona,

que a su vez se hidroliza a ácido glucónico y peróxido de hidrógeno por la
lactonasa. Trabaja a un pH óptimo de 3 a 7”….
“http://www.cosmos.com.mx/h/tec/czmx.htm ”

Esto comprueba lo arrojado con nuestros resultados ya que todos se encuentras

situados en éste rango habiéndose comprobado actividad enzimática

Conclusión

Teóricamente el pH óptimo de acción de la glucosa oxidasa está entre 3 y 7

por lo tanto al desarrollar la práctica podemos concluir que las muestra a las
que se les agregó HCl y a las que no se les agrego ni HCl ni NaOH son las
que más acción enzimática han tenido.

Algunos resultados variaron mucho de lo que teóricamente es lo correcto y

esto nos da a entender que hubieron otros factores que afectaron a la acción
enzimática en las muestras.

Referencias bibliográficas

Nelson D. y Cox M. (2007). Lehninger: Principios de Bioquímica. 5ta edición.

Madrid, Editorial Omega.

Plumer D. (1981). Introducción a la Bioquímica Práctica. Editorial MacGraw

Hill.

Stryer L. (1995). Bioquímica. 4ta edición. Barcelona, Editorial Reverte.

Biología y Química. 1era edición. Madrid, Editorial Santillana.

Bioquímica Ilustrada. 28ava edición, Editorial MacGraw Hill.