Bioingeniería

Laboratorio de Biología Celular y Molecular

Práctica 3: Actividad enzimática

Objetivos
1.1. Conocer qué es una enzima y cómo éstas actúan en reacciones intracelulares.
1.2. Identificar factores que afectan la actividad enzimática.

Materiales y reactivos

Proporcionados por los alumnos:

Muestras biológicas (por todo el grupo):
- 1 papa pequeña
- hígado crudo (de vaca o de pollo, 50-75 gramos aprox.)
- espinaca (2 hojas grandes)
- agua oxigenada (peróxido de hidrógeno, 100 mL)
- gasa estéril (2 paquetes chicos)
- 3 hojas de bisturí

Proporcionados por el laboratorio:

Materiales Cantidad Observación

Gradillas 3
Tubo de ensayo 25
Placas para picar el material 3
Goteros 10
Morteros 3
Baño de agua 1
Termómetro 1
Pinzas para tubos de ensayo 3
Recipiente con hielo 1
Reactivos Concentración Cantidad
Agua destilada c.s
Solución de HCl 3M 50 ml
Solución de NaOH 3M 50 ml

1. Introducción

Las células llevan a cabo simultáneamente una gran cantidad de reacciones químicas
necesarias para la vida. Muchos de los productos de esas reacciones se necesitan
inmediatamente, y si no fuera por la participación de las enzimas, algunas reacciones no se
producirían tan rápido. Las enzimas, en su mayoría proteínas o RNA (riboenzimas), son
catalizadores químicos que agilizan una reacción que envuelve la formación o rompimiento de
enlaces químicos. Las enzimas no se consumen en las reacciones, ni tampoco se alteran, razón
por lo cual no se necesitan en grandes cantidades. Las enzimas actúan sobre los sustratos
formando un complejo enzima-sustrato; esto ocurre en un lugar en específico conocido como
el sitio activo de la enzima. Las enzimas son muy selectivas porque pocas moléculas pueden

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interactuar bien con este sitio. Las enzimas reducen la energía de activación necesaria para
llevar a cabo una reacción; es decir, reducen la barrera de energía que hay que sobrepasar para
que la reacción se lleve a cabo.

Las enzimas trabajan óptimamente bajo condiciones específicas y ciertos cambios pueden
alterar el funcionamiento de la enzima, desactivarla o hasta destruirla. Algunas enzimas
necesitan activadores para cambiar su conformación de modo que pueda formarse el complejo
enzima–sustrato. Estos Sin enzima Con enzima Sustratos Sitio activo Complejo Enzima-Sustrato
Producto Enzima 3 activadores se conocen como cofactores y pueden ser tan simples como
iones metálicos. Los cofactores orgánicos se conocen como coenzimas. Las enzimas pueden
afectarse negativamente por inhibidores que impidan la actividad enzimática. Estos inhibidores
pueden afectar el sitio activo de dos maneras: competitivamente -al bloquear el sitio activo-, o
no competitivamente -al pegarse en otro lugar de la enzima y alterar indirectamente la forma
del sitio activo-.

2. Parte experimental

a. Funcionamiento de la enzima catalasa en varios organismos

En este ejercicio se prepararán varios homogenados para obtener partículas

pequeñas y uniformes al mezclarlas con el agua.

1. Para preparar los homogenados, corte en pedazos pequeños y por separado las
muestras de papa, hígado y espinaca.
2. Usando un mortero, muela el material con un poco de agua hasta diluir parte de la
muestra; no muela excesivamente para que no queden pedazos muy pequeños del
material.
3. De ser necesario, filtre el macerado con una gasa.
4. Coloque cada homogenado en un tubo de ensayo previamente rotulado.
5. Usando un gotero, coloque cinco gotas de cada homogenado en un tubo de ensayo
y añada tres gotas de peróxido de hidrógeno.

Resultados homogenados con peróxido de hidrógeno

Homogenado Reacción al añadir gotas de peróxido
Agua
Papas
Hígado
Espinaca

b. El efecto del pH sobre el funcionamiento de las enzimas

1. Rotule tres tubos de ensayo A, B y C

2. Añada 3 mL de homogenado de hígado a cada tubo.
3. Añada soluciones 3M de HCl y 3M de NaOH a los tubos como sigue, y agite suavemente
hasta mezclar:
Tubo A – 3 ml de 3M HCl Tubo
Tubo B – 3 ml de 3M NaOH
Tubo C – control (sin ácido ni base)
4. Añada 3 mL de peróxido de hidrógeno a cada tubo.
5. Observe y anote las reacciones en la Tabla

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Resultados del efecto del pH sobre la actividad enzimática

Tiempo que toma la reacción Descripción comparativa de las
Tubo
en completarse reacciones
A
B
C

c. El efecto de la temperatura sobre el funcionamiento de las enzimas

1. Rotula cuatro tubos de ensayo del 1 al 4

2. Añade 5 mL de hígado homogenado a cada tubo.
3. Mantén los tubos a las siguientes temperaturas:
Tubo 1 = 80 °C por 15 minutos
Tubo 2 = 37 °C por 15 minutos
Tubo 3 = Temperatura ambiente
Tubo 4 = Hielo por 30 minutos (puede ser en congelador)

4. Añade 2 mL de peróxido de hidrógeno a cada tubo

5. Mide el tiempo transcurrido desde que se añadió el peróxido hasta que se

comienzan a producir burbujas, y anótelo en la Tabla

6. Compara tus resultados en término de tiempo de reacción vs. temperatura.

Tiempo que tardó en

Tubo Temperatura comenzar la reacción Observaciones

1 80 °C
2 37 °C
3 T° Ambiente
4 Hielo

5. Cuestionario posterior (para el informe)

1. ¿Qué ocurrió al añadir el peróxido de hidrógeno?

2. ¿Ocurrió lo mismo en todas las muestras?
3. ¿Por qué se forman burbujas?
4. ¿Qué efecto podría tener una fiebre alta prolongada sobre el funcionamiento de las
enzimas?
5. Las enzimas del estómago funcionan óptimamente a un pH de 2. ¿Cómo se afectaría la
digestión si el pH aumentara a 4?

6. REFERENCIAS

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Boyer, B (1999). Concepts in Biochemistry, Brooks/Cole Publishing

Denniston, Topping and Caret (2004). General, Organic, and Biochemistry, 4ta Ed. Mc Graw Hill. New York. USA
Solomon, Berg & Martin (2004). Biology, 7th Ed. Brooks Cole Publ.
http://www.mhhe.com/physsci/chemistry/chang

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Biologia Celular y Molecular

Rúbrica – Práctica

Criterio de desempeño : Informe de laboratorio

Titulo del experimento Actividad enzimática Semana:

Grupo (nombre y apellidos

Periodo:
de los alumnos):
Sección: Fecha: Docente:

Requiere No
CRITERIOS DE EVALUACIÓN Excelente Bueno
Mejora aceptable
RESUMEN: El resumen debe indicar la finalidad del experimento
y presentar en forma breve, pero muy clara en qué consiste la
practica realizada (máximo 5 renglones). 1,0 0,5 0,25 0
Nota. Esta parte debe ser elaborada por el estudiante con sus
propios análisis y argumentos.
INTRODUCCION: Incluye una breve introducción alusiva al tema, la
cual es original y no excede las 15 líneas de texto.
OBJETIVOS : metas del aprendizaje experimental que contiengan 3,0 2,0 1,5 0
indicadores de rendimiento clave que se utilizarán para evaluar el
éxito del experimento.
CÁLCULOS Y RESULTADOS: En esta parte se puede mostrar una
derivación corta de las ecuaciones utilizadas. Todos los símbolos
deben definirse en el momento en que aparecen por primera
vez. Los resultados deben ser claros y precisos. Que indiquen lo que
el estudiante pudo observar, no lo que los libros dicen, que se ha 3,0 2,5 1,5
0
debido observar.
Nota: reportar sus datos en forma de tablas o gráficas. Cada
tabla o grafica debe estar identificada con un número y un título.

ANÁLISIS DE RESULTADOS: La discusión de resultados

generalmente suele corresponder a un argumento lógico, basado
en los resultados y no una repetición de estos. En ocasiones,
puede ser útil, comparar los resultados obtenidos con los
reportados en la literatura, mirar si hay discrepancia respecto a
los valores aceptados o esperados, indicando las causas y
algunas sugerencias que puedan mejorar el método experimental. 4,0 3,0 1,5
0
Otros aspectos a tratar son las dificultades encontradas durante
la realización del experimento que hayan podido influir en los
resultados, si son o no válidas las aproximaciones hechas,
son entre otros, temas que también pueden tratarse como
discusiones de resultados.

CONCLUSIONES. Debe sacarse conclusiones concisas y precisas

del trabajo realizado. 1 0,5 0.25 0

RECOMENDACIONES. Se pretende realizar recomendaciones

1 0,5 0.25 0
que mejoren la práctica o la misma forma de realizar informes.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. Utiliza adecuadamente la
bibliografía a lo largo del informe y la referencia de acuerdo al formato
propuesto. La bibliografía es mayor que dos fuentes y se trata de 1,0 0,5 0,25 0
materiales actuales. Tenga en cuenta las normas para la presentación
de trabajos, las más actualizadas posible.