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Aprendiz
Juan Sebastián Cleves Vargas
Tutor
Fabián Yepes Carriazo
Neiva - Huila
2019
1
METODOLOGÍA DE LA INVESTIGACIÓN
ACTIVIDAD
Preguntas
DESARROLLO
2
Según la estrategia: Es de tipo experimental, ya que se trata precisamente de un
experimento donde "el investigador selecciona 75 hisopos oculares que fueron
recolectados de 66 pacientes con un cuadro clínico de conjuntivitis en la ciudad de
Río de Janeiro, Brasil. Los hisopos se almacenaron en recipientes especiales para
virus y se mantuvieron a una temperatura de 4°C hasta el momento de la extracción
de ADN. El ADN del adenovirus se extrajo empleando el kit Purificación (Promega,
Madson, EE.UU.). El ADN extraído se amplificó por reacción en cadena de la
polimerasa (PCR) utilizando primos específicos para una región conservada del gen
de hexon obteniendo un fragmento 2 301bp. Los fragmentos amplificados se
sometieron a pruebas de movilidad de heterodúplex (HMA) como se describe
previamente en 19 y/o análisis de secuenciación para la identificación del serotipo.
Para la prueba de HMA, las muestras fueron sometidas a un proceso de hibridación
en contra de los virus de control pertenecientes a los serotipos AdV3, AdV4, AdV7,
AdV8, AdV11 y AdV19. Para la secuenciación, los ADN amplificados de muestras
positivas fueron purificados utilizando el kit Wizard SV Gel y PCR Clean-Up, y las
secuencias fueron determinadas usando cebadores PCR y el kit BigDye
TerminatorCycleSequencing. Las secuencias de ADN fueron reunidas y analizadas
con los programas SeqMan, EditSeq, y MegAlign del paquete de software Lasegene
(DNASTAR, Madison, WI, USA)". Tomado del artículo EPIDEMIOLOGÍA
MOLECULAR DE CONJUNTIVITIS POR ADENOVIRUS EN RIO DE
JANEIRO, BRASIL, ENTRE LOS AÑ OS 2004 y 2007.
3. ¿Cuáles son los pasos del método científico que fueron empleados para desarrollar la
investigación?
3
2. Hipótesis: En Río de Janeiro en el 2003 había ocurrido una epidemia de
conjuntivitis y se había identificaron el virus vCA24 como el agente causante, en
base a estos antecedentes la hipótesis de la causa de la epidemia de verano de 2004
era que "el virus vCA24 era el causante".
3. Experimentación: Se hizo un experimento "el investigador selecciona 75 hisopos
oculares que fueron recolectados de 66 pacientes con un cuadro clínico de
conjuntivitis en la ciudad de Río de Janeiro, Brasil. Los hisopos se almacenaron en
recipientes especiales para virus y se mantuvieron a una temperatura de 4°C hasta el
momento de la extracción de ADN. El ADN del adenovirus se extrajo empleando el
kit Purificación (Promega, Madson, EE.UU.). El ADN extraído se amplificó por
reacción en cadena de la polimerasa (PCR) utilizando primos específicos para una
región conservada del gen de hexon obteniendo un fragmento2 301bp. Los
fragmentos amplificados se sometieron a pruebas de movilidad de heterodúplex
(HMA) como se describe previamente en19 y/o análisis de secuenciación para la
identificación del serotipo. Para la prueba de HMA, las muestras fueron sometidas a
un proceso de hibridación en contra de los virus de control pertenecientes a los
serotipos AdV3, AdV4, AdV7, AdV8, AdV11 y AdV19. Para la secuenciación, los
ADN amplificados de muestras positivas fueron purificados utilizando el kit Wizard
SV Gel y PCR Clean-Up, y las secuencias fueron determinadas usando cebadores
PCR y el kit BigDye ® TerminatorCycleSequencing. Las secuencias de ADN
fueron reunidas y analizadas con los programas SeqMan , EditSeq, y MegAlign del
paquete de software Lasegene (DNASTAR, Madison, WI, USA)". Tomado del
artículo EPIDEMIOLOGÍA MOLECULAR DE CONJUNTIVITIS POR
ADENOVIRUS EN RIO DE JANEIRO, BRASIL, ENTRE LOS AÑ OS 2004 y
2007.
4. Análisis de resultados: Se observan y analizan los resultados obtenidos del
experimento "Cuarenta y cinco muestras (60%) fueron positivos para Adv, de las
cuales, 21 muestras fueron clasificadas como AdV19 (46,7%), siete AdV8 (15,5%),
tres AdV31 (6,7%), y una de ADV1, AdV2, AdV3, AdV4 y AdV6 (Fig. 1). Nueve
muestras del serotipo no fueron identificadas debido a la mala calidad del ADN.
Otras Cinco muestras fueron positivas para el virus Coxsackie A24 (datos no
mostrados)". Tomado del artículo EPIDEMIOLOGÍA MOLECULAR DE
CONJUNTIVITIS POR ADENOVIRUS EN RIO DE JANEIRO, BRASIL, ENTRE
LOS AÑ OS 2004 y 2007.
5. Conclusiones: Se sacan las conclusiones del experimento "La distribución temporal
de las muestras positivas, muestra que el AdV19 fue la cepa predominante entre
marzo y mayo de 2004. En el presente estudio, a pesar de que solo se analizó́ un
pequeño número de muestras, la alta prevalencia de la cepa AdV19 entre marzo y
mayo de 2004 sugiere que este virus podría haber sido el agente etimológico de esta
segunda epidemia". Tomado del artículo EPIDEMIOLOGÍA MOLECULAR DE
CONJUNTIVITIS POR ADENOVIRUS EN RIO DE JANEIRO, BRASIL, ENTRE
LOS AÑ OS 2004 y 2007.
6. Con el análisis de resultados, la hipótesis de las autoridades de la salud que era una
continuación de la epidemia causada por vCA24 en el 2003, no puede ser validada,
por lo que ellos plantearon que "la alta prevalencia de la cepa AdV19 entre marzo y
mayo de 2004 sugiere que este virus podría haber sido el agente etimológico de esta
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segunda epidemia". Tomado del artículo EPIDEMIOLOGÍA MOLECULAR DE
CONJUNTIVITIS POR ADENOVIRUS EN RIO DE JANEIRO, BRASIL, ENTRE
LOS AÑ OS 2004 y 2007.
7. Documentación: Los investigadores realizaron un documento llamado
"EPIDEMIOLOGÍA MOLECULAR DE CONJUNTIVITIS POR ADENOVIRUS
EN RIO DE JANEIRO, BRASIL, ENTRE LOS AÑ OS 2004 y 2007" donde
reportaron los resultados de su estudio.