UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA

FACULTAD DE INGENIERIA
ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL AGROINDUSTRIAL

TITULO:
RECONOCIMIENTO DELOS EQUIPOS DE LABORATORIO DE
INGENIERIA DE BIOPROCESOS

CURSO:
Laboratorio de Ingeniería de Bioprocesos

AUTORES:
Espinoza Leon Dany
Mendoza Esquivel Christian
Morales Valdiviezo Xiomara
Rodríguez Morales Fiorela
Vasquez Cunya Jhean

DOCENTE:
Ing. Augusto Castillo Calderón
Nuevo Chimbote – Perú
2019
 PRE-INFORME DEL EXPERIMENTO

TITULO:
‘RECONOCIMIENTO DE LOS EQUIPOS DE LABORATORIO DE
BIOPROCESOS’

I. OBEJETIVOS:

1.1.General:

 Reconocer y aprender el uso correcto de los diferentes equipos que

existen en el laboratorio de ingeniería de bioprocesos.

1.2.Específicos

 Identificar el equipo más adecuado para cada experimento que se

realice en la práctica.
 Manipular cuidadosamente los quipos e instrumentos del laboratorio
de ingeniería de bioprocesos.

II. METODOLOGIA EXPERIMENTAL

2.1. DISEÑO DE MEDIOS DE CULTIVO

El diseño de un medio de fermentación tiene como finalidad la elección de los
componentes necesarios para lograr el crecimiento y la formación de productos
correspondientes al proceso a desarrollar. Con tal objeto se debe tener en cuenta
todos aquellos aspectos relacionados con el microorganismo, el proceso y los
sustratos a ser empleados como son los requerimientos nutricionales del
microorganismo y algunos específicos del proceso.
Para la formulación del diseño de cultivo se tiene en cuenta los siguientes
requerimientos nutricionales para el cultivo Pichia stipitis NRRL Y-7124.

Para el Diseño de medio de cultivo:

Macronutrientes C, N, Mg, K y P
Micronutrientes Zn, Ca, Fe, Cu, Co y
Mn
Estado Medio líquido
Requerimientos nutricionales: Para ello utilizamos un Medio de cultivo
mínimo.

 Fuente de carbono y energía (45%) : xilosa y glucosa

 Fuente de N - 9% : Sulfato de amonio
 Fuente de Mg 0.4% y S 0,25% : Sulfato de magnesio
heptahidratado
 Fuente de K – 0.5% : Fosfato diácido de Potasio
 Fuente de P – 2.0% : Fosfato diácido de Potasio

𝑿𝒇 = 2 𝑔/𝑙
Condiciones de cultivo:

 Temperatura : 30ºC
 Velocidad de agitación(Shaker) : 200 rpm

Medio Sólido De Mantención

TABLA 01: Concentración de Nutrientes para el medio de mantención

Concentración
Nutriente
(g/L)
Extracto de levadura 3
Peptona de caseína 5
Agar 20
Extracto de malta 3

Medio de activación
TABLA 02: Concentración de Nutrientes para el medio de activación

Nutriente Concentración (g/l)

Glucosa 10
xilosa 10
Extracto de
3
levadura
Extracto de malta 5
Solución de sales 5 ml/L
T: 30ºC, N: 220 rpm
Medio de fermentación
 Para un volumen de medio: 30% - 40% del volumen del matraz.
 Para una concentración final: 2 g/l.

TABLA 03: Concentración de Nutrientes para el medio de fermentación

Nutriente Concentración (g/L)

Glucosa 15
Xilosa 15
(NH4)2SO4 3
KH2PO4 3
MgSO4-7H2O 1.1
Solución de sales 5 ml/L

Nutrientes Para El Medio De Fermentación:

% en
Elemento Nutriente P.M. % en Nutriente
Célula
C C5H10O5 150
C C6H12O6 180
N (NH4)2SO4 132
S (NH4)2SO4 132
K KH2PO4 136
P KH2PO4 136
Mg (MgSO4.7H2O) 246
S (MgSO4.7H2O) 246
 Nutriente Limitante:
 μ_Max=
 Tiempo de fermentación:
Sales para el medio de fermentación: por bibliografía

Nutriente Concentración (g/l)

CaCl2.2H2O 2.9
ZnSO4.7H2O 0.4
FeSO4.7H2O 6.42
CuSO4.5H2O 0.25
CoCl2.6H2O 0.24
MgSO4.7H2O 2.2
HCl 0.06

2.2. PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO

La preparación de medios para el desarrollo de procesos de fermentación es una
etapa fundamental para asegurar la productividad de los mismos. Los
componentes de los medios constituyen los efectores externos de naturaleza
química que desempeñan un rol esencial en los procesos ya que deben cumplir
con los requerimientos del crecimiento y de formación de productos y además
suministrar energía para la síntesis de metabolitos y para el mantenimiento celular
2.2.1. CONDICIONES DE ASEPSIA: En cultivos microbianos, la técnica
aséptica es vital para el correcto funcionamiento para lo cual se tiene
que seguir lo siguiente:
 Comenzar la experimentación desinfectando el área de trabajo,
utilizar algún desinfectante con una toalla de papel y secar. Repetir
el mismo procedimiento cuando se termina el trabajo. El
desinfectante puede ser con alcohol de 96º
 Todos los materiales y sustancias químicas que vamos a utilizar
deben estar debidamente rotuladas con el nombre de la cepa, grupo
y fecha.
 Tener cuidado con los mecheros bunsen para evitar quemaduras.
 Todo material contaminado debe ser desinfectado antes de ser
eliminado o reutilizado.
 Cuando se trabaje con el mechero se debe flamear los matraces para
eliminar cualquier presencia de microorganismo presente en el área
y que pueda contaminar.
DIAGRAMA 1:

Matraz
-Nombre de cepa.
ROTULAR -Fecha.
–Nombre del grupo.
Mechero bunsen
ENCENDER Previamente desinfectado el área
de trabajo con alcohol de 96º

Los Matraces Si los matraces tienen un tapón

SOSTENER de algodón, aflojar un poco de
manera que no esté muy apretado

La boca de ambos matraces para

FLAMEAR matar cualquier microorganismo
presente en el aire y que pueda
contaminar en la práctica.

RETIRAR Tapar con el meñique

FLAMEAR La boca de ambos matraces

Posición inclinada (riesgo de

MANTENER contaminación sea mínimo)

Inóculo
SEMBRAR Matraz estéril

Boca de los matraces

FLAMEAR taparlos de nuevo

Inóculo
MEZCLAR Matraces en el caldo
sembrado

Los tapones antes que los

FLAMEAR coloques en los matraces.
2.3. MONTAJE DEL EQUIPO EXPERIMENTAL, CULTIVO DEL M.O,
ETC
Para el desarrollo experimental se realizará distintos métodos analíticos los cuales
se deben conocer los parámetros necesarios para un correcto funcionamiento.
2.3.1. DETERMINACIÓN DE AZÚCARES REDUCTORES:
MÉTODO DEL DNS (ÁCIDO DINITROSALICÍLICO)
La preparación del reactivo DNS requiere de lo siguiente:
 10 g/l de ácido 3,5 dinitrosalicílico (DNS)
 200 ml/l de NaOH 2N
 300 g/l de tartrato de sodio y potasio tetra hidratado
Para la preparación de este reactivo, se disuelve el tartrato en
aproximadamente 500 o 600 ml de agua, paralelamente se disuelve el ácido
DNS. Ambas soluciones se mezclan en un matraz aforado de 1 litro y se
agita hasta la completa disolución de todos los componentes, para
posteriormente aforar hasta un litro.
Se precisa realizar los siguientes pasos para el análisis de la muestra:
1. Se añade un volumen del reactivo DNS a un volumen de muestra a
analizar.
2. Se mantiene la mezcla en un baño de agua a ebullición durante 5
minutos para luego dejar enfriar.
3. Se añaden 10 volúmenes de agua destilada.
4. Se lee la absorbancia a 540 nm, utilizando agua como blanco.
5. La concentración se obtiene interceptando la medida de absorbancia
en la curva de calibrado.
La curva de calibrado para el azúcar se obtiene a partir de muestras de
concentración conocida y analizadas según este procedimiento, previo
hidrolisis acida de cada muestra
2.3.2. DETERMINACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN CELULAR
POR DENSIDAD ÓPTICA (D. O.)
El método se basa en el aumento de la turbidez del medio, al incrementarse la
concentración de microorganismos, esto puede ser detectado fácilmente por
espectrofotometría a 640 nm. Para esta determinación es necesario que
previamente se elabore una curva de calibrado, para lo cual las concentraciones
de microorganismos en el medio son determinadas por peso seco de acuerdo al
siguiente procedimiento:
1. Se toma una muestra de volumen conocido, y se centrifuga a 5000 rpm
durante 20 minutos.
2. Se elimina el sobrenadante y se re-suspende el centrifugado con agua
destilada.
3. Se vuelve a centrifugar en las mismas condiciones a fin de eliminar restos
de sustrato que pudieran alterar la determinación.
 4. Se elimina el sobrenadante, se re-disuelve el precipitado y se seca en la
estufa a 80°C hasta peso constante.

2.3.3. PLAN DE MUESTREO Y REGISTRO DE DATOS

Grupo: C3
Día de la experiencia:
…………………………………………………………………………………………………………………….
Microrganismo: ……………………………………………………………................................
Fuente Carbono: ……………………………. pH……………….......... T °C……………………..
N rpm………………………

Nº HORA TIEMPO Absorbancia Nombre del Observaciones

(horas) (640 nm) alumno