BAGIAN ILMU KESEHATAN THT-KL JURNAL

FAKULTAS KEDOKTERAN APRIL 2019

UNIVERSITAS PATTIMURA

EVALUATION OF OXIDATIVE STRESS AND ANTIOXIDANTS EFFECT

ON TURNING PROCESS ACUTE OTITIS MEDIA TO CHRONIC OTITIS
MEDIA WITH EFFUSION

OLEH:

YUDHIE DJUHASTIDAR TANDO, S.Ked.

2018-84-089

PEMBIMBING:

dr. BILLY Y. R. TALAKUA, Sp.THT-KL

DIBAWAKAN DALAM RANGKA TUGAS KEPANITERAAN KLINIK

PADA BAGIAN ILMU KESEHATAN THT-KL RSUD dr. M. HAULUSSY

FAKULTAS KEDOKTERAN UNIVERSITAS PATTIMURA

AMBON

2019
 EVALUASI STRES OKSIDATIF DAN EFEK ANTIOKSIDAN PADA

PEMBENTUKAN PROSES OTITIS MEDIA AKUT DAN OTITIS MEDIA

KRONIS DENGAN EFUSI

Abstrak
Objektif: Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui pengaruh stres
oksidatif dan situasi antioksidan pada otitis media kronis dengan efusi (COME)
dan otitis media akut (AOM) pada anak-anak. Metode: Sebanyak 107 anak
berusia 2 sampai 13 tahun dilakukan pemeriksaan. Penelitian ini melibatkan 31
pasien dengan AOM, 39 dengan COME, dan 37 sebagai subyek kontrol. Sampel
darah vena dikumpulkan dari semua pasien dan kelompok kontrol. Aktivitas
Myeloperoxidase (MPO), glutathione peroxidase (GPx), katalase (CAT), oksida
nitrat (NO), malondialdehid (MDA), dan superoksida dismutase (SOD) dianalisis
dalam sampel darah. Hasil: Usia rata-rata ditemukan 7,3 ± 3,3 pada kelompok
AOM, 6,2 ± 3,0 pada kelompok COME, dan 6 ± 2,4 pada kelompok kontrol.
MPO, NO, dan CAT ditemukan secara signifikan lebih tinggi pada kelompok
AOM dan COME daripada kelompok kontrol (p= 0,040, p= 0,001, dan p= 0,044).
Kesimpulan: Dalam studi ini, kami mengamati aktivitas antioksidan dan stres
oksidatif pada anak-anak dengan COME dan AOM. Hasil ini mungkin penting
dalam mendiagnosis penyakit ini dan dapat mempengaruhi pendekatan terapeutik
untuk pasien dengan COME dan AOM.

Kata kunci: otitis media akut, otitis media kronis dengan efusi, antioksidan, stres
oksidatif.

PENDAHULUAN

Secara umum, otitis media akut (AOM) merupakan infeksi yang terjadi pada

anak-anak dan merupakan penyebab utama gangguan pendengaran.1 Gejala AOM

meliputi efusi telinga tengah dan tanda-tanda infeksi akut seperti demam, nyeri,

dan kemerahan pada membran dan menggembung. Hal ini biasanya terlihat pada

anak-anak, dan memerlukan pengobatan antimikroba dan kadang-kadang

dilakukan operasi.2 Otitis media kronis dengan efusi (COME) dan otitis media
serosa ditandai dengan akumulasi cairan di belakang membran timpani, sementara

tanda-tanda dan gejala infeksi akut kurang ditemukan.

Spesies oksigen reaktif (ROS) merupakan mediator patologis penting dari banyak

penyakit di bawah kondisi fisiologis normal. Selain menjadi penting bagi

kehidupan manusia, beberapa bentuk oksigen reaktif memiliki potensi untuk

merusak tubuh. ROS, yang terbentuk selama reaksi kimia dan metabolisme yang

mungkin meliputi zat-zat seperti hidrogen peroksida, peroksida hidroksil, Radikal

bebas hidroksil, peroksida lipid, dan derivate lainnya, dapat menyebabkan

kerusakan pada berbagai jaringan.3,4 Nitrat oksida (NO) dan myeloperoxidase

(MPO) merupakan enzim oksidatif.

Antioksidan merupakan zat yang menghambat oksidasi yang disebabkan oleh

radikal bebas dengan menangkap dan menstabilkannya. Antioksidan

menyebabkan reaksi yang mengkonversi radikal bebas ke dalam bentuk yang

kurang berbahaya dan juga mencegah pembentukan radikal bebas baru.

Peningkatan dan akumulasi ROS di jaringan yang telah dinetralisir oleh

antioksidan menyebabkan kerusakan jaringan, lipid, protein, dan DNA,

menyebabkan kematian sel.3-6 MPO merupakan enzim oksidatif dan berperan

dalam peradangan kronis. Untuk melindungi diri terhadap produk-produk

beracun, organisme telah mengembangkan sistem antioksidan enzimatik seperti

dismutase superoksida (SOD), eritrosit malondialdehid (MDA), katalase (CAT),

dan glutathione peroxidase (GPx).7,8 Ketika terjadi peningkatan ROS karena

peradangan kronis, sistem antioksidan akan diaktifkan untuk mengeliminasinya.

Stres oksidatif berperan dalam patogenesis adenotonsillitis kronis, COME, dan

timpanosklerosis.6,10,11 Menurut pengetahuan kami, tidak ada penelitian yang

dilaporkan dalam literatur untuk menyelidiki tingkat antioksidan/biomarker stres

oksidatif pada pasien dengan kedua AOM dan COME. Dalam studi ini, kami

berusaha untuk mengungkapkan apakah terjadi perubahan pada ROS dan

keseimbangan antioksidan dalam darah perifer, yang mencerminkan reaksi dari

seluruh tubuh terhadap AOM dan COME.

MATERIAL DAN METODE

Pasien

Penelitian ini melibatkan 107 anak-anak; 31 pasien (17 laki-laki, 14 perempuan)

dengan AOM, 39 pasien (24 laki-laki, 15 perempuan) dengan COME, dan 37

subjek sehat (23 laki-laki, 14 perempuan) sebagai kelompok kontrol. Usia anak-

anak berkisar dari 2 sampai 13 tahun. Pasien dengan nyeri telinga, demam,

dan/atau gangguan pendengaran dan di diagnosis sebagai AOM akan

ditindaklanjuti. Dua puluh satu pasien memiliki infeksi otitis yang disertai dengan

saluran pernapasan atas akut. Sepuluh pasien hanya mengalami keluhan otitis.

Hitung darah lengkap, sedimentasi, dan protein C-reaktif (CRP) dipelajari dalam

sampel darah vena yang dikumpulkan dari pasien dengan AOM. Kami

memberikan terapi medis untuk pasien dengan AOM. Kami melakukan

paracentesis hanya untuk 5 pasien. Pasien dengan AOM diikuti secara teratur pada

interval 3 minggu. Tiga minggu kemudian, pasien yang masih mengalami otitis

media pada kunjungan control pertama dieksklusi dari kelompok AOM.

Pasien dengan efusi selama 3 bulan termasuk dalam kelompok COME. COME

didefinisikan sebagai adanya efusi yang dibuktikan dengan otoscopy dan/atau

tympanogram dengan gangguan pendengaran konduktif terus-menerus setelah 3

bulan terapi medis yang memadai termasuk antihistamin, dekongestan, atau

keduanya. Sampel darah pasien COME diambil setelah 3 bulan masa perawatan.

Pasien COME yang tidak menunjukkan respons terhadap pengobatan medis

dilakukan adenoidektomi, dan penyisipan grommet secara rutin untuk menjaga

aliran udara di telinga tengah. Adenoidectomy tidak dilakukan kecuali terdapat

adenoiditis kronis dengan sumbatan hidung. Pasien COME dengan riwayat

tonsilitis kronis juga dilakukan tonsilektomi.

Kelompok kontrol dibentuk berdasarkan usia dan jenis kelamin pada anak-anak

tanpa AOM dan COME yang terdapat di poliklinik. Subjek yang sehat juga

dievaluasi dengan metode otoscopic, otomicroscopic, dan tympanometric.

Kelompok kontrol dengan penyakit akut dan kronis yang mendasarinya (termasuk

AOM, COME, infeksi saluran pernapasan atas-bawah, rhinitis alergi, asma, atau

immunodeficiency) dieksklusi dari penelitian. Studi ini disetujui oleh komite etika

lokal, dan informed consent yang diterima dari orang tua pasien.

Analisis sampel darah

Sampel darah vena dikumpulkan dari semua pasien setelah puasa semalam pada

dua sesi (pertama pada jam 08:00 dan yang kedua pada jam 9:00). Dalam waktu 1

jam setalah sampel darah dikumpulkan, darah disentrifugasi (Eppendorf

Centrifuge 5810R, Jerman) pada 4000 rpm selama 10 menit, dan serum disimpan

pada suhu -70 °C sampai akan dilakukan analisis. Serum dianalisis untuk
mengukur aktivitas MPO, GPx, CAT, NO, MDA, dan SOD. Reagen yang

digunakan dalam penelitian ini diperoleh dari Sigma-Aldrich GmbH, Seelze-

Jerman, dan Merck KGaA Darmstadt-Jerman.

Aktivitas MPO ditentukan dengan menggunakan modifikasi dari metode O-

dianisidine.12 Aktivitas spesifik dinyatakan dalam satuan di IU/L. Metode Beutler

ini digunakan untuk pengukuran aktivitas GPx.13 Aktivitas CAT diuji dengan

mengukur laju degradasi H2O2 menggunakan metode Beutler ini.14 Aktivitas CAT

dalam serum dinyatakan dalam satuan U/ml. Tingkat serum NO diukur dengan

menggunakan Griess reagen, seperti yang dijelaskan sebelumnya.15 Hasil NO

dilaporkan di μM/L. Konsentrasi serum peroksidasi lipid (Total MDA) ditentukan

dengan menggunakan metode Ohkawa dengan sedikit modifikasi.16 Hasil MDA

diekspresikan dalam nanomoles per mililiter (nmol/ml). Aktivitas SOD ditentukan

seperti yang dijelaskan oleh Fridovich.17

Analisis statistik

Data yang diperoleh dianalisis dengan menggunakan software SPSS (versi 16.0,

SPSS, Inc, Chicago, IL, USA). Normalitas data ditentukan dengan menggunakan

uji Shapiro-Wilk. Variabel MDA dan GPx tidak menunjukkan distribusi normal

dalam salah satu kelompok, sedangkan variable CAT, MPO, dan SOD

terdistribusi secara normal. Variabel terdistribusi secara normal dibandingkan

dengan menggunakan uji ANOVA one way, dilanjutkan dengan uji post-hoc

Tukey untuk perbandingan berpasangan, sedangkan uji Kruskal-Wallis H

digunakan untuk membandingkan variabel terdistribusi non-normal. Nilai p

kurang dari 0,05 menunjukan signifikan secara statistik.

HASIL

Kelompok studi AOM terdiri atas 31 subyek (17 laki-laki, 14 perempuan) berusia

antara 2 dan 13 tahun (usia rata-rata 7.3 ± 3.3). Kelompok studi COME terdiri dari

39 subyek (25 laki-laki, 14 perempuan) berusia antara 2 dan 13 tahun (usia rata-

rata 6,2 ± 3,0). Kelompok kontrol terdiri dari 37 anak (20 laki-laki, 17 perempuan)

berusia antara 2 dan 11 tahun (usia rata-rata 6 ± 2,4). Tidak ada perbedaan yang

signifikan secara statistik antara tiga kelompok dalam hal usia dan jenis kelamin

(p>0,05). Nilai mean, standar deviasi, median, dan nilai minimum-maksimum

untuk aktivitas MDA, GPx, NO, CAT, kegiatan MPO, dan enzim SOD dalam

sampel darah dari semua kelompok, serta hasil statistik, ditunjukkan pada Tabel 1.

Tabel 1. Perbandingan statistik antara pasien dengan AOM dan COME dengan kelompok kontrol

Ketika tiga kelompok dibandingkan dengan NO, CAT, dan MPO ditemukan

secara signifikan dan secara statistik berbeda antara kelompok. NO, CAT, dan

MPO ditemukan secara signifikan lebih tinggi pada pasien COME dibandingkan

pada pasien kontrol dan AOM (masing-masing p= 0,001, p= 0.044, p= 0,040).

Distribusi NO ditemukan secara signifikan lebih tinggi pada kelompok COME

dan AOM [Gambar 1]. Distribusi MPO dan CAT ditemukan secara signifikan
lebih tinggi pada kelompok COME [Gambar 2 dan 3]. Namun, CAT ditemukan

lebih rendah pada pasien AOM daripada kelompok kontrol dan kelompok COME.

Distribusi MDA, GPx, dan SOD secara statistik tidak signifikan (masing-masing

p= 0,365, p= 0.285, p= 0,497).

Gambar 1. Distribusi kelompok NO Gambar 2. Distribusi kelompok MPO

Gambar 3. Distribusi kelompok CAT

DISKUSI

Dalam studi ini, MPO, CAT, dan NO ditemukan lebih tinggi pada pasien COME.

Peningkatan nilai MPO terutama terlihat pada pasien dengan COME. CAT rendah

pada fase akut dan tinggi fase kronis. Pada kedua AOM dan COME, penanda

stress oksidatif yang paling tinggi adalah NO. Studi kami tidak mengungkapkan
efek yang jelas dari SOD pada otitis media. Hal ini mungkin bahwa GPx dalam

keadaan pasif dalam proses ini. Menurut hasil ini, oksidan NO, CAT, dan MPO

dan antioksidan berperan penting dalam otitis media.

Ada sejumlah faktor penyebab yang berkontribusi terhadap AOM dan COME,

diperantarai oleh disfungsi dari tabung Eustachian. Namun, tiga faktor yang

paling penting adalah infeksi, peradangan, dan masalah dengan aliran udara di

telinga tengah.2,18 Obstruksi tabung Eustachian menyebabkan peningkatan

tekanan telinga tengah dan penumpukan cairan, penyumbatan pembuluh darah,

dan asidosis lokal.19 Pada AOM, leukosit melepaskan MPO, yang membuat jalan

bagi peroksidase lipid. Pada gilirannya, lipid peroksidase menyebabkan kematian

bakteri dan menyebabkan peningkatan stres oksidatif di telinga tengah,

menyebabkan kerusakan DNA dan protein dalam sel. Untuk alasan ini, kerusakan

jaringan terjadi pada telinga dan tabung Eustachius. Leukosit melepaskan ROS

untuk eliminasi sel nekrotik. ROS ini menyebabkan kerusakan lipid, protein,

lipoprotein, dan DNA sehingga menyebabkan peradangan kronis. MPO

merupakan enzim oksidatif antimikroba, dan berperan pada peradangan kronis

(aterosklerosis dan penyakit neurodegenerative, dll).20,21 Dalam penelitian kami,

nilai MPO secara signifikan lebih tinggi pada pasien dengan COME. Temuan ini

konsisten dengan penelitian lain dalam literatur.

Peroksidasi lipid merupakan reaksi yang perantarai oleh radikal bebas, yang

mengoksidasi lemak tak jenuh ganda yang terdapat di dalam membrane sel.

Tingkat stres oksidatif dipengaruhi oleh jumlah protein lipid yang ditemukan

dalam membran, jumlah fosfolipid, komposisi asam lemak jenuh, dan

permeabilitas membran. Peroksidasi lipid mengurangi dan mempengaruhi

permeabilitas membran. MDA terbentuk dari peroksidasi lipid membran dan

indikator yang paling umum digunakan sebagai untuk radikal bebas oksigen.7,22

Studi yang dilakukan oleh Park et al22 di Guinea babi mengungkapkan bahwa

terdapat kadar MDA tinggi dan hidroperoksida pada infeksi mukosa telinga.

Demikian pula, Doner et al.3 menemukan bahwa infeksi telinga tengah mengarah

pada kadar MDA tinggi, yang merupakan radikal bebas yang ditemukan dalam

jaringan lokal. Ditemukan dalam penelitian lain oleh Cemek et al.7 bahwa pasien

dengan AOM dan tonsilitis akut memiliki kadar MDA yang tinggi dalam aliran

darah dibandingkan dengan kelompok kontrol. Tidak seperti studi ini, MDA tidak

signifikan dalam penelitian kami (p= 0,365).

Eritrosit berperan untuk menangani stres oksidatif intraseluler melalui aktivitas

gabungan dari CAT, GPx, dan SOD. Dalam kondisi normal, memainkan peran

penting dalam akuisisi toleransi terhadap stres oksidatif dalam respon adaptif sel.

Studi oleh Khakimov et al.,24 telah menunjukkan bahwa anak-anak dengan otitis

media supuratif memiliki tingkat antioksidan yang rendah (SOD, CAT) dalam

sampel serum mereka, sedangkan produk oksidasi (MDA, lipid peroksidase) yang

tinggi. Dalam sebuah studi oleh Yariktas et al.10 pasien dengan COME

menunjukkan tingkat signifikan secara statistic dari CAT. Dalam penelitian kami,

pasien dengan COME menunjukkan peningkatan kadar CAT. Menariknya, CAT

ditemukan lebih rendah pada pasien AOM dibandingkan pada pasien kontrol.

ROS diketahui memainkan peran penting dalam mengeliminasi mikroorganisme

intraseluler. Tantangan sel polimorfonuklear oleh aktivasi banyak agen, termasuk

complemen imun, membangkitkan respon kuat yang menghasilkan spesies

oksigen beracun seperti ion oksida dan hidrogen peroksida. SOD secara khusus

menimbulkan ion oksida yang abnormal. Peran SOD pada otitis media tidak jelas

dipahami. Meskipun pembentukan SOD tinggi secara in vivo, tingkat intraselular

sangat rendah, dan berperan sebagai katalisis untuk pemecahan ion superoksida.

Dalam sebuah penelitian, dilaporkan bahwa tingkat SOD plasma pada pasien

dengan otitis media secara signifikan meningkat.25 Dalam penelitian kami, pada

kelompok pasien dengan COME memiliki tingkat SOD tinggi, tetapi

perbedaannya tidak signifikan secara statistik. Shukla et al.26 menemukan bahwa

kadar MDA dalam darah yang sangat tinggi, sedangkan kadar SOD dan CAT

rendah pada pasien dengan tonsilitis kronis. Pada tonsilektomi, kadar MDA lebih

rendah; kadar SOD dan katalase (antioksidan) yang tinggi.26 Sebuah studi oleh

Yariktas et al.10 mengungkapkan bahwa pasien dengan COME memiliki kadar

SOD lebih rendah dibandingkan dengan kelompok kontrol. Studi yang berbeda

telah mengungkapkan hasil variabel.

NO diproduksi di saluran pernapasan dan memainkan peran penting dalam

patofisiologi saluran pernapasan. NO dapat sebagai pro-oksidatif dan antioksidan,

juga ditemukan kadar yang tinggi dalam penyakit inflamasi.19 Kasperska-Zajac et

al.28 menemukan bahwa kadar NO yang tinggi pada pasien dengan tonsilitis

kronis berulang dan hipertrofi adenotonsillar kronis. Dalam banyak studi, pasien

dengan otitis kronis menunjukkan kadar NO yang tinggi.21,24 Dalam penelitian

kami, kadar NO yang ditemukan tinggi pada AOM dan COME, dan itu terbukti
signifikan secara statistik. Demikian pula, peningkatan kadar serum NO mungkin

akibat dari peningkatan stres oksidatif dalam penelitian ini.

Konsentrasi tinggi glutation tereduksi (GSH) dan rendahnya tingkat bentuk

teroksidasi glutathione disulfida (GSSG) sangat penting bagi kehidupan. Oleh

karena itu, GSH tinggi dan tingkat GSSG rendah sangat penting. Tingginya kadar

GSSG akan bereaksi dengan sulfhidril protein dan menyebabkan produksi GSH-

protein sulfhidril, yang terlibat dalam menonaktifkan protein lain.7 Dalam sebuah

studi pada 59 anak-anak, Testa et al.29 menemukan bahwa analisis cairan telinga

tengah menunjukkan tingkat peroksidase lipid yang tinggi. Hal ini menunjukkan

bahwa kerusakan oksidatif oleh COME memiliki etiologi multifaktorial dan

bahwa pengobatan dengan GSH bisa memiliki efek pengobatan yang positif.

Cemek et al.7 menunjukkan bahwa pasien dengan COME dan tonsilitis akut

memiliki kadar GSH lebih rendah dibandingkan dengan kelompok kontrol.

Namun, dalam penelitian kami, kadar GPx tidak signifikan pada ketiga kelompok

(p= 0,285), dan lebih rendah pada kelompok COME dan AOM.

KESIMPULAN

Kesimpulannya, kami menganggap bahwa kadar serum stress oksidatif dan

produk antioksidan berperan aktif dalam patogenesis COME dan AOM. Kami

berpikir bahwa hasil ini penting dalam diagnosis dan pengobatan pasien.