ANALISIS DE LOS ALIMENTOS

CROMATOGRAFÌA

1. IMPORTANCIA
La cromatografía fue empleada por primera vez por el científico
ruso -italiano mikhail tsvet en 1990.

Es una técnica en la cual se encarga de separar sustancias que se

basa en las diferentes velocidades con la cual se mueve cada una
de ellas a través de un medio poroso arrastrado por un disolvente
en movimiento.

Se define de dos maneras:

-LIQUIDA
-GAS

2. OBJETIVOS

. Aprender y dar a conocer el proceso de una cromatografía

liquida de alta resolución y sus diferentes tipos.

. Conocer la funcionalidad de las diferentes partes del equipo

3. CROMATOGRAFIA LIQUIDA PHLC

Es un disolvente o mezcla de disolventes y la fase

estacionaria un sólido que interactúa con las sustancias
que se desea separar (cromatografía líquido-), o sólido
bien un líquido inmiscible con la fase móvil, depositado
en la superficie de un sólido (cromatografía líquida).
 ANALISIS DE LOS ALIMENTOS

La cromatografía liquida tiene un potencial de

aplicaciones más amplio debido ya que el 85% de los
compuestos conocidos no son suficientemente volátiles
o estables como para ser separados por cromatografía de
gases y esto con lleva al desarrollo del método “PHLC”.

Su función es identificar y cuantificar compuestos de una

mezcla, se utiliza en la parte química y bioquímica.
En la industria se utiliza en el sector de los farmacéuticos,
determina:
-AMINOACIDOS
-PROTEINAS
-ACIDOS NUCLEICOS
-ESTEROIDES
-DROGAS
-PLAGICIDAS
-ANTIBIOTICOS Y ESPECIAS ORGANO METÁLICAS (son de
carácter no orgánico).

4. CARACTERISTICAS CROMATOGRAFIA LIQUIDA DE ALTA

RESOLUCION

-Elevada sensibilidad
-Elevada aplicación
-Permite realizar análisis cualitativos exactos
-Es adecuada para la separación de especies termolábiles y no
volátiles
 ANALISIS DE LOS ALIMENTOS

- Aplicaciones principales: Técnica de separación para los

materiales menos volátiles e iónicos, análisis cuantitativo de
multicomponentes
-Fenómeno molecular, reparto entre solución liquida y substrato
-Ventajas en el análisis cualitativo: Separa materiales para su
examen por medio de otras técnicas
-Ventajas en el análisis cualitativo: Aplicación amplia a los
materiales menos volátiles, análisis de multicomponentes
-Muestra promedio deseable :10 mg
-Limitaciones del método: Se tarda en desarrollar el método
-Limitaciones para la muestra ninguna

5. INSTRUMENTACION PARA CROMOTOGRAFIA DE

LIQUIDOS “PHLC”

RESERVORIO
- Contiene a la fase móvil, Frasco cerrado de vidrio o de algún
polímero resistente al disolvente con paredes homogéneas,
Contiene un filtro de metal poroso que ayuda a retener
partículas de tamaño mayor a 10 µm.
-Previo al bombeo del disolvente hacia el sistema de PHLC, se
realiza un tratamiento por desgasificación por ultrasonicacion
o un burbujeo con un gas inerte (He excelencia).

CONSIDERACIONES DEL DISOLVENTE

. El disolvente debe de ser de alta pureza (grado PHLC).
. Disolver el analito
. Tener baja viscosidad.
 ANALISIS DE LOS ALIMENTOS

. No debe reaccionar con el empaque de la columna.

. Debe ser volátil.
. Polaridad adecuada para el tipo de análisis que se lleve a
cabo.
SISTEMAS DE BOMBEO
TIPOS DE BOMBAS
. BOMBAS RECIPROCAS. - Son las más utilizadas, su
movimiento cíclico de uno o más pistones con válvulas de
entrada y salida, elementos comprensibles en el circuito
atenúan variaciones, 2 pistones es la opción más adecuada.
Producen flujo con pulsaciones.
. BOMBAS DE DESPLAZAMIENTO. - Cámara con un
embolo impulsado por un motor, flujo libre de pulsos,
independientemente de viscosidad y contrapresión. Su
capacidad de bombeo es limitada, poco practica para
reposición y cambio de disolvente.
. BOMBAS NEUMATICAS. - Son baratas, exentas de
impulsos.
Su capacidad es limitada y de presión de salida, no sirve para
elución con gradientes.
INYECTOR (Automuestrador o manual).
-Permite introducir la muestra al sistema de PHLC para su
análisis sin despresurizar el sistema y sin interrumpir el
caudal.
-la muestra se introduce en el “Loop”, el cual se encarga de
introducir la muestra al sistema.
 ANALISIS DE LOS ALIMENTOS

-Tienes una posición de carga y otra de inyección

COLUMNA
Sistema de análisis, es el medio donde se lleva a cabo la
separación y es el contenedor de la FE.
Las pre columnas deben contener la misma FE que el
empaque de la columna, este evita el posible ingreso de
partículas contaminantes y en general prolonga la vida media
de la columna.

DETECTOR
Es un transductor que tiene como función el registro del paso
de componentes de una muestra en el orden en el que efluyen.
Se encarga de translucir la energía emitida de un compuesto,
funciona únicamente para compuestos que absorban en
UV/VIS. Puede utilizarse en gradiente de elución, es
altamente selectivo sobre compuestos que posean doble
enlaces.
COLECTOR O FRACCIONES
Sirve para recibir o contener por separado los compuestos que
ya he luyeron por si se requiere un análisis posterior de alguno
de ellos.
COMPUTADOR
Sistema de almacenamiento.
ANALISIS DE LOS ALIMENTOS

CROMATOGRAFÍA LIQUIDA “HPLC”

ANALISIS DE LOS ALIMENTOS