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TABLA DE CONTENIDO
No. de pág.
1. OBJETIVO Y ALCANCE 1
2. GLOSARIO 1
3.1. GENERALES 2
4. CARACTERISTICAS 4
5. INSUMOS 5
6. PROCEDIMIENTO – OPERACIÓN 6
6.3. CÁLCULOS 10
7. IDENTIFICACIÓN DE CAMBIOS 10
INSTRUCTIVO Pág.
DETERMINACIÓN DE LA DIGESTIÓN ÁCIDA EN
MATRICES DE SUELO Y TEJIDO VEGETAL VIA Cód.
MICROODAS
GRUPO INTERNO DE TRABAJO LABORATORIO NACIONAL DE Fecha
SUELOS
1. OBJETIVO Y ALCANCE
Definir los pasos a seguir en la determinación para la digestión de elementos totales en muestras de
suelos y tejido vegetal, vía microondas y cuantificación mediante espectrofotometría de absorción
atómica y/o espectrofotometría en el rango visible, así como los reactivos, equipos y materiales que
se deben utilizar y los controles de calidad involucrados en las diferentes etapas de la determinación
analítica.
El presente instructivo aplica para los servidores públicos del Grupo Interno de Trabajo (GIT)
Laboratorio Nacional de Suelos, de la Subdirección de Agrología del Instituto Geográfico Agustín
2. GLOSARIO
Blanco de proceso Muestra que no contiene el analito a cuantificar; se obtiene al adicionar los
mismos reactivos, someter a los mismos procedimientos de extracción y
cuantificación de la muestra a investigar. Su finalidad es la de cuantificar las
posibles contaminaciones que pueden ser generadas por los procesos a los
que se somete la muestra.
Blanco de reactivo Solución de calibración preparada con la misma matriz de la muestra, que no
contiene el analito a cuantificar. Se utiliza en la construcción de la curva de
calibración al momento de fijar el punto cero de la curva.
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Muestra control Muestra para Control Analítico del Laboratorio de Suelos (CALS), desarrollada
(CALS) en el LNS mediante el análisis de sus propiedades, cuyos valores son
conocidos previamente por los analistas y el responsable del área de trabajo.
Permiten controlar la precisión de la determinación analítica y se utilizan para
rechazar o aceptar tandas de análisis.
Muestra Duplicado Muestra que forma parte de una tanda de análisis y que se coloca dos veces,
dentro de la frecuencia de análisis, para verificar la reproducibilidad interna de
los resultados de una determinación analítica.
Solución control Solución preparada con idénticas condiciones a la solución de calibración, con
concentración y absorbancia conocidas; debido a que su concentración es de
rango intermedio, se utiliza para verificar la precisión y exactitud de la curva de
calibración.
Suelo Sistema natural desarrollado a partir de una mezcla de minerales y restos
orgánicos bajo la influencia del clima y del medio biológico; se diferencia en
horizontes y suministra, en parte, los nutrimentos y el sostén que necesitan las
plantas, al contener cantidades apropiadas de aire y agua.
Tejido Vegetal Se denomina tejido vegetal a la agrupación de células que ocurre en los
vegetales más desarrollados, con el fin de cumplir diferentes funciones.
Existen tejidos formados por células meristemáticas, que son pequeñas, con
un núcleo muy grande, y las hallamos en forma única en los embriones.
3.1.GENERALES
° Todos los funcionarios y contratistas que intervienen en el proceso deben cumplir con las
precauciones y medidas de seguridad descritas en el instructivo vigente I40600-01 “Medidas de
seguridad en la ejecución de análisis”.
° Revisar que el material se encuentre perfectamente limpio y seco. (conforme el instructivo vigente
I40600-07 “Limpieza de áreas de trabajo y material de laboratorio”).
° Todo formato debe diligenciarse en esfero o tinta indeleble.
° Pesar y manipular la muestra utilizando guantes de nitrilo y respiradores para material particulado.
° Verificar mediante los registros que los controles de calidad se cumplan dentro del proceso.
° Corregir cada una de las muestras de suelos por porcentaje de humedad (pW) teniendo en cuenta
los datos consignados en el registro vigente F40601-48 Captura de datos – Humedad.
° Realizar la etapa de pesaje de la muestra en el cuarto de balanzas y la extracción se realiza en la
mesa designada para evitar la contaminación de las muestras
° Dejar la balanza limpia y en las condiciones que la encontró.
° La bolsa que contiene la muestra no debe ser extraída de la caja marcada, para evitar que la
muestra pierda su identidad.
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° Para las muestras en las que sea necesario realizar dilución, efectuar su cuantificación
instrumental al final de la tanda.
° Verificar la calibración de la micropipeta y la vigencia de la curva de calibración.
° Verificar la lectura del blanco de reactivos a intervalos regulares con el fin de controlar la escala de
lectura del espectrofotómetro.
° Verificar mediante los registros que los controles de calidad se cumplen dentro del procedimiento.
° Utilizar el valor del blanco de proceso para corregir los resultados de las muestras de la tanda.
° Realizar periódicamente las copias de respaldo de la información relacionado con el proceso
conforme a los lineamientos dados por la oficina de Informática y telecomunicaciones.
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° Los análisis se deben efectuar bajo condiciones de aireación, iluminación, servicios de agua
potable y desionizada, adecuados para la correcta ejecución del ensayo.
3.3.PUNTOS DE CONTROL
4. CARACTERISTICAS
El presente instructivo está basado en el manual de métodos analíticos del Laboratorio de Suelos.
Determinación de aluminio, hierro y silicio. Edición 2006.
El análisis vegetal es una herramienta sumamente eficiente para evaluar la nutrición del cultivo ya que
contenido de nutrientes en planta es un valor que resulta de la interacción entre el cultivo, el ambiente
y el manejo.
Las utilidades del análisis vegetal pueden ser diversas tales como:
Así, utilizando el análisis de planta para realizar un seguimiento y registro en etapas tempranas del
ciclo de los cultivos, el agricultor puede determinar si se requiere o no de tratamientos correctivos de
fertilización. Por otra parte, puede ser muy provechoso para el caso de cultivos perennes como alfalfa
o en el planeamiento de los futuros cultivos anuales, determinando en etapas avanzadas del ciclo si
los niveles de fertilidad del suelo y los fertilizantes aplicados fueron suficientes para satisfacer los
requerimientos de los cultivos.
° Referencias:
INSTITUTO GEOGRAFICO AGUSTIN CODAZZI. 2006. Métodos analíticos del Laboratorio de
Suelos. Sexta edición. Bogotá, IGAC. Pág. 235. 237
Lachica, M., (1997), Métodos de digestión de material vegetal. Aplicación del Horno de
Microondas, Información Tecnológica, 4 (8), 367-368.
Silva, P. (2012), Digestión en Horno de Microondas para determinación de contenido de hierro
y zinc totales en alimentos. Tecnología en Marcha, 3 (25), 96-100.
Yash, P, KALRA DOUGLAS, G MAYNARD 1998, Microwaved digestion of plant tissue in an
open vessel.edit.pg 63-67.
ROJAS, Leyla; GONZÁLEZ Gloria; y otros. El análisis de suelos, plantas y aguas para riego.
ICA. Bogotá, Octubre de 1989.
MILLS, Harry A.; JONES J. B. Jr. Plant Analysis Handbook II. A Practical Sampling,
Preparation, Analysis and Interpretation Guide. Micro Macro Publishing Inc. USA. 1996.
5. INSUMOS
Equipos
° Balanza analítica de 0,0001g de precisión.
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° Estufa
° Micropipeta de 1 mL.
Materiales
° Suelo seco al aire y tamizado por 2 mm y/o muestra de tejido vegetal.
° Balón aforado de 50 mL.
° Bandeja.
° Espátula en acero inoxidable.
° Cápsula pesa sustancias.
Reactivos
6. PROCEDIMIENTO – OPERACIÓN
6.1.ETAPA DE DIGESTIÓN
Analista
1. Prepara los reactivos requeridos para el análisis según el Instructivo vigente I40600-06
Preparación y control de reactivos y soluciones para determinaciones analíticas.
2. Comprueba antes y durante el análisis, que el material a utilizar está perfectamente limpio seco y
organizado en orden ascendente. (Ver Instructivo vigente I40600-07 “Limpieza de áreas de trabajo
y material del Laboratorio”).
3. Comprueba la vigencia de calibración de la balanza (rótulo). Si la calibración está vigente, siga con
el paso 5; si no lo está sigue con el paso 4.
5. Ajusta la balanza a las condiciones normales de operación y anota la hora de uso u operación del
equipo y las condiciones (limpieza y tara) en que se encuentra en el formato vigente F40600-07
Control de operación, comprobación y mantenimiento rutinario de equipos.
6. Homogeniza previamente la muestra de suelo seco y tamizado por 2 mm y pesa 0.1 g de este o
0.5 g de muestra de tejido vegetal y los coloca en los coloca en los viales blancos del horno
microondas; anota en orden ascendente el código de la muestra en el formato vigente F40601-64
Captura de datos- Cuantificación por absorción o emisión atómica y/o en el formato vigente
F40601-50 Captura de datos - Cuantificación por espectrofotometría (rango visible).
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7. Incluya los elementos de control interno de acuerdo con las especificaciones del numeral 3.1 del
presente instructivo y anota los datos en el formato vigente F40601-64 Captura de datos-
Cuantificación por absorción o emisión atómica y/o en el formato vigente F40601-50 Captura de
datos - Cuantificación por espectrofotometría (rango visible).
8. Deja tarada o suspendida la balanza y registra la hora en el formato vigente F40600-07 Control de
operación, comprobación y mantenimiento rutinario de equipos.
10. Sobre las paredes del vial adiciona con micropipeta 4.0 ml de agua destilada para las muestras de
tejido vegetal o 2.0 ml para muestras de suelo.
11. Adiciona con micropipeta 2.0 ml de ácido nítrico concentrado para muestras de tejido vegetal o
1.5 ml para muestras de suelos.
12. Para muestras de tejido vegetal adiciona con micropipeta 2.5 ml de ácido fluorhídrico concentrado
y agita suavemente.
13. Coloca las tapas blancas, las tapas ámbar y las válvulas de seguridad a los vasos o viales y deja
en pre digestión a temperatura ambiente por 10 minutos.
15. Con la herramienta de ajuste (Torcómetro) y el adaptador , aprieta cada uno de los tornillos
16. Coloca el anillo de seguridad alrededor del rotor (verifica que quede bien ubicado).
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17. Con la herramienta de ajuste (Torcómetro), aprieta cada tuerca hasta oír el clip indicador (no
aplicar más fuerza).
25. Con la herramienta de ajuste del torcómetro afloja suavemente cada uno de los tornillos (Hasta
escuchar la salida de los gases),
26. Espera 5 minutos para retirar del rotor, el anillo de seguridad y los viales.
28. Destapa cada uno de los viales y lava la tapa cuidadosamente con agua destilada., dentro del
vaso o vial.
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29. Transfiere a un balón de 50 ml, cuantitativamente con agua destilada el producto de la digestión.
31. Dispone del residuo sólido para su eliminación (Ver Instructivo I40600-08 “Manejo de residuos
analíticos”).
6.2.ETAPA DE CUANTIFICACIÓN
Analista
32. Cuantifica por espectrofotometría en el rango visible y/o por espectrofotometría de absorción y
emisión atómica, los elementos químicos productos de la digestión.
33. Encienda el espectrofotómetro y ajusta las condiciones instrumentales de análisis, verifica que las
curvas de bajas y altas se encuentren vigentes, en caso de que la curva de calibración se haya
vencido la realiza nuevamente.
34. Prepara el método para la cuantificación del elemento a leer de acuerdo con las especificaciones
instrumentales del equipo. Ingrese los números de laboratorio de las muestras, de los blanco de
proceso y muestras control CALS.
35. Comprueba la vigencia de las soluciones control, si se encuentran vencidas las elimina (Ver
Instructivo I40600-08 “Manejo de residuos analíticos”) y las prepara nuevamente.
36. Realiza la lectura de la concentración de las soluciones control y verifica que se encuentren dentro
del rango de aceptación, si cumplen continúa con el paso 37; si no cumplen continúa con el paso 1
para las muestras y las soluciones control de acuerdo con el Instructivo vigente I40600-06
“Preparación y control de reactivos y soluciones para determinaciones analíticas”; registra los
valores en el formato vigente F40600-14 Carta control de análisis, diseñado para cada uno de
estos controles.
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37. Realiza la lectura de las muestras control (CALS) y los blancos de proceso y registra los valores
en el formato vigente F40601-64 Captura de datos - Cuantificación por absorción o emisión
atómica y/o en el formato vigente F40601-50 Captura de datos - Cuantificación por
espectrofotometría (rango visible).
38. Resta el valor promedio de los blancos de proceso en las lecturas de las muestras control y lo
registra en la columna lectura corregida del formato vigente F40601-64 Captura de datos-
Cuantificación por absorción o emisión atómica y/o en el formato vigente F40601-50 Captura de
datos - Cuantificación por espectrofotometría (rango visible).
39. Verifica si la lectura corregida de las muestras control (CALS) está dentro del rango de variación
admitido en el formato vigente F40600-16 Rangos de variación de lectura admitidos para los
procedimientos analíticos. Si lo está, siga con el paso 41; si no siga con el paso 40.
40. Cuando alguno de los valores de lectura de las muestras control no está(n) dentro del rango de
variación establecido, le comunica inmediatamente al coordinador técnico para aplicar medidas
correctivas, que cuando apliquen incluyen la realización de repeticiones a partir del paso 1.
41. Lea cada una de las muestras en las diluciones preestablecidas. Si la lectura de la concentración
se encuentra dentro del rango lineal superior de la curva de calibración y la absorbancia es
superior a 0,100, pase al paso 42. Si no se cumple, pase al paso 40.
42. Anota el valor de las diluciones y de las lecturas en el formato vigente F40601-64 Captura de
datos- Cuantificación por absorción o emisión atómica y/o en el formato vigente F40601-50
Captura de datos - Cuantificación por espectrofotometría (rango visible).
43. Apaga el equipo y anota la hora en el formato vigente F40600-07 de Control de operación,
comprobación y mantenimiento rutinario de equipos y disponga de los residuos generados en el
análisis para su eliminación (Ver Instructivo vigente I40600-08 de Manejo de residuos analíticos).
44. Documenta el valor de los resultados de las muestras control (CALS). Calcula y registra: promedio,
desviación estándar y coeficiente de variación del fósforo disponible en las cartas control.
45. Disponga los residuos producto de la cuantificación (Ver Instructivo I40600-08 “Manejo de residuos
analíticos”) y realiza prelavado del material.
46. Entrega los registros de datos y las cartas control al responsable técnico del área para evaluación
de cumplimiento de criterios de conformidad con lo descrito en el formato vigente F40601-63
Revisión y seguimiento de parámetros de control interno - análisis suelos y posterior verificación
de coherencia y correlación de resultados.
Responsable de Análisis
El coordinador técnico recibe los registros de datos y las cartas control y aplica lo establecido para la
revisión y aprobación de la calidad del dato analítico.
Si los datos analíticos de una o más muestras de la tanda no correlacionan con los resultados de otras
determinaciones analíticas o son dudosas, ordena al analista la repetición a partir del paso 1.
Coordinador de Laboratorio
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Revisa y aprueba los resultados y entrega los registros para digitación de acuerdo con las pautas
establecidas en el Manual de procedimiento vigente P40600-07 Análisis de muestras en el laboratorio
nacional de suelos.
6.3.CÁLCULOS
° Cuantifica en el extracto obtenido, los siguientes elementos: Ca, Mg, K, Fe, Cu, Mn, Zn, P, B, S.;
mediante espectrofotometría de absorción atómica y/o espectrofotometría en el rango visible.
7. IDENTIFICACIÓN DE CAMBIOS
VERSIÓN CAPITULO DESCRIPCIÓN FECHA
5 .