2.

1 BIOENSAYOS Y ENSAYOS CON RADIOISÓTOPOS

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BIOENSAYOS
Se usan para caracterizar la función de
las sustancias neuroactivas. Su principio
consta de dos importantes pasos:

1
Se remueve la fuente
endógena de la
sustancia a estudiar.
Esto genera fallas fisiológicas y
metabólicas en el sistema.

2
Se aplica la sustancia al Si este paso compensa las
organismo o cultivo fallas, es un indicador de que la
celular. sustancia puede regular estas
funciones.

It's ME

ENSAYOS CON
RADIOISÓTOPOS
Usados para detectar sustancias en
pequeñas concentraciones o bien, para
estudiar la afinidad ligando-receptor.

entre ellos tenemos...

Radioinmunoensayo
Creado en 1960 por Solomon B. y Rosalyn Y,
B

permite la detección de sustancias en el

er s

rango femtomolar ¡
on &
Y

-15
alow

Funciona por la unión entre x10

anticuerpos (Ac), antígenos (Ag) y
antígenos marcados (Ag*)

1 2 3 4
Ag* Ag* Ac-Ag*
Ag

Ac-Ag*

Ac Ac-Ag*
Ac
Se interpola el valor de
Se marcan los antigenos Se mezclan Ac junto con Se elimina el antígeno no las uniones Ag* con una
con radioactividad y se Ag* (cantidad conocida) y unido y se cuantifican las curva de calibración
obtienen los anticuerpos. Ag de la muestra a estudiar. uniones Ag*-Ac. obteniendo así la
cantidad de Ag.

Ensayo radioreceptor
Conocido también como el diagrama de Scatchard,
permite determinar la constante de disociación Kd.

Kd es la pendiente de la curva y
representa la afinidad de un ligando
por su receptor.
 2.2 MICRODIÁLISIS Y DETECCIÓN ELECTROQUÍMICA

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MICRODIÁLISIS
Consiste en aplicar o retirar una cantidad
constante de una sustancia
biológicamente activa en el líquido
cefaloraquideo.

La microdiálisis simula un sistema capilar en el que el

sustrato cruza una barrera permeable.

El flujo también
depende de la
velocidad de la
cámara de
microdiálisis.

La dirección del flujo depende de primariamente

del gradiente de concentración soluto-fluido.

DETECCIÓN
ELECTROQUÍMICA
Conjunto de técnicas en donde se aplica
un potencial eléctrico a una muestra que
contiene una solución con solutos
oxidables o reducibles.

Voltametría
Se aplica una
3 diferencia de
Para esté método potencial
1 usualmente se emplean Electrodo (Voltaje). Por lo
3 electrodos activo que empieza el
Referencia
flujo de electrones
(corriente).
Referencia

Diferencia de
potencial
Electrodo
activo
Electrodo
auxiliar

Se calcula el flujo de corriente, que a

Los electrodos se conectan en serie, con
2 el electrodo activo posicionado en la
estructura cerebral de interés.
4 su vez, es una medida indirecta de la
cantidad de material electro-activo en
la solución.

La voltametría funciona porque varios neurotrasnmisores, especialmente catecolaminas son

oxidables a voltajes con los que la mayoría de las sustancias en el fluido extracelular no se oxidan.

Amperometría
De forma similar a la voltimetría, en esta técnica también se aplica una diferencia de
potencial entre el electrodo activo y la referencia. Sin embargo, adicionalmente se aplica
una fase móvil y sólo los elementos en contacto con el electrodo se oxidan.

Cuando la reacción es Cuando el área del

parcial, y solo reacciona electrodo es mayor y la
una fracción del soluto, reacción es completa, el
el método se llama método se llama

Amperometría Coulometría