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UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERÍA

FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA Y TEXTIL

Departamento Académico de Ingeniería Química

Laboratorio de Química Orgánica

“Cromatografia de Capa Fina y Columna”

GRUPO N° 5

INTEGRANTES: Isaac Angel Quilla Caceres

Tito Pajsi Ramiro
Steven Timothy Ordoñez Osorio

DOCENTES: Emilia Gabriela Hermoza Guerra

Tarsila Tuesta Chavez

LIMA – PERÚ

2019
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Contenido

Objetivos........................................................................................................................... 1
Fundamento Teórico ......................................................................................................... 1
Espinaca ....................................................................... Error! Bookmark not defined.
Los carotenoides .......................................................... Error! Bookmark not defined.
b-caroteno ................................................................. Error! Bookmark not defined.
Licopeno ................................................................... Error! Bookmark not defined.
Capsantina ................................................................ Error! Bookmark not defined.
La Clorofila .................................................................. Error! Bookmark not defined.
Datos ................................................................................................................................. 3
Alcohol etílico.............................................................. Error! Bookmark not defined.
Propiedades fisicoquímicas ...................................... Error! Bookmark not defined.
Pictograma ................................................................ Error! Bookmark not defined.
Rombo de seguridad ................................................. Error! Bookmark not defined.
Peligrosidad .............................................................. Error! Bookmark not defined.
Éter etílico .................................................................... Error! Bookmark not defined.
Propiedades fisicoquímicas ...................................... Error! Bookmark not defined.
Pictograma ................................................................ Error! Bookmark not defined.
Rombo de seguridad ................................................. Error! Bookmark not defined.
Peligrosidad .............................................................. Error! Bookmark not defined.
n- hexano....................................................................................................................... 4
Propiedades fisicoquímicas ....................................................................................... 4
Pictograma ................................................................................................................. 5
Rombo de seguridad .................................................................................................. 5
Peligrosidad ............................................................................................................... 5
Diagrama de flujo del Proceso de extracción de pigmentos de la espinaca ..................... 6
Discusión de resultados .................................................................................................... 8
Resultados Obtenidos ................................................................................................... 8
Observaciones ............................................................................................................. 11
Explicación ................................................................................................................. 11
Conclusiones ............................................................................................................... 12
Bibliografía ..................................................................................................................... 13
Anexos ............................................................................................................................ 13
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Pigmentos aplicados en los colorantes ......................... Error! Bookmark not defined.

Pigmentos para cosméticos y textiles a partir de las hojas de otoño Error! Bookmark
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Tabla 1: Propiedades fisicoquímicas del alcohol etílico (Carl Roth, 2017) ............ Error!
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Tabla 2: Propiedades fisicoquímicas del éter etílico (Carl Roth, 2017) .................. Error!
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Tabla 3: Propiedades fisicoquímicas del n-hexano (Carl Roth, 2017) ............................. 4

Figura 1: Estructura del b-caroteno. ................................ Error! Bookmark not defined.

Figura 2: Estructura del Licopeno. .................................. Error! Bookmark not defined.
Figura 3:Estructura de la capsantina. ............................... Error! Bookmark not defined.
Figura 4: Estructura de la clorofila a y b ......................... Error! Bookmark not defined.
Figura 5: Pictograma del Alcohol etílico......................... Error! Bookmark not defined.
Figura 6:Rombo de seguridad del Alcohol etílico. .......... Error! Bookmark not defined.
Figura 7: Pictograma del éter etílico. .............................. Error! Bookmark not defined.
Figura 8: Rombo de seguridad del éter etílico. ................ Error! Bookmark not defined.
Figura 9: Pictograma del n-hexano................................................................................... 5
Figura 10: Rombo de seguridad del n-hexano. ................................................................. 5
Figura 11: Solución de etanol y agua después de decantar(t= 0s). Error! Bookmark not
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Figura 12: Solución de 2 fases (Hexano y etanol) después de unos 20 minutos. .... Error!
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Figura 13: Proceso de lavado de Hexano y salmuera. ..... Error! Bookmark not defined.
Figura 14: Hexano lavado, diluido con sulfato de sodio anhidro,( Producto final).
......................................................................................... Error! Bookmark not defined.
Figura 15: Pigmentos utilizados en los colorantes .......... Error! Bookmark not defined.
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Objetivos

 Entrenar en técnicas de separación e identificación de pigmentos naturales por

cromatografía.

 Conocer las distintas técnicas cromatograficas de capa fina y columna.

 Conocer los fundamentos físico-químicos implicados en los procesos de

separación por cromatografía.

Fundamento Teórico

Cromatografía en capa fina

La fase estacionaria representa una capa delgada de un adsorbente (Por ejemplo, gel,
celulosa, alúmina) depositada sobre un soporte horizontal como una placa de vidrio o
una lámina de plástico.
El proceso es parecido a la cromatografía de papel con la ventaja de que se procesa
más rápidamente, presenta mejores separaciones y se puede elegir diferentes
adsorbentes. Esta técnica es estándar en el Laboratorio de Química Orgánica. Debido a
lo simple y fácil de hacer. También sirve para el análisis cualitativo, ya que permite
conocer de manera rápida y sencilla cuantos componentes están presentes en la
mezcla.
El procedimiento consiste en tener una lámina de vidrio, metal que este recubierto con
una capa delgada de un sólido adsorbente. Se deposita una pequeña cantidad de la
muestra problema en disolución. Luego la placa se introduce en una cubeta
cromatografica, de forma que solo la parte de abajo queda sumergida en la mezcla.
Esta mezcla es la fase móvil y asciende por la placa.
A medida que la fase móvil pasa por el lugar donde está el compuesto X se establece el
equilibrio entre las moléculas de cada uno de los componentes en la mezcla que son
absorbidas y las que se encuentran en disolución.
Después de este proceso, los componentes se diferencian en la solubilidad y en el nivel
de adsorción, de tal manera que los componentes se desplazaran más que otros.
Después que el eluyente ingresa a la parte superior de la placa, esta se extrae de la
cubeta y los componentes se visualizan.
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Calculo de factor de Retención (Rf): Cuando son visibles, se puede hallar para cada una
de las manchas el valor de Rf, o la trayectoria que cada compuesto se desplaza en la
placa, Todos los compuestos tienen un Rf característico que depende del disolvente
empleado y del tipo de placa utilizada, pero no influye el recorrido de la fase móvil.

Distancia del compuesto

𝑅𝑓 = Distancia del disolvente

Cromatografía en columna

Es una técnica de purificación, ya que permite separar los compuestos deseados de

una mezcla. El procedimiento consiste en usar una columna de vidrio vertical la cual se
llena con un soporte solido adsorbente (Fase Estacionaria).
La muestra que se quiere aislar se deposita en la parte superior de este soporte. El
resto de la columna se llena con la fase móvil que, por el efecto de la gravedad, hace
mover la muestra.
Se establece un equilibrio entre el soluto adsorbido en la fase estacionaria y el
disolvente que fluye por la columna. Los componentes de una mezcla establecerán
interacciones diferentes con la fase estacionaria y la móvil.
Análisis de los eluatos de la columna: Si los compuestos separados en la cromatografía
en columna son coloreados; la separación se puede visualizar. Sin embargo, a menudo
los compuestos que deben ser separados son incoloros.
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Datos

Alumina

Propiedades fisicoquímicas

Tabla 1: Propiedades fisicoquímicas de la alúmina

Absorción de Agua – saturación (%) 0

Densidad ( g cm-3) 3,9

Porosidad Aparente (%) 0

Dureza –Knoop ( kgf mm ²) 2100

Pictograma

Figura 1: Pictograma de la alúmina.

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Rombo de seguridad

Figura 2: Rombo de seguridad de la alúmina..

Peligrosidad

 No es inflamable
 No es explosivo ni peligro de este.
 No es corrosivo.
 La inhalación de altas concentraciones de polvo de esta sustancia puede originar
irritación de los ojos y tracto respiratorio superior.

n- hexano

Propiedades fisicoquímicas

Tabla 2: Propiedades fisicoquímicas del n-hexano (Carl Roth, 2017)

Forma Liquido (fluido)

Color incoloro
Olor Como: gasolina
Punto de fusión -95 °C a 1.013 hPa
Punto de inflamación -22 °C a 1.013 hPa
Temperatura de ignición 225 °C - ECHA
Densidad(20°C) 0,66 g /cm³ a 20 °C
Solubilidad en agua a 25°C <0,1 g/L a 20 °C
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Pictograma

Figura 3: Pictograma del n-hexano.

Rombo de seguridad

Figura 4: Rombo de seguridad del n-hexano.

Peligrosidad

 Líquido y vapores muy inflamables

 Puede ser mortal en caso de ingestión y penetración en las vías respiratorias
 Provoca irritación cutánea
 Puede provocar somnolencia o vértigo
 Se sospecha que perjudica a la fertilidad
 Puede provocar daños en los órganos (sistema nervioso) tras exposiciones
prolongadas o repetidas (en caso de inhalación)
 Tóxico para los organismos acuáticos, con efectos nocivos duraderos
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Diagrama de flujo del Proceso de extracción de pigmentos de la espinaca

Cromatografía de capa fina

silica gel.

colacar en una estufa.

lavar y secar los portaobjetos op: disolcuion.

44mL
ml de H2O
de agua agregar la papilla a 150ªC por 70 min

Cond: amientantales

op: siembra del pigmento

cond: ambientales.

Forrar 3 vasos con papel filtro :

colocar las placas en los vasos.

n-Hexano + Acetona (3:1) n-hexano n-Hexano + Acetona (1:5)

n-hexano n-Hexano acetona
+ 5 gotas de acetona

medir las distancias recorridas por el solvente

en la placas
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Cromatografía de columna

poner algodon. Agregar poco a poco a la columna

preparar el sistema, agregar hexano. agragar poco a poco la alumina

pigmento

vacio
vacio

armar el sig. sistema

acetona

pigmento verde arrastrado

vacio
pigmento amarillo. por la acetona.

arrastrado por el hexano.

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Discusión de resultados

Resultados Obtenidos

Cromatografia de Capa fina

 Placa 1, n-Hexano y acetona (3:1)

Punto de referencia a 1 cm de la parte inferior
Distancia recorrida por el solvente= 5 cm
Distancia recorrida por el compuesto de color amarillo= 4.25 cm
Distancia recorrida por el compuesto de color Negro= 1.6 cm
Distancia recorrida por el compuesto de color Verde= 0.8 cm
Distancia recorrida por el compuesto de color Verde oscuro= 0.6 cm

Rf= Distancia recorrida por el compuesto/ Distancia recorrida por el solvente

Rf Amarillo =0.85
Rf Negro=0.32
Rf Verde=0.16
Rf Verde oscuro=0.12
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 Placa 2, n-Hexano
Punto de referencia a 1 cm de la parte inferior
Distancia recorrida por el solvente= 5.5 cm
Distancia recorrida por el compuesto de color Verde= 0 cm
Distancia recorrida por el compuesto de color amarillo= 1.09 cm

Rf= Distancia recorrida por el compuesto/ Distancia recorrida por el solvente

Rf Verde= 0

Rf Amarillo = 0.198
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 Placa 3, Hexano y acetona (1:5)

Punto de referencia a 1 cm de la parte inferior
Distancia recorrida por el solvente= 5cm
Distancia recorrida por el compuesto de color amarillo= 5.1 cm
Distancia recorrida por el compuesto de color negro= 2.9 cm
Distancia recorrida por el compuesto de color verde= 1 cm
Distancia recorrida por el compuesto de color amarillo= 0.6 cm
Distancia recorrida por el compuesto de color amarillo= 5cm

Rf= Distancia recorrida por el compuesto/ Distancia recorrida por el solvente

Rf Amarillo = 0.894
Rf Negro= 0.509
Rf Verde= 0.16
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Cromatografía de Columna

Observaciones

 En el experimento de la cromatografía en columna se notó que el primer color

fue transparente, luego verde oscuro, verde oscuro fuerte, blanco, amarillo
seguido por blanco.
 En el experimento de la cromatografía de capa fina se notó que el color
amarillo tuvo la distancia más alta en la solución de Hexano-Acetona (3:1).

Explicación

 La cromatografía de columna se lleva a cabo en mayor tiempo que la cromatografía

de capa fina, es decir la velocidad en la que se separa con respecto a la cromatografía
de columna de columna demasiado lenta, respecto a la segunda, pero permite
distinguir claramente los componentes mediante la coloración.

 La cromatografía de capa fina se realizó en un vaso de precipitados cerrado con una

de reloj, pero para lograr que toda la atmosfera dentro del vaso se sature del
eluyente se forra con un papel filtro humedecido con esta solución.
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Conclusiones

 En la cromatografía de capa fina, el eluyente asciende por capilaridad.

 Las propiedades físicas y químicas que presenta una muestra es de vital importancia
en la identificación de los componentes de la misma, ya que estas son de similar
naturaleza y comportamiento por esto permiten percibir las características
principales de la muestra (pigmento).

 La naturaleza de la fase estacionaria o absorbente y móvil o diluyente, es de suma

importancia en la cromatografía, ya que definen la ocurrencia del proceso y la
identificación de los componentes, además se puede concluir que la propiedad más
notable, es el color característico que presentan.

 Las diferencias que pueden verse al usar en fase estacionaria silica gel o alúmina y la
fase móvil hexano o acetona son explicadas por las fuerzas de Van Der Waals
diferenciadas, es decir es un tipo de método de cromatografía por afinidad debido a
que ocurre por las pequeñas diferencias en la polaridad de la molécula en distintas
fases de la molécula generan estas diferencias.

 Las cromatografías son un grupo de técnicas de separación de componentes,

selectiva de moléculas.

 En la cromatografía de capa fina, la fase estacionaria (silica gel) es polar y el líquido

(eluyente) donde está inmerso la placa es apolar orgánico.

 Se concluye que, en la cromatografía de columna, las moléculas son separadas en

base a la afinidad que tienen con ciertos solventes orgánicas, de la fase estacionaria
o la fase móvil.
 La elección del eluyente en la cromatografía de capa fina depende del componente
que se va a separar pues, el eluyente (solvente) está influenciado en gran medida la
polaridad.
 Los pigmentos amarillos son indicadores de la presencia de xantofilas, verde –azul y
también de la presencia de clorofila a y verde olivo (presencia de clorofila b).
 La acetona permite el avance del pigmento verde, la clorofila tiene naturaleza polar,
con facilidad se absorbe a la alúmina (solido con puntos de ácido de Lewis) es decir
atrae lo polar. El b-caroteno avanza con la adición de hexano.
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Bibliografía

 http://www.ub.edu/oblq/oblq%20castellano/cromatografia_tipus.html
 https://www.monografias.com/trabajos35/alumina/alumina.shtml#propied%20http://
www.pucpr.edu/marc/facultad/santos/Lizette%20Santos%20%20M%-
C3%%20A9todos%20de%20%20%20Biotecnolog%C3%ADa/Cromatograf%C3%ADa.pdf
%20http://es.scribd.com/doc/11642417/Cromatografia-Fundamentos-y-
Aplicaciones%20http://www.scielo.org.ve/scielo.php?pid=S0002-
192X2003000400006&script=sci%20arttext&tlng=pt

Anexos

Pigmentos carotenoides identificados y purificados en aceite de palma mediante el

uso de cromatografía de capa fina

El aceite de palma (Elaeis guineensis) crudo es un alimento graso rico en carotenoides

principalmente está compuesta por el b-caroteno y a-caroteno, los cuales la hacen
poseedora de un gran valor nutricional, ya que estos pigmentos son precursores de la
vitamina A y están directamente relacionados con sus propiedades protectoras contra
el daño de los radicales libres. Sin embargo, este aceite es refinado para su posterior
consumo trayendo como consecuencia una pérdida de sus propiedades. En este trabajo
se aplicaron técnicas para extraer, purificar, identificar y cuantificar algunos pigmentos
y carotenoides presentes en el aceite de palma crudo, pre-tratado y refinado; con la
finalidad de realizar un posterior estudio de los factores más preponderantes en el
proceso de refinación, que puedan ser optimizados para la obtención de un aceite con
mayor valor nutricional.
Las técnicas cromatográficas que se emplearon fueron la cromatografía en capa fina
(TLC) y cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) en fase reversa, esta última
también es muy usada en la resolución de enantiomeros (separación de enantiomeros).
Previa saponificación con KOH metanólico, del aceite disuelto en acetona.
Fueron identificados los pigmentos: b -caroteno y sus isómeros, a-caroteno, luteína y
licopeno en el aceite crudo pre-tratado. En el caso del aceite refinado no se observó la
presencia de ningún pigmento carotenoide.
Fueron cuantificados el ß -caroteno y sus isómeros: 1 158,198 mg kg-1; luteína y sus
¡someros: 42,819 mg kg-1; y licopeno: 14,179 mg kg-1.