Vacunas para el virus de la diarrea

epidémica porcina y otros coronavirus

porcinos
RESUMEN

La reciente introducción del virus de la diarrea epidémica porcina (DEP) en el hato de cerdos de
América del Norte ha resaltado una vez más la necesidad de vacunas efectivas para los
coronavirus porcinos. Si bien las vacunas para el virus de la gastroenteritis transmisible (TGEV) han
estado disponibles para los productores de todo el mundo durante mucho tiempo, las vacunas
efectivas para DEP y deltacoronavirus fueron desarrolladas recientemente o aún están en
desarrollo. Aquí, revisamos las tecnologías de vacunas existentes para los coronavirus porcinos y
destacamos las tecnologías prometedoras que pueden ayudar a controlar estos virus importantes
en el futuro.

1. Coronavirus porcinos

Los coronavirus fueron descritos por primera vez a mediados de los 60s y subsecuentemente
aislados de un numero de especies incluyendo el hombre, ratones, porcinos y pollos. Estos virus
comparten una característica morfológica común, Estos virus comparten una característica
morfológica común, una franja de proyecciones en forma de maza, de 12-24 nm de largo,
alrededor de una partícula viral pleomórfica de 60-220 nm, que se asemeja a una corona solar
(Masters, 2013).

Los coronavirus infectan humanos y varias especies animales, causando enfermedades

respiratorias, gastrointestinales y neurológicas y también hepatitis. Entre los ejemplos destacados
se incluyen el virus del síndrome respiratorio agudo severo (SARS-CoV), el virus del síndrome
respiratorio del Oriente Medio (MERS-CoV) y el virus de la peritonitis infecciosa felina (FIPV), por
nombrar algunos.

Los coronavirus porcinos se pueden dividir en respiratorios (PRCoV) y coronavirus

enteropatógenos como el virus de la gastroenteritis transmisible (TGEV), el virus de la diarrea
epidémica porcina (DEP) y el deltacoronavirus porcino (PDCoV). Los últimos tienen características
epidemiológicas, clinicas y patológicas similares. La familia Coronaviridae se divide actualmente en
cuatro géneros: Alphacoronavirus, Betacoronavirus, Gammacoronavirus y Deltacoronavirus. TGEV
y DEP pertenecen al género Alphacoronavirus, mientras que PDCoV pertenece al género de
Deltacoronaviruses.

Los coronavirus son virus ARN envueltos, de cadena simple y de sentido positivo con el genoma de
ARN más largo hasta la fecha con aproximadamente 30 kb. El ARN genómico incluye regiones 5 'y
3' no traducidas (UTR), y está limitado y poliadenilado. El marco de lectura abierto (ORF) 1a y
ORF1ab ocupan los 50 dos tercios del genoma y codifican dos poliproteínas de replicación (pp1a y
pp1ab). La expresión de la proteína pp1ab requiere un desplazamiento del marco ribosómico
durante la traducción del ARN genómico. Las poliproteínas producidas se escinden
proteolíticamente en 16 proteínas no estructurales, nsp1 a nsp16 por la actividad proteinasa de
nsp3 y nsp5. El tercio 30-proximal del genoma codifica cuatro proteínas estructurales, que
incluyen proteínas de pico (S), envolvente (E), membrana (M) y nucleocápside (N). Algunos
betacoronavirus tienen una proteína de membrana adicional, la hemaglutinina esterasa (HE).
Intercalados entre estos genes están genes que codifican proteínas accesorias. El número de estos
genes varía entre diferentes coronavirus. Por ejemplo, TGEV tiene 3 genes accesorios, PDCoV tiene
2, mientras que DEP tiene solo uno (Fig. 1).

Fig. 1 Organización del genoma de coronavirus entéricos porcina TGEV, DEP y PDCoV. Los genes
para proteínas estructurales se presentan en amarillo. Los genes accesorios putativos se muestran
en verde. Las proteínas no estructurales codificadas por ORF1a / b se presentan en azul. TGEV,
gastroenteritis transmisible coronavirus; DEP, virus de diarrea epidémica porcina; PDCoV,
deltacoronavirus porcino; S, Spike; E, envolvente; M, membrana; N, nucleocápside.

El genoma de ARN viral está empaquetado por la proteína N en una nucleocápside helicoidal.
Además del papel estructural, la proteína N prolonga el ciclo celular en fase S, induce estrés del
retículo endoplásmico, regula positivamente la expresión de interleucina 8 y antagoniza la
producción de interferón tipo I (Ding et al., 2014; Xu et al., 2013b) . La proteína S, que forma
peplómeros en la superficie del virión, media la unión a los receptores del huésped y la fusión de
la membrana. Se puede dividir en dominios S1 y S2. En algunos coronavirus, la proteína S se
procesa en fragmentos S1 y S2 mediante proteasas celulares o tripsina (Belouzard et al., 2012;
Wicht et al., 2014). La proteína S es un objetivo principal para los anticuerpos neutralizantes del
virus (Chang et al., 2002; Reguera et al., 2012). La proteína M es el componente de virión más
abundante y también contiene epítopos de células B lineales conservadas (Zhang et al., 2012).

La proteína E es responsable del ensamblaje del virión y causa estrés del retículo endoplasmático y
regulación al alza de la expresión de interleucina 8 (Xu et al., 2013a). Los genes accesorios son
prescindibles para el crecimiento del virus in vitro, pero pueden desempeñar un papel importante
en la supervivencia del virus en el huésped infectado. De hecho, el producto del gen accesorio de
TGEV, ORF7 reduce la expresión de genes implicados en la defensa antiviral del sistema inmune,
por ejemplo, la respuesta al interferón y la inflamación (Cruz et al., 2011). La proteína ORF3 de
DEP funciona como un canal iónico, y se cree que está relacionada con la virulencia de DEP (Song
et al., 2003; Wang et al., 2012). Se demostró que una de las proteínas no estructurales de DEP,
nsp1, es un supresor de interferón de tipo I (Zhang et al., 2016a). Curiosamente, PDCoV carece del
gen nsp1.

2. Patogénesis y enfermedad clínica

Los coronavirus se dirigen predominantemente a neumocitos de tipo I y II (PRCoV) o enterocitos

de vellosidades y criptas en el intestino (TGEV, DEP y PDCoV). La DEP también infecta células
caliciformes en el intestino delgado (Jung y Saif, 2015). Además, se ha demostrado la infección de
macrófagos alveolares y macrófagos de lámina propia para algunos, pero no todos los coronavirus
porcinos (Laude et al., 1984; Park y Shin, 2014). La entrada del virus en las células diana está
mediada por una serie de interacciones ligando del receptor que incluyen sulfato de heparina
(Huan et al., 2015) y aminopeptidasa N (APN) (Chen et al., 1996; Li et al., 2007). Es importante
destacar que los niveles de expresión de aminopeptidasa N parecen correlacionarse con el nivel de
infección, al menos para DEP. Cuanto más altos son los niveles de expresión, más grave es la
infección (Li et al., 2007; Zhang y Yoo, 2016). Como resultado, puede ser perceptible que los
lechones nacidos con niveles más bajos de APN en el borde en cepillo pueden ser más resistentes
a DEP que los lechones con niveles más altos.

Las infecciones entéricas con TGEV y DEP están caracterizadas por diarrea, vomito y
deshidratación con altas morbilidad y mortalidad especialmente en lechones de menos de dos
semanas de edad. En contraste, infecciones con coronavirus respiratorios causan diarrea muy leve
y transitoria en cerdos de todas las edades, que usualmente no son notadas por el productor. A
menos que se compliquen con infecciones concurrentes, las infecciones PRCoV son de corta
duración con fases temporales de tos y dificultad respiratoria. Sin embargo, PRCoV puede
convertirse en un problema más significativo durante las coinfecciones con otros patógenos, como
el virus del síndrome respiratorio y reproductivo porcino PRRSV (Jung et al., 2009).

La infección de enterocitos con DEP resulta en atrofia de las vellosidades que puede conducir a
malabsorción, diarrea y anorexia. Entre las 24 – 48 horas post infección, puede haber vomito, que
típicamente no dura más de 2 – 3 días post infección. Puede haber diarrea entre las 24 a 36 horas
post infección dependiendo de la dosis del virus y la edad de los lechones. La diarrea típicamente
dura por 5 – 8 días, pero puede durar más, y resulta en pérdida de peso severa que a menudo no
puede ser recuperada durante el ciclo productivo normal. La eliminación viral es más alta entre los
días 3-5, pero puede durar días o semanas después de la infección. Los lechones que sobreviven
comienzan a recuperarse alrededor de 6-8 días después de la infección, por lo general en la misma
época en que ocurre la proliferación del epitelio de las criptas y la regeneración de las
vellosidades. Del mismo modo, TGEV infecta enterocitos vellosos y causa una enfermedad que
clínicamente es indistinguible de DEP. Las tasas de mortalidad son más altas en los lechones
jóvenes, a menudo alcanzan aproximadamente el 100%. Por el contrario, la infección con PDCoV
causa infecciones más leves en lechones de entre 3 y 5 semanas de edad. Diarrea, vómitos y
anorexia se pueden encontrar en animales infectados. En general, los animales infectados
muestran signos mucho más leves en comparación con las infecciones con DEP y TGEV.
 3. Inmunidad a los coronavirus porcinos

La respuesta inmune innata a coronavirus entéricos en cerdos se caracteriza por una rápida
respuesta antiviral en el intestino, que incluye la liberación de interferones, factor nuclear kB y
otras moléculas antivirales (Chattha et al., 2015; Jung y Saif, 2015; Sang et al. ., 2010). Los cerdos
pueden producir tres tipos de interferones (Sang et al., 2014): los interferones de tipo I incluyen
interferones bien conocidos como el interferón ayb (IFN-a / b) y en los cerdos están codificados
por hasta 17 genes diferentes. El único interferón de tipo II en cerdos es IFN-ɣ. Los interferones de
tipo III incluyen IFN-1 (interleucina 29; IL-29), IFN-12 (IL-28A), IFN-13 (IL-28B) e IFN-14 (Kotenko et
al., 2003; Park et al., 2012; Prokunina Olsson et al., 2013; Sheppard et al., 2003; Zhang y Yoo,
2016). Sus funciones son desconocidas en los cerdos. Especialmente los interferones tipo I y III son
utilizados por el huésped para contrarrestar las infecciones virales. En respuesta, la mayoría de los
virus, incluidos el DEP y el TGEV, han desarrollado estrategias para evadir e interferir con la
respuesta al interferón. Se han identificado varias proteínas virales, que incluyen proteínas
estructurales y no estructurales para DEP y TGEV que pueden suprimir la respuesta al interferón.
Para una excelente revisión sobre la evasión de la inmunidad por coronavirus porcinos, consulte
(Zhang y Yoo, 2016).

La respuesta inmune adaptativa a coronavirus entéricos porcina se basa en anticuerpos secretores

y células T citotóxicas. Estos incluyen anticuerpos IgA secretores (SIgA) producidos por células
secretoras de anticuerpos en la lámina propia de los tejidos de la mucosa y anticuerpos sistémicos
como IgG e IgM en el suero y los tejidos intersticiales, y algunos isotipos pueden transsudarse a
través del epitelio de la mucosa hacia el lumen (Chattha et al., 2015; Horton y Vidarsson, 2013). La
respuesta celular a los coronavirus porcinos se caracteriza por las células T cooperadoras que
apoyan la producción de anticuerpos y células T citotóxicas que se dirigen a células epiteliales
infectadas por virus. En los cerdos, estas son predominantemente células ɣɗ, la mayoría de las
cuales se pueden encontrar dentro de la capa intraepitelial (Bonneville et al., 2010). La mayoría de
los epítopos de células T están localizados en el pico y la nucleoproteína de los coronavirus
(Channappanava et al., 2014; Saif, 2004; Sestak et al., 1999). Además, se han encontrado epítopos
de células T CD8 en la proteína de membrana del SARS-CoV humano (Yang et al., 2006).

En lechones neonatales, el principal mecanismo de protección está mediado por la inmunidad

lactogénica. Durante la lactancia, SIgA, IgG e IgM se transfieren pasivamente al lechón a través del
calostro y la leche (Bohl y Saif, 1975; Saif y Bohl, 1979, 1983; Salmon et al., 2009). El calostro
contiene predominantemente IgG, que se transuda a partir del suero de la cerda y es absorbido
por el lechón dentro de las primeras 24-48 h de vida. La IgA secretora se encuentra
predominantemente en la leche, después de la transición del calostro a la leche alrededor de los
3-4 días de edad (Langel et al., 2016). SIgA es producido por células secretoras de anticuerpos en
la glándula mamaria, y Bohl y Saif (Bohl et al., 1972a) lo demostraron hace muchos años que estas
células migran del intestino a la glándula mamaria al final del embarazo. Esto fue confirmado por
otros en una variedad de especies y las quimioquinas como CCL28 y otras se han encontrado
responsables de reclutar estas células secretoras de anticuerpos en la glándula mamaria (Bourges
et al., 2008; Lazarus et al., 2003; Meurens et al. , 2006, 2007, Wilson y Butcher, 2004). Por lo tanto,
para mejorar el nivel de inmunidad materna, la vía oral parece ser la opción más obvia para
vacunar a la cerda. De hecho, la mayoría de las vacunas para coronavirus entéricos están
diseñadas para inducir inmunidad lactogénica mediante la vacunación de la cerda, sin embargo, la
mayoría de ellas se administran mediante inyección sistémica. En la ausencia de vacunas efectivas
para DEP, muchos productores están actualmente usando un cierre del granero combinado con la
alimentación del virus vivo infeccioso a las cerdas gestantes. Sin embargo, la duración de la
inmunidad a menudo no se extiende a más de unos pocos años (Tabla 1), dependiendo del tipo de
vacuna que se use con las vacunas vivas que normalmente proporcionan inmunidad de mayor
duración. Incluso después de retroalimentación, la inmunidad comienza a disminuir después de un
período relativamente corto de tiempo, a menudo incluso menos de unos pocos meses. Para una
excelente revisión del papel de la inmunidad lactogénica para DEP ver (Langel et al., 2016).
Además de los anticuerpos, el calostro también contiene moléculas efectoras innatas como
defensinas y péptidos antimicrobianos, interleuquinas y citocinas (Bandrick et al., 2014; Hlavova et
al., 2014; Mair et al., 2014; Nechvatalova et al., 2011). Salmon et al., 2009).

El nivel de protección cruzada es poco claro para los coronavirus. Para DEP, Goede et al.
informaron que los lechones de 3 días nacidos de cerdas que habían sido infectadas con una cepa
leve de DEP siete meses antes estaban protegidos contra la infección con una cepa más virulenta
de DEP (Goede et al., 2015). En este experimento, las cerdas fueron expuestas a un virus DEP más
virulento el día 109 de gestación, y fueron revacunadas por vía oral cuando los lechones tenían
tres días de edad. Ninguna de las cerdas mostró síntomas clínicos significativos. Los lechones se
expusieron oralmente con 1 ml de raspado de moco del DEP más virulento. Si bien las tasas de
mortalidad y morbilidad variaron significativamente entre los lechones de cada grupo, la
morbilidad y mortalidad general se redujo en lechones nacidos de cerdas que habían sido
preexpuestas a DEP.
Tabla 1 Estrategias de vacuna contra el Coronavirus entérico porcino.

Tipo de vacuna Desarrollo Ventajas Desventajas Antígeno

Coronavirus
Virus Los viriones Fácil de preparar, no Puede inducir Todo el virus
inactivado son inactivados puede causar respuesta inmune
con químicos. enfermedad si es Th2-sesgada;
inactivado necesita
correctamente. adyuvante.
Virus vivo Los genomas Barato; fuertes Reversión a la Todo el virus
atenuado se mutan respuestas virulencia; todavía
usando inmunitarias celulares puede causar
múltiples y humorales; puede alguna
pasajes en ser administrado enfermedad; la
células Vero. oralmente protección
depende de la
dosis
Vectores Genoma viral Fuertes respuestas Inmunidad Proteína en
virales no relacionado inmunes celular y preexistente Spike
(Poxvirus, humoral; propiedades contra el vector
Adenovirus) adyuvantes viral.
diseñado para intrínsecas; puede ser
expresar el gen administrado
de interés. oralmente
Subunidad El antígeno se No puede causar Costoso; necesita Proteína en
expresa en enfermedad por una adyuvante; la Spike
células de infección viral; puede protección puede
mamíferos, generar anticuerpos ser incompleta.
baculovirus, neutralizantes de alto
levaduras o título.
plantas.
Vacunas ADN Los genes que No puede causar Respuesta inmune Spike,
codifican enfermedad por una Th1-asimétrica nucleocápside
antígenos se infección viral; puede cuando se usa solo. o proteínas
clonan en el administrarse por vía de membrana
vector de oral cuando se
expresión del introduce en
plásmido. Lactobacillus o
Salmonella.
Vacuna de El gen de No puede causar La entrega oral no Proteína
partículas interés de enfermedad por una ha sido Spike
virales Replicón ARN infección viral; demostrada.
replicantes se empaqueta propiedades
en partículas adyuvantes
de virión de intrínsecas; alto nivel
alfavirus. de expresión de
antígeno
 4. Vacunas para TGEV y otros coronavirus

En la década de los 90, TGEV fue responsable de graves pérdidas económicas en todo el mundo.
Varias tecnologías de vacunas fueron desarrolladas y comercializadas. Mediante la administración
a cerdas, se estableció la importancia de la inmunidad lactogénica (Bohl et al., 1972b, Saif y Bohl,
1983). Sin embargo, con la desaparición de la enfermedad en muchas partes del mundo, ahora hay
menos vacunas disponibles comercialmente en América del Norte y Europa (Tabla 2). La mayoría
de las vacunas de TGEV comerciales actuales son vacunas vivas atenuadas que se administran a la
cerda durante la gestación para proporcionar inmunidad lactogénica al lechón recién nacido. Estas
vacunas a menudo están disponibles como vacunas bivalentes o trivalentes combinadas con
rotavirus, DEP y / o Escherichia coli. Las vacunas experimentales incluyen nuevas vacunas de ADN,
vacunas vectorizadas y vacunas recombinantes (Tabla 1). Por ejemplo, el adenovirus porcino se
usó para administrar la proteína TGEV spike (Tuboly y Nagy, 2001). Yuan et al. usaron el virus de la
viruela porcina para expresar el epítopo A de la proteína spike (Yuan et al., 2015). Se generaron
plásmidos de ADN tanto para DEP como para TGEV para el desarrollo de una vacuna de ADN
(Meng et al., 2013). Las proteínas recombinantes (pico y nucleocápside) se han evaluado
ampliamente como vacuna recombinante después de la expresión en bacterias, levaduras y
plantas. Muchos de estos están siendo evaluados por su potencial para la inmunidad de la mucosa
después de la administración oral.

Tabla 2 Vacunas para TGEV y DEP

Virus Región / Vacunas en desarrollo Vacunas comerciales

país
TGEV Norte Proteínas recombinantes
América expresadas en baculovirus,
Europa levadura y plantas; vacuna
viva atenuada; Vacuna de
ADN
Asia Proteínas recombinantes
expresadas en baculovirus,
levadura y plantas; vacuna
viva atenuada
DEP Norte Proteínas recombinantes
América expresadas en levaduras y
baculovirus; Vacuna de
ADN; clon infeccioso para
vacuna viva atenuada
Europa Vacunas de ADN
Asia Vacunas recombinantes
expresadas en baculovirus,
levadura, plantas,
Lactobacillus casei,
Salmonella typhimurium y
otras
Las vacunas vivas atenuadas (mono, bi y
trivalente para TGEV, rota y E. coli)
Vacunas inactivadas (mono, bi- y trivalentes
para TGEV, rota, DEP y / o E. coli); vivir
TGEV trivalente atenuado, DEP y rotavirus
porcino (China)
Vacuna inactivada; Vacuna recombinante
basada en alfavirus
Vacunas inactivadas
Vacuna bi-valectiva inactivada para TGEV y
DEP (China; cepa CV777); TCEV trivalente
vivo atenuado, DEP y rotavirus porcino
(China; cepa CV777 de DEP); Vacuna viva
atenuada (Japón; cepa 83P-5 de DEP; Corea
del Sur; cepas DEP SM98-1 y DR-13, Filipinas,
cepa DR13 de DEP); Vacuna inactivada (Corea
del Sur, cepa DEP SM98-1)
 5. Vacunas para DEP en Norte América

La primera vacuna para DEP en los EE. UU. Fue desarrollada por HarrisvaccinesTM en Iowa y
condicionalmente autorizada en 2013. La vacuna, inicialmente llamada vacuna iPED, se basó en
una versión truncada del gen DEP spike producido en la plataforma de tecnología de partículas
SirraVax℠ RNA ( Mogler et al., 2014b), que se basa en un vector de replicón pVEK derivado del
virus de la encefalitis equina venezolana. La tecnología es una tecnología de partículas de ARN de
ciclo único, deficiente en propagación, que se cree que se dirige a las células dendríticas. Una
versión más larga de los genes spike se optimizó con codones y se utilizó en la vacuna de segunda
generación llamada iPED plus, que ahora está disponible comercialmente como Vacuna de Diarrea
Epidémica Porcina, ARN (ARN DEP). La vacuna indujo inmunidad en cerdos jóvenes después de dos
dosis administradas por vía intramuscular en un intervalo de tres semanas. Los cerdos destetados
vacunados cuando se desafiaron con tejido intestinal homogeneizado de un aislado clínico
mostraron una severidad significativamente reducida de los signos clínicos (diarrea) y una
reducción de la diseminación viral durante las primeras 72 h (Mogler et al., 2014a). La eficacia de
la vacuna fue probada adicionalmente en cerdas no infectadas. Después de tres vacunaciones a las
8, 5 y 1 semana, los lechones prepartidos de ambos grupos se expusieron entre los 2 y 6 días de
edad con 103 DICT50 (DEP / CO / 2013). La mortalidad promedio de la hojarasca en el grupo de
control fue del 91%, mientras que la mortalidad promedio en los grupos vacunados fue del 69%
(Crawford et al., 2015). Resultados similares se encontraron en cerdas expuestas previamente a
DEP. Después del desafío oral de los lechones en la primera semana, la mortalidad promedio de la
hojarasca se redujo del 59% en el grupo control al 45% en el grupo vacunado. Finalmente, Greiner
et al. (2015) evaluaron la vacuna en 80 cerdas que habían estado expuestas previamente a DEP. La
vacunación indujo títulos más altos contra la proteína S1 en el calostro de las cerdas vacunadas y
redujo la mortalidad general del cerdo en un 3% (Greiner et al., 2015).

Una segunda vacuna para DEP en los EE. UU. Fue desarrollada por Zoetis y se comercializó en 2014
bajo un condicionamiento. La vacuna consiste en un virus entero inactivado formulado con un
adyuvante. La vacuna se probó en cerdas DEP negativas, que se vacunaron dos veces, con 3
semanas de diferencia, con la vacuna (n = 23) o un placebo adyuvante (n = 3). La vacuna era segura
e inmunogénica e indujo anticuerpos neutralizantes tanto contra el virus completo como contra la
proteína de la espícula (Frederickson et al., 2014). La vacuna también se probó en condiciones de
campo en una piara comercial positiva para DEP. Las cerdas (n = 120) se vacunaron a las 5 y 2
semanas antes del parto, las cerdas control (n = 120) recibieron placebo. La vacunación resultó en
una reducción de la mortalidad antes del destete debido a DEP del 6,3% en lechones nacidos para
el control de cerdas frente al 0,6% en lechones nacidos de cerdas vacunadas. La vacunación
produjo títulos de anticuerpos de neutralización aproximadamente 3 veces mayores en
comparación con el grupo de control, y sobrevivieron 1,8 cerdos adicionales por cerda (Rapp-
Gabrielson et al., 2014).

Una tercera vacuna fue desarrollada recientemente por la Organización de Vacunas y

Enfermedades Infecciosas-InterVac en Canadá. La vacuna se basa en virus inactivado formulado
con un adyuvante. Cuando se administraron a cerdas seronegativas 4 y 2 semanas antes del parto,
se encontraron altos niveles de anticuerpos neutralizantes contra DEP en calostro y leche, así
como en el suero de lechones nacidos de cerdas vacunadas. Los lechones fueron infectados
oralmente a los 5 días de vida con 300 pfu de aislado de DEP CO 025. Se encontró que el 95% de
todos los lechones (n = 83) nacidos de cerdas vacunadas sobrevivieron a la infección y mostraron
síntomas clínicos significativamente reducidos, pérdida de peso y viral derramamiento. Por el
contrario, todos los lechones de cerdas no vacunadas mostraron síntomas clínicos graves, incluida
la pérdida de peso y la deshidratación, y el 50% de estos lechones murió dentro de los 6 días
posteriores a la infección. Estos resultados se confirmaron en dos ensayos clínicos adicionales. En
tres unidades comerciales en Saskatchewan, Canadá, se realizó una gran prueba de campo con
más de 600 cerdas para evaluar la vacuna en diferentes estados genéticos, estado de salud y
sistemas de manejo. La vacuna demostró ser completamente segura de usar; no se observaron
eventos adversos, incluidas las reacciones en el sitio de inyección y las complicaciones
reproductivas. Se evaluó la eficacia de la vacuna en el 8% de estos animales mediante el
transporte de las cerdas gestantes una semana antes del parto a la instalación de alta contención
VIDO-InterVac. Después de la prueba oral a los 5 días de edad, la supervivencia fue
significativamente mayor en los lechones nacidos de cerdas vacunadas que en los de las cerdas
control (Berube et al., 2015). La evaluación de la duración de la inmunidad está actualmente en
curso. Además, se expresó una proteína DEP S1 etiquetada por afinidad en el sistema HEK293 para
usar como vacuna de subunidad. Cuando se administró a cerdas gestantes, la vacuna protegió
parcialmente a los lechones recién nacidos contra la infección con DEP (Makadiya et al., 2016).

6. Vacunas para DEP en Asia

Desde principios de la década de 1980, se han reportado brotes de DEP en varios países asiáticos,
incluidos China, Japón, Tailandia, Taiwán, Filipinas, Corea del Sur y Vietnam. En octubre de 2010,
se informó un brote a gran escala de DEP grave en China (Wang et al., 2013). A finales de 2013, se
produjeron brotes de DEP en Japón, Corea del Sur y Taiwán (Lee y Lee, 2014). El análisis
filogenético de secuencias genómicas de longitud completa de DEP revela que DEP se puede
dividir genéticamente en 2 grupos: G1 (clásico) y G2 (epidemia de campo o pandemia). Cada grupo
se puede dividir en dos subgrupos: 1a y 1b, 2a y 2b, respectivamente. También es posible que la
efectividad baja a moderada de las vacunas DEP actuales se deba a diferencias genéticas entre las
vacunas y las cepas epidémicas de campo (Kim et al., 2015).

Para el control de la enfermedad, se introdujo en China una vacuna bivalente inactivada de TGEV y
DEP en 1995. En marzo de 2015, también se aprobó una vacuna atenuada trivalente (DEP, TGEV y
rotavirus porcino). Todas estas vacunas se basaron en la cepa clásica CV777 (G1-a) que se puede
cultivar a títulos elevados en células Vero de riñón de mono verde. No hay datos publicados sobre
la eficacia de estas vacunas. Sin embargo, de Arriba et al. (de Arriba et al., 2002) inocularon por vía
oral lechones de crianza convencional de 11 días con dos dosis diferentes de la cepa atenuada CV-
777 y se expusieron a la misma cepa virulenta de DEP tres semanas después. Los cerdos
vacunados estaban parcialmente protegidos contra la exposición, y el 25% de los cerdos de dosis
baja y el 50% de los expuestos a altas dosis no arrojaron virus después de la exposición.

Desde el invierno de 2010, China experimentó severos brotes de DEP con daños devastadores en
la industria porcina. Estos brotes pueden explicarse por el resurgimiento de nuevas cepas de DEP.
Para responder a la demanda de la industria, los investigadores chinos han desarrollado una
vacuna atenuada bivalente (DEP y TGEV) que contenía la cepa DEP ZJ08 (G1-b) y una vacuna
atenuada bivalente basada en la cepa AJ1102 (G2-b). También se ha desarrollado una vacuna
bivalente inactivada basada en la cepa G2-b. Estas vacunas se encuentran actualmente en
evaluación clínica (Wang et al., 2016).

Según un estudio realizado en Corea del Sur, la administración de vacunas comerciales aumentó la
tasa de supervivencia de los lechones expuestos a un DEP virulento de tipo silvestre del 18.2% a
más del 80%. Sin embargo, todas las vacunas no redujeron significativamente la tasa de morbilidad
y la diseminación del virus (Lee, 2015). Además, Song et al. (Song et al., 2007) informaron un 60%
de reducción de la tasa de mortalidad de los lechones nacidos de las cerdas que fueron vacunadas
IM con la vacuna DR-13 DEP.

A pesar del uso a nivel nacional de vacunas disponibles comercialmente, Corea del Sur
experimentó una epidemia de DEP devastada en 2013-2014. Las cepas DEP G2-b fueron
responsables de las recientes epidemias graves de DEP en países asiáticos y América del Norte.
Teniendo en cuenta este hecho, los investigadores de Corea del Sur (Baek et al., 2016) probaron
una vacuna inactivada basada en la cepa G2-b cultivada en serie KOR / KNU-141112/2014. Las
cerdas gestantes fueron inmunizadas IM con la vacuna adyuvada inactivada a las 6 y 3 semanas
antes del parto. Los lechones de seis días fueron desafiados con el virus virulento homólogo. Los
lechones nacidos de cerdas vacunadas redujeron la morbilidad, la mortalidad y el aumento diario
de peso recuperado. Se necesitan más estudios para evaluar la eficacia de esta vacuna en lechones
de 1 o 2 días de edad en condiciones de campo.

Todas las vacunas comercialmente disponibles que se usan en Asia son vacunas tradicionales
atenuadas vivas o muertas. Sin embargo, los investigadores están trabajando en las vacunas de
próxima generación para DEP (Tabla 1). Por ejemplo, Hou et al. (Hou et al., 2007) expresaron la
proteína DEP N en la superficie de lactobacillus. Las inoculaciones orales e intranasales de L. casei
recombinante en cerdas gestantes y ratones dieron como resultado altos niveles de IgG sérica
específica de N e IgA mucosa. Del mismo modo, Liu et al. (Liu et al., 2012) expresaron la proteína
S1 y N en L. casei recombinante e informaron una mejor respuesta inmune mucosal y sistémica
después de la inmunización oral de los ratones. Meng y otros (Meng et al., 2013) evaluaron la
inmunogenicidad de plásmidos de ADN recombinante que expresan genes S de DEP y TGEV en
ratones. Los resultados mostraron que los plásmidos de ADN recombinante aumentaban la
proliferación de linfocitos T y el número de linfocitos T CD4 + y CD8 +. Además, las vacunas de ADN
indujeron un alto nivel de IFN-g en los ratones inmunizados. A los 35 días después de la
inmunización, los plásmidos de ADN recombinante que llevan genes S de longitud completa de
TGEV y DEP estimularon altos niveles de anticuerpos neutralizantes de virus. Zhang et al. (Zhang et
al., 2016b) también han construido una vacuna de ADN bivalente que coexpresa genes S de TGEV y
DEP. Se utilizó Salmonella Typhimurium atenuada para administración oral de esta vacuna a los
cerdos. Los cerdos vacunados desarrollaron respuestas inmunitarias celulares y humorales
específicas de TGEV y DEP; sin embargo, el experimento de desafío no se realizó en este estudio.

También se han publicado informes sobre la expresión de fragmentos de proteína DEP S

recombinante en plantas (Bae et al., 2003) y en una línea celular (Oh et al., 2014). La alimentación
de ratones con plantas de tabaco transgénicas que expresan el fragmento de proteína S que
contiene el epítopo neutralizante de DEP indujo el anticuerpo específico de DEP y las respuestas
inmunitarias mediadas por células. En otro estudio, Oh et al. (Oh et al., 2014) establecieron una
línea celular porcina estable que expresaba el fragmento S1 de la proteína DEP spike. Las cerdas
gestantes se inmunizaron IM 3 veces con la proteína purificada y adyuvada 6, 4 y 2 semanas antes
del parto. Las cerdas desarrollaron anticuerpos neutralizantes específicos de DEP en suero y
calostro. Se seleccionó un lechón de 4 a 5 días al azar de cada cerda de parto para la prueba con
DEP virulento. Los lechones nacidos de cerdas vacunadas mostraron morbilidad, mortalidad y
diseminación de virus reducidas. Sin embargo, un bajo número de lechones desafiados obstaculiza
la conclusión del autor sobre la protección eficaz de lechones neonatales.

7. Perspectivas futuras

Con la desaparición de TGEV en todo el mundo, la necesidad de vacunas contra el TGEV ha

disminuido en los últimos años. Para América del Norte y Europa, solo dos importantes compañías
internacionales de salud animal continúan ofreciendo vacunas contra el virus de la enfermedad de
Newcastle. Por el contrario, muchas partes de Asia, incluidas China y Corea, siguen lidiando con
brotes de TGEV, y todavía hay disponibles diferentes tipos de vacunas. La introducción de DEP en
el hato de América del Norte en 2013-2014, sin embargo, ha revertido esta imagen y ha puesto de
relieve la necesidad mundial de vacunas eficaces. Los coronavirus representan un grupo
importante de patógenos animales que pueden tener impactos devastadores en una variedad de
especies. Que una industria dependa solo de la bioseguridad parece arriesgado y, en caso de una
enfermedad emergente, puede ocasionar grandes pérdidas económicas, como se ha visto en
América del Norte en los últimos dos años. De hecho, la filogenia de los coronavirus demuestra
una gran diversidad de variantes antigénicas, lo que puede conducir a una protección cruzada
limitada contra la infección con diferentes cepas. Por lo tanto, es importante seguir estudiando las
variantes novedosas de DEP que pueden surgir local o globalmente a través de deriva antigénica
(mutaciones puntuales) o cambio antigénico (eventos de recombinación).

La prevención y el control efectivos de DEP y otros coronavirus solo pueden lograrse mediante el
uso de vacunas. Una vacuna ideal previene la mortalidad y la enfermedad clínica en los lechones
recién nacidos, el grupo de edad más gravemente afectado por la enfermedad, así como la
diseminación del virus. Como la inmunidad lactogénica es un mecanismo clave de protección, los
esfuerzos para mejorar los niveles de anticuerpos en la leche a través de la formulación
(adyuvantes) y la administración (por mucosa) son críticos. Sin embargo, el tiempo también es
esencial cuando se trata de una nueva cepa, ya que los métodos tradicionales de fabricación de
vacunas como el aislamiento del virus, la inactivación o la atenuación pueden consumir mucho
tiempo. Por lo tanto, la investigación sobre las vacunas de próxima generación, tales como las
partículas de ARN, el ADN, la subunidad y los enfoques de vectores virales es fundamental para la
prevención de futuros brotes de enfermedades coronavirus emergentes.