Toxicidad por inhalación de bisfenol A y su efecto sobre el ciclo

estral, Aprendizaje espacial y memoria en ratas después de la exposición

de todo el cuerpo
El bisfenol A (BPA) es un monómero utilizado en una reacción de polimerización en
la producción de policarbonato plástica. Se ha utilizado en muchos productos de
consumo, incluidos los plásticos, cloruro de polivinilo, envasado de alimentos,
selladores dentales y recibos térmicos. Sin embargo, hay poca información
disponible sobre la inhalación toxicidad de BPA. Por lo tanto, el objetivo de este
estudio fue determinar su toxicidad por inhalación y los efectos en el ciclo estral,
aprendizaje espacial y memoria. Las ratas Sprague-Dawley fueron expuestas a 0,
10, 30 y 90 mg / m3 BPA, 6 h / día, 5 días / semana durante 8 semanas mediante
inhalación de todo el cuerpo. Mortalidad, signos clínicos, peso corporal,
hematología, química sérica, parámetros del ciclo estral, rendimiento en la prueba
del laberinto acuático de Morris, y peso de órganos, así como los hallazgos
macroscópicos e histopatológicos, se compararon entre el control y Grupos de
exposición de BPA. Se observaron cambios estadísticamente significativos en la
química y el órgano séricos pesos después de la exposición al BPA. Sin embargo,
no hubo un efecto tóxico relacionado con el BPA en el peso corporal, la comida
consumo, hematología, química sérica, pesos de órganos, ciclo estral, rendimiento
en el agua de Morris prueba de laberinto, o lesiones macroscópicas o
histopatológicas en cualquier rata macho o hembra en los grupos de exposición a
BPA. En conclusión, los resultados de este estudio sugirieron que el nivel de efectos
adversos no observables (NOAEL) para BPA en ratas es superior a 90 mg / m3/ 6
h / día, 5 días / semana después de una exposición de 8 semanas. Además, BPA
no afectan el ciclo estral, el aprendizaje espacial o la memoria en ratas.

INRODCCION

Bisfenol A [BPA; (CH3) 2C (C6H4OH) 2, CAS No. 80-05- 07], copos de color
blanco a marrón o un polvo con un olor suave, es un monómero utilizado en una
reacción de polimerización en la producción de plásticos de policarbonato (1).
BPA es manufacturado a través de la combinación y la condensación de acetona
con fenol a altas temperaturas y pH bajo, seguido de la purificación del producto
(2). BPA es uno de los mayores volúmenes Productos químicos fabricados en
todo el mundo por lo tanto, su global la producción alcanzó 4,6 millones de
toneladas en 2012 (3). Ha sido utilizado en muchos productos de consumo,
incluidos los plásticos, polivinilo cloruro, envases de alimentos, selladores
dentales y térmicos recibos, y los humanos generalmente están expuestos a BPA
a través de inhalación, dieta y contacto dérmico (4). El BPA es ampliamente
conocido como un disruptor endocrino químico (EDC), es decir, una sustancia
química que imita, altera y bloquea actividad hormonal endógena Cambios en los
niveles hormonales, acciones, o receptores a través de la exposición a EDC no
perturban solo la estructura y función del cerebro pero también la regulación de
hormonas por el cerebro (1). Hay mucha evidencia mostrando que el BPA imita
los estrógenos y es similar a otros disruptores estrogénicos. También puede
unirse al androgénico receptor y disocia la acción de los andrógenos (5,6).
Numerosos estudios han informado cambios en la reproducción hormonas
 causadas por la exposición al BPA en experimentos (7-9) Efectos de la
exposición al BPA en el oocito, desarrollando el tracto reproductivo y la
maduración sexual se han observado en ratas y ratones hembras durante el
período perinatal (10-12). En estudios en humanos, la exposición al BPA se ha
relacionado con la dependencia hormonal tumores como cáncer de mama y
próstata, trastornos endocrinos como pubertad precoz y metabolismo trastornos
como la obesidad y el síndrome de ovario poliquístico (13) Además, muchos
estudios han informado que
La exposición al BPA afectó el desarrollo y el comportamiento del cerebro durante
el período gestacional. BPA perinatal o neonatal la exposición demostró influir en
la diferenciación sexual del cerebro (14,15) y el comportamiento neuronal, lo que
lleva a cognitiva déficits, así como el deterioro del aprendizaje y la memoria (16-
20). Además, el BPA podría afectar los comportamientos sociales juveniles en
ratones (21,22). Aunque ha habido muchos estudios que caracterizan el Efectos
del BPA sobre la actividad estrogénica y el cerebro, sus efectos raramente se
han estudiado en animales de laboratorio utilizando el ruta de inhalación Por lo
tanto, este estudio se llevó a cabo para caracterizar la posible toxicidad por
inhalación de BPA la exposición de todo el cuerpo de las ratas Sprague-Dawley
(SD) y su efectos en el ciclo estral, el aprendizaje espacial y la memoria.

MATERIALES Y MÉTODOS
Mantenimiento animal Siete semanas de edad, libre de patógenos específicos Se
compraron ratas SD de ambos sexos de Bio Genomics Inc. (Gapyeong, Corea) y se
aclimataron para 1semana. La habitación se mantuvo a una temperatura de 22 ±
3oC, humedad relativa de 50 ± 20%, 12: 12 h luz: oscuro ciclo y ventilación de aire
fresco (10 ~ 15 cambios por hora). Los las ratas se alojaron individualmente en
jaulas de malla de alambre de acero inoxidable (ancho 750 mm × largo 220 mm ×
alto 180 mm) y tenía libre acceso a una dieta comercial para roedores (PMI Nutrition
International, Inc., St. Louis, MO, EE. UU.) Y el grifo filtrado agua. El estudio se
realizó en la Seguridad Laboral y el Instituto de Investigación de Salud, y fue
aprobado por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales (IACUC-
0101).
Prueba química y sistema de exposición. BPA (lote no. 033107) se obtuvo de
Samchun Chemical (Pyeongtaek, Corea). Una cámara de exposición de acero
inoxidable para todo el cuerpo (SIS-20RG, Shibata, Niigata, Japón), incluido un
polvo generador (DM-800 y DF-3, Shibata), se utilizó para exponer ratas a BPA a
una concentración de 0, 10, 30 o 90 mg / m3 para 6 h / día, 5 días / semana durante
8 semanas.Procedimientos de exposición por inhalación se llevaron a cabo de 10:00
a 16:00. El experimento el diseño se basó en el horario de trabajo de rutina de
empleados y la ruta de exposición principal para la sustancia de prueba.

Condiciones en cámaras de inhalación. La temperatura, humedad relativa, presión

y ventilación de aire en las cámaras se registraron usando un controlador ambiental
(ICS-20RG, Shibata). Una muestra personal (Sensidyne, St. Petersburg,FL, EE.
UU.) Se utilizó para muestrear el BPA a un caudal de 2 L / min a través de la cámara
de exposición. Las partículas fueron recolectados del centro de la cámara y
capturados en filtros de membrana de éster de celulosa mixta (tamaño de poro: 4.5
μm, diámetro: 37 mm; Millipore, Billerica, MA, EE. UU.). los distribución de tamaños
de partícula se determinó utilizando un Muestra de Anderson (AN-200, Sibata,
Tokio, Japón) en un flujo tasa de 28.3 L / min por 20 min
Grupos experimentales. Un total de 80 ratas (40 machos y 40 mujeres) fueron
asignados aleatoriamente a los siguientes cuatro grupos (10 animales por sexo por
grupo): control (0 mg / m3 ), dosis baja (10 mg / m3)), dosis media (30 mg / m3 ), y
alta dosis (90 mg / m3 ) Todas las ratas fueron sacrificadas después de 8 emanas
de exposición. Las concentraciones de BPA se seleccionaron usando un factor de
escala de 3 porque un estudio previo ha informado disminuyó que disminuyó el peso
corporal o disminuyó el hígado y se observaron pesos de órganos renales en
concentraciones de BPA entre 50 y 150 mg / m3 (23)

Signos clínicos y peso corporal. Todos los animales eran examinado una vez al día
para la mortalidad y los signos clínicos, y pesado individualmente inmediatamente
antes de la inhalación exposición en el día 1 y una vez por semana a partir de
entonces.

Hematología. Cinco ratas macho y cinco hembras en cada una grupo fueron
ayunados durante la noche antes de la necropsia y la sangre colección. Se tomaron
muestras de sangre del abdomen aorta usando una jeringa con una aguja de calibre
21 bajo isoflurano anestesia (Ilsung Pharm, Seúl, Corea) y recolectó en vacutainers
que contienen EDTA-3K (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ, EE. UU.). Las
muestras fueron analizadas dentro de los 20 min de la recolección utilizando una
hematología automatizada analizador (F-820, Sysmex, Kobe, Japón) Lo siguiente
parámetros se determinaron en este estudio: eritrocito total recuentos,
concentración de hemoglobina, hematocrito, célula media volumen, hemoglobina
celular media, concentración media de hemoglobina celular, recuento de plaquetas
y recuentos totales de leucocitos

Bioquímica sérica. Las muestras de sangre se centrifugaron a 3.000 rpm durante 10

minutos dentro de 1 hora después de la recolección. los los sueros se almacenaron
a -80 o C hasta el análisis. El siguiente suero los parámetros químicos fueron
evaluados usando un sistema automatizado analizador (TBA-20FR, Toshiba
Medical Systems, Tochigi, Japón): proteínas totales, albúmina, nitrógeno ureico en
sangre, creatinina, bilirrubina total, alanina aminotransferasa, aspartato
aminotransferasa, fosfatasa alcalina, glucosa y colesterol total.

Necropsia, peso del órgano y evaluaciones histopatológicas. Exámenes groseros

de los órganos en el craneal, torácico, y se realizaron cavidades abdominales de
las ratas. los pesos absolutos y relativos (órgano a cuerpo) del cerebro, timo,
pulmón, corazón, hígado, bazo, riñones, glándulas suprarrenales, se midieron los
testículos y los ovarios. Los siguientes pañuelos se eliminaron de cada animal en
la necropsia: el hígado, el riñón, glándulas suprarrenales, corazón, pulmones,
cerebro, cerebelo, hipófisis glándula, bazo, vesículas seminales, próstata,
testículos, epidídimos, ovarios, útero, vagina, lengua, tráquea, esófago, timo,
glándula tiroides, estómago, vejiga urinaria, pequeño / grande intestino, ojos /
 glándulas de Harder, músculos esqueléticos, ciático Toxicidad por inhalación de
todo el cuerpo de Bisphenol A 167 nervio, páncreas, aorta, ganglio linfático
mesentérico, fémur, laringe, y la cavidad nasal. La cavidad nasal fue seccionada
a las tres niveles: posterior a los incisivos superiores; papila incisiva; y primeros
dientes molares. Los ojos se fijaron en la solución de Davidson, y los testículos
en la solución de Bouin. Otros órganos fueron preservados en formalina
tamponada neutra al 10%. Todos los órganos eran incrustado en parafina,
seccionado a 3 ~ 4 μm, teñido con hematoxilina y eosina, y se examinaron
microscópicamente con campos de baja y alta potencia

Citología vaginal Cinco ratas hembras en cada grupo fueron evaluados por los
cambios en sus ciclos de celo durante 9 días como previamente descrito (24). Se
recogieron frotis vaginales todas las tardes, teñidas con una solución de Giemsa,
y observadas microscópicamente. El ciclo estral, reflejado por el flujo vaginal
frotis, se caracterizó como proestro, estro, metaestro o diestro según las
características de cada tipo de célula.
Prueba de laberinto de agua de Morris. Cinco machos y cinco ratas hembras del
control y 90 mg / m3 grupos fueron evaluados
su capacidad de aprendizaje espacial y memoria durante 3 días como anteriormente
descrito (25). Una piscina circular (150 cm de diámetro y 50 cm de altura) se llenó
a una profundidad de 30 cm con agua que se mantuvo a 25 ± 2º C y teñido con un
tinte de color blanco (Témpera; Suministros de bellas artes, Auckland, Nueva
Zelanda). Cuatro puntos igualmente espaciados fueron designado como el este, sur,
oeste y norte alrededor del borde de la piscina. Una plataforma de escape se
estableció 1 cm por debajo de la superficie del agua. Los caminos de los ratones se
registraron usando un Sistema de seguimiento de imágenes HVS (HVS Image,
Hampton, Reino Unido).Cada sujeto realizó la tarea tres veces al día en intervalos
de 1 minuto, y las pruebas comenzaron colocando una rata en el agua para que el
animal mire hacia la pared que rodea la piscina. Se permitió que las ratas nadaran
a la plataforma, y latencia de escape fue registrada
Análisis estadístico. Diferencias entre los grupos en varios parámetros fueron
determinados usando el SPSS (versión 19.0, IBM, Chicago, IL, EE. UU.) O
SigmaPlot (versión 13.0, SYSTAT, San Jose, CA, EE. UU.) Software. La
homogeneidad de varianza fue analizado por la prueba de Levene, seguido
mediante análisis de varianza de una vía para muestras con varianza homogénea
o la prueba de Kruskal-Wallis para muestras con varianza heterogénea Duncan o
Dunnett prueba múltiple fue utilizada para comparar el resultado de cada
grupo experimental con eso para el grupo de control si el primer resultado fue
estadísticamente significativo

RESULTADOS
Caracterización de partículas de BPA en aerosoles y partículas tamaño. Las
concentraciones promedio de BPA durante el el estudio fue 10.51 ± 1.59 mg / m3
, 30.52 ± 4.28 mg / m3 y 88.3 ± 8.64 mg / m3 para la concentración baja, media
y alta
grupos de trabajo, respectivamente (Tabla 1). Los tamaños de partículas de BPA
 mayormente varió de 2.10 a 7.0 μm, lo que representó para el 75.06% de la
distribución total (Tabla 2)
Signos clínicos y peso corporal. Sin muertes ni adversidades Se observaron signos
clínicos en cualquier rata expuesta a cualquier concentración de BPA. Los pesos
corporales no fueron significativamente cambio en cualquier rata macho o hembra
expuesta a cualquier concentración de BPA en comparación con el grupo control
(datos no mostrados)
Hematología. Sin hematología estadísticamente significativa se observaron
cambios en cualquiera de los grupos expuestos a BPA en comparación con el grupo
control (datos no mostrados).
Bioquímica sérica. El colesterol total aumentó significativamente (P <0.05) en ratas
hembras expuestas a 10 y 90 mg /m3 BPA comparado con aquellos en el grupo de
control (Tabla 3, 4).No hubo cambios en el otro suero bioquímico parámetros.
Peso del órgano El peso relativo del órgano de la suprarrenal glándula aumentó
significativamente (P <0.05) en la rata macho expuesto a 90 mg / m3 BPA
comparado con aquellos en el control grupo (Tabla 5, 6). No hubo cambio en el peso
de los otros órganos
Evaluaciones brutas e histopatológicas. Sin gross la lesión se observó en cualquier
grupo de BPA. Sin sustancia problema se observó un cambio histopatológico
relacionado en cualquier órgano del grupo expuesto BPA. Todas las otras lesiones
fueron determinadas ser cambios espontáneos que fueron similares en el control y
animales expuestos, y fueron cambios accidentales no acompañado de cualquier
relación dosis-respuesta
Citología vaginal No se observó ningún cambio significativo en cualquiera de los
grupos de BPA en comparación con el grupo de control
Prueba de laberinto de agua de Morris. Ningún cambio significativo fue observado
en los 90 mg / m3 Grupo BPA comparado con el control grupo (datos no mostrados)
.
DISCUSIÓN
Este estudio se realizó para evaluar la potencial inhalación toxicidad del BPA y su
efecto sobre la actividad de los estrógenos aprendizaje espacial y memoria
exponiendo repetidamente SD ratas durante 8 semanas para BPA en
concentraciones de 0, 10, 30 o 90 mg / m3 en el aire. Aunque encontramos algunos
estadísticamente diferencias significativas en la química y el órgano del suero pesos
entre los animales expuestos al BPA y los de el grupo de control, sin reacciones
adversas patológicas o fisiológicas efecto se observó en cualquier prueba. No se
observó ningún signo clínicamente relevante en ninguna de las ratas expuesto a
cualquier concentración de BPA. Informes anteriores tienen indicó que la exposición
al BPA perinatal o neonatal causaba reducción del peso al nacer, ralentizó el
crecimiento, disminuyó la tasa de supervivencia, retrasó la pubertad en la
descendencia (26- 29), causó síntomas similares a la diabetes gestacional en
embarazadas animales (30), afectaron el comportamiento neurológico y causaron
el desarrollo de cáncer de próstata y de mama en animales adultos (31-33) El
momento de la exposición al BPA durante la vida ciclo puede haber contribuido a
las diferencias entre el resultados previos y nuestros hallazgos. Se observó un
aumento del colesterol total en el ratas hembras expuestas a 10 y 90 mg / m3 BPA
en comparación con eso en el grupo de control. Este cambio no se consideró efecto
adverso porque no se observó en los hombres y no se asoció con alteraciones
morfológicas en el hígado o glándula tiroides (34)

Hubo aumentos estadísticamente significativos en el relativo peso del órgano de las

glándulas suprarrenales en los hombres de los 90 mg / m3 Grupo BPA en
comparación con los del control grupo. Sin embargo, estos cambios no fueron
considerados como efectos adversos porque no fueron acompañados por un
aumento en el peso absoluto del órgano de las glándulas suprarrenales y el peso
de órgano absoluto y relativo de la suprarrenal glándulas en las hembras desde 90
mg / m3 Grupo BPA, ni se asociaron con alteraciones histopatológicas en las
glándulas suprarrenales (34). Mientras tanto, una disminución en el hígado y el peso
del riñón, acompañado de una dosis dependiente disminución del peso corporal, se
observó en ratas y ratones que estuvieron expuestos a 150 mg / m3 BPA por 13
semanas; sin embargo, no se revelaron alteraciones histopatológicas (23). La
concentración más alta o el período de exposición más largo pueden han contribuido
a las diferencias entre los anteriores resultados y nuestros hallazgos

No se observó ningún cambio significativo en el ciclo estral en cualquiera de los

grupos de BPA en comparación con el grupo de control. Mientras tanto, la inyección
subcutánea prepuberal temprana de BPA a las hembras en el día postnatal 8
aceleró el inicio de pubertad, lo que resulta en una apertura temprana de la vagina
en BPA grupos de tratamiento y disminución de los parámetros reproductivos,
incluyendo el ciclo estral y los pesos de los ovarios (35). Es pensó que el BPA tiene
efectos más fuertes en los órganos reproductivos de los bebés que en los adultos
porque el desarrollo de órganos reproductivos es más susceptible a estrogénicos
compuestos durante el período de diferenciación sexual de el cerebro a la edad
infantil (36). En la prueba del laberinto acuático de Morris, no hubo cambios
significativos observado en los 90 mg / m3 Grupo BPA comparado con el control
grupo. Sin embargo, en otro estudio, el escape promedio la longitud de ruta se
extendió en los ratones machos ICR expuestos oralmente a BPA (40 μg / kg / día)
durante 8 semanas, mientras que no es significativo efecto se observó en las
mujeres (37). Diferencias en las especies o las rutas de exposición pueden explicar
la diferencia entre estos resultados y los obtenidos en nuestro estudio. En el otro
mano, la exposición perinatal al BPA resultó en diferencias de sexo en aprendizaje
y memoria porque BPA actúa como un antagonista de el receptor de andrógenos
en la corteza prefrontal durante el período perinatal, inhibición de la capacidad
cognitiva (38-43)

En conclusión, una inhalación repetida de cuerpo entero de 8 semanas la exposición

de ratas a tres concentraciones de BPA no provocar cualquier efecto tóxico en
cualquier prueba. Por lo tanto, el no observable nivel de efecto adverso (NOAEL) de
BPA para ratas se consideró estar por encima de 90 mg / m3 ,5 días / semana
durante 8 semanas. Además, el BPA no afectó el ciclo estral o espacial aprendizaje
y memoria en ratas. El presente estudio proporciona información útil sobre la falta
de toxicidad de la inhalación BPA.