REPLICACIÓN DEL ADN:

ELEMENTOS Y
MECANISMO.
Prof. CRUZ BRICEÑO M.
DEPARTAMENTO DE MORFOLOGÍA HUMANA
ESCUELA MEDICINA - FACULTAD DE MEDICINA
UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO
¿Qué es la Replicación

Bacteria: 1000 nt /seg

Humano: 100 nt/seg

La replicación de ADN es el proceso por el cual se copia cada

cadena del DNA para dar origen a una nueva cadena de DNA
complementario, este proceso involucra la acción altamente
coordinada de muchas proteínas que participan en etapas de inicio,
elongación y termino.
 ELEMENTOS DE LA REPLICACIÓN
REQUERIMIENTOS PROTEICOS
• DNA Polimerasas (DNA Pol) PCNA
• Proteínas SSB (Single- Strand binding). DNA Helicasa.
• DNA Ligasa RNA primasa.
• Pirofosfatasa Topoisomerasas
• Factor de Replicación C = RFC

REQUERIMIENTOS NO PROTEICOS
• DNA molde o “template”
• Cebadores
• Desoxirribonucleótidos trifosfato:
(dATP, dCTP, dGTP, dTTP)
• Mg++
a) Polimerasas: Polimeriza nucleótidos al extremo 3’
Dirección de polimerización es 53’

1. Unión del nucleótido entrante- cadena patrón

2. Reconocimiento por la DNA polimerasa
3. Hidrólisis
4. Cambio de configuración (cierre de dedos)- adición de nucleótido
5. Liberación del pirofosfato
6. Relajación de los dedos de Polimerasa
7. Translocación del DNA en un nucleótido
8. Centro activo de la Polimerasa preparado para recibir otro dNT
POLIMERASA
Sub unidad catalítica: p125: Polimerasa /Exonucleasa
Subunidad estructural: p50 + otras

Actúa con elevada fidelidad: efecto corrector:3’-5’

Centro catalítico 1 de 109 NT errado
para Reacciones
de polimerización
C
A

Centro catalítico
para Reacciones
exonucleolíticas

• Separación de las cadenas

• Cambio conformacional de la pol en centro catalítico
corrector
• Eliminación del nucleótido errado añadido
 ¿Por qué no hay una enzima que
polimerice en la dirección 3´-> 5?

No funcionaría la
corrección de errores por
falta de un trifosfato que
suministre la energía de
enlace covalente azúcar-
fosfato

6
7
 8

P P
P P
P P
P P
OH
P P P
OH
P P + H2O
P P P P
P P
3’
P P
P P P P
P P P P

5’
OH OH
9
 OH
OH

P
3’ 5’

P P + H2O
P

P
P

P
P

OH
OH

10
11
 12

P P
P P
P P
P P
OH
P P P
OH
P P + H2O
P P P P
P P
3’
P P
P P P P
P P P P

5’
OH OH
 OH
OH

P
3’ 5’

13
 DNA POLIMERASAS
HUMANAS
    
Localización núcleo núcleo mitocondrias núcleo núcleo
Duplicación si no si si no
Reparación no si no no si
Funciones asociadas
Polimerasa 5´ 3´ si si si si si
Exonucleasa 3´ 5´ no no si si si
Primasa si no no no no
Respuesta a PCNA no no no si no
Síntesis de cadenas tardía reparación ambas líder-tardía repara
b) COMPLEJO ADN POLIMERASA / DNA
PRIMASA

RNAasa H1
FEN1
4 subunidades:
p180= polimerasa
p48= primasa
Ligasa
p58= estabiliza primasa
p70= ensamblado primosoma
c) RNAasa H1 y FEN1
RNAasa H1= remueve NT de cebadores de fragmento
de Okasaky
FEN1= remueve el ultimo NT cebador de ARN de
extremo 5’ del fragmento Okasaky

d) ADN ligasas:
 PROTEÍNA DE UNIÓN A DNA DE CADENA
SENCILLA SSB (single strand DNA binding)
PROTEÍNA RPA:

SSB (single strand DNA binding)

Proteínas desestabilizadoras de la
hélice
Unión cooperativa
 e) DNA HELICASA

-Hidroliza el ATP  Realiza trabajo

mecánico

- Desenrolla la hélice a velocidad de

1000pb/seg

- Helicasa 5’3’
3’5’
 f) ABRAZADERA DESLIZANTE (PCNA) Y
FACTOR DE REPLICACION (RFC)
PCNA: mantiene la unión DNA pol - DNA

Cargador de abrazadera
- 5 subunidades: P140, P40, P38, P37, P36 PCNA RFC

- Se fija en el ADN cerca al cebador

- Al llegar al 3’cebadorhidrolisis de ATP y
liberación (bloquea su progreso)
(cadena retrasada permanece cerca)
 COMPLEJO PROTEICO DE REPLICACIÓN
REPLISOMA

15-30 nt
 g) TOPOISOMERASAS
TOPOISOMERASAS I
II

Nucleasa reversible
TOPOISOMERASA II
 ETAPAS DE LA REPLICACIÓN
A. INICIACIÓN:

¿Cuando ocurre?

¿En que etapa del

ciclo celular?

¿ Porque debe
replicar el ADN?
 a) ORIGEN DE LA REPLICACIÓN:

 Unidades de Replicación = 20-80 orígenes de replicación

Espaciados por 30000 -250000 nt
Generan horquillas de replicación  burbujas de replicación
Las Unidades de replicación se activan en diferentes
500-1000 nt/s tiempos
 ORIGEN DE REPLICACIÓN = SECUENCIA DE REPLICACIÓN
AUTÓNOMA (ARS)
ARS = autonomously replicating sequence
Levaduras : 200 pb
Secuencias de nucleótidos que:
-Atraen proteínas
Secuencia consenso -Ricos en A-T
autónoma: Numero
(A/T)TTTA(T/G)(A/G)TTT(A/T) - 400 en Levaduras
- 10000 en Humanos

Rico en AT

Sitio de unión para proteínas

que ayudan a atraer al ORC

ORC ó COR = Complejo de reconocimiento del origen

6 Proteínas
COR-2 y COR-6 ya han sido secuenciadas
INICIO EN BACTERIAS

DnaA

bloquea la unión de
Seq A proteínas iniciadoras
DnaB

DnaC

DnaG
 INICIO EN EUCARIOTAS En ARS, ORC persiste durante
todo el ciclo celular
Unión
proteínas de inicio
Cargadoras + helicasa
de la helicasas
MCM= proteína de
mantenimiento del
minicromosoma
complejo pre-replicativo

La Cdk induce la disociación de

proteinas cargadoras de Helicasa

Helicasa inducen la separación

de la cadenas en sentidos
opuestos formando la burbuja de
replicación

Las proteínas de unión a la

cadena sencilla SSB / RAP
mantiene las hebras separadas

DNA pol -primasa sintetiza

los RNA cebadores para la hebra
conductora
INICIO

- Activación de origen de

replicación

- Desenrollamiento del DNA

- Ensamblaje del replisoma

- Establecimiento de burbuja de

replicación

- Síntesis de cebadores
Modelo de horquilla de replicación en
mamíferos.

1. Usa dos ADNpol cadena retrasada.

2. ADN primasa-ADNpol ; sintetiza ARN + ADN y
cede ADN pol 
BAJA PROGRESIVIDADCAMBIO DE POLIMERASA
B. ELONGACION
1) Adición de nucleótidos

2. Enlaces H
3. Ataque nucleofilico

4. Hidrólisis pirofosfato
Ciclos de carga y descarga de la DNA pol y de
proteína abrazadera sobre cadena retrasada
 2) Eliminación de cebadores Unión de los
fragmentos de Okasaky

Las nucleasas FEN + RNAsa H1 eliminan el ARN cebador del fragmento N° 1

RNAsa degrada al cebador hasta dejar un nucleótido
FEN endonucleasa Flap 1, elimina el ultimo nucleótido

La DNA pol  o DNA pol  elongan el extremo 3’ del fragmento N°2,
rellenando el lugar que dejo el cebador, hasta alcanzar el extremo 5’ del
fragmento N°1
3) La DNA ligasa
Sella la mella resultante, une el 5’ del fragmento N°1 con el 3’ del N°2
 HORQUILLA DE REPLICACIÓN Y NUCLEOSOMAS
Factores ensambladores de
¿Qué pasa con los nucleosomas
cromatina= proteínas que asocian a
durante la replicación?
horquilla y empaquetan ADN

Son dirigidas hacia el DNA

mediante la abrazadera
deslizante o PCNA
 C. TERMINACION

Transcriptasa inversa
Proteínas +RNA
 Levadura: TTGGGG
 Humano : TTAGGG

ACCION DE TELOMERASA
Unión de la telomerasa y sintesis por la telomerasa
Trasnlocación
Secuencia de elongaciones y translocaciones
SINTESIS POR DNA POLIMERASA a
Síntesis de cebador y cadena complementaria por DNA polimerasa
ACCIÓN DE LA LIGASA
 Los lazos T al final de los cromosomas en
mamíferos

ADN telomérico
recién sintetizado

Proteínas
especiales lazo t

Proteínas sir
CARACTERISTICAS DE REPLICACION:
A) Semiconservativa:
B) Dirección de crecimiento.

Ocurre en dirección 5´---- 3´,

La nueva cadena se extiende por
adición de nucleótidos, (utilizando
como sustratos activados los
desoxirribonucleótidos
5´trifosfatos (dNTP)) al extremo
3´OH en dependencia del
nucleótido correspondiente según
el apareamiento de bases con la
cadena molde .
C) Bidireccionalidad
D) Asimétrica
E) Asincrónica:
Eucromatina:
1oMitad fase S . Bandas C-G:  Genes expresión constitutiva

2oMitad fase S Bandas A-T: Genes tejido-específico

Heterocromatina:
E) Multifocal
La replicación del material genético es esencial a la vida.

Originar moléculas de ADN hijas cada una de ellas posee la

misma información biológica(fenotipo-genotipo) otorgada
por el ADN progenitor para transmitir toda la información
biológica desde los progenitores hacia la descendencia.

Permite que la información genética se transmita de una

célula madre a las células hijas. que permite que en la
división celular, la célula que nace reciba la misma
información que la otra y pueda funcionar correctamente.

 Asegura la continuidad de la información genética durante

el crecimiento y la reparación de tejidos

Hace posible la continuidad de la vida

Fuente
-Alberts. Biología molecular de la Célula(cap 5)
- Guizar Genética clínica (Cap 2 pag 24-32)