ESCUELA SUPERIOR POLTÉCNICA DE

CHIMBORAZO

FACULTAD: CIENCIAS
CARRERA: BIOQUÍMICA Y FARMACIA

GUÍA DE LABORATORIO DE FITOQUÍMICA

PRÁCTICA No. 02 – FRACCIONAMIENTO DE ALCALOIDES.

1. DATOS GENERALES:

NOMBRE: estudiante(s) CODIGO(S): de estudiante(s)

Altamirano Alex
Chávez Valeria 3240
Punina Diego 3112
Vistin Johanna 3132

GRUPO No.: 1

DOCENTE: BQF. Diego Vinueza

FECHA DE REALIZACIÓN: FECHA DE ENTREGA:

13/04/2019 20/05/2019

2. OBJETIVO:
2.1. OBJETIVO GENERAL:

 Comprender el proceso para el fraccionamiento e identificación de alcaloides mediante

cromatografía en capa fina de la Banisteriopsis caapi.

2.2. OBJETIVOS ESPECÍFICOS:

 Conocer la proceso de la cromatografía en capa fina
 Determinar la composición del eluyente a usar en la cromatografìa
 3. MARCO TEÓRICO

INTRODUCCIÓN
En la cromatografía analítica en capa fina, la fase estacionaria o también llamada, absorbente, se
encuentra colocada uniformemente, formando una finísima capa de un espesor en torno a 0.1 mm,
sobre un soporte o placa de vidrio o metal. “La mezcla que deseamos analizar se colocará a una
corta distancia del borde inferior de la mencionada placa, la cual introduciremos en una cubeta o
recipiente que contendrá la fase móvil, o también llamado, eluyente. La fase móvil irá ascendiendo
poco a poco sobre la placa de la fase estacionaria a través de capilaridad, desplazando a los
diferentes componentes de la mezcla a analizar, a distintas velocidades, lo que provocará la
separación de la mezcla. Cuando el frente del disolvente se sitúe próximo a la parte superior de la
placa, sacaremos la placa de la cubeta con la finalidad de dejarla secar para poder ver las manchas
de los diferentes componentes”. (1)
“La relación de las distancias recorridas por el compuesto y por el disolvente, desde el punto de
origen del cromatograma, se conoce como Rf (rate factor), el cual posee un valor constante para
cada compuesto en condiciones determinadas. Estas condiciones pueden ser el tipo de absorbente
utilizado, el tamaño de la cubeta, la temperatura, el disolvente, etc. Es poco factible reproducir
exactamente las condiciones experimentales, así que se suele comparar una muestra con otra,
eluyendo ambas dentro de la misma placa” (1)
Así, para poder calcular el Rf, se sigue la siguiente fórmula:
Rf = Distancia recorrida por el compuesto / Distancia recorrida por el disolvente

La distancia que recorre el compuesto se suele medir desde el centro de la mancha, por lo cual se
suelen hacer unas marcas en la placa, si dichas manchas son extremadamente grandes, el valor del
Rf será erróneo. Así realizamos unas marcas en la placa donde depositaremos con ayuda de una
pipeta un mínimo de muestra.
“Cuanto más polar sea el compuesto, más retenido estará en el absorbente, y por tanto irá más
lento y el Rf será también menor. Por otra parte, los compuestos poco polares, se consiguen
desplazar a más distancia desde el origen. La polaridad del disolvente influye en el valor del Rf,
por lo que deberemos tenerlo en cuenta. Así, para un mismo tipo de compuesto, un aumento de la
polaridad del disolvente hará aumentar su desplazamiento en la placa y por lo tanto también
aumentará su Rf” (2)
Para elegir un eluyente, se recomienda elegir un disolvente en el que los componentes que formen
la mezcla presenten un Rf de entorno a un 0.3 ó un 0.5. Para encontrar el eluyente ideal, es
necesario probar con diferentes disolventes con distintas polaridades o con mezclas de varios de
ellos. En estos casos, debemos cambiar a disolventes más o menos polares.

En el caso de compuestos poco polares, los cuales se desplazan del origen con bastante facilidad,
se utiliza un disolvente apolar, generalmente el hexano. Cuando se trata de compuestos con una
polaridad media, es aconsejable usar mezclas de hexano/ acetato de etilo en diferentes
proporciones según la polaridad. Los productos más polares de todos, los cuales quedan muy
retenidos en el absorbente, necesitan un disolvente más polar como pueden ser el metanol o
distintas mezclas de cloruro de metileno/metanol en diferentes proporciones.
“Una vez realizada la cromatografía, pasamos a su visualización. La gran parte de las placas
cromatográficas contienen un producto indicador fluorescente que permite la visualización de los
compuestos que son activos a la luz ultravioleta, concretamente a 254 nm. El indicador absorbe
la luz UV, y emite luz visible, por lo general de color verde. La presencia de un compuesto activo
que se encuentra en el UV evita que dicho indicador absorba luz en la parte en la cual hemos
colocado el producto, lo cual se traduce en ver una mancha en la placa lo que nos indica la
presencia de un determinado compuesto.
Cuando se trata de compuestos que no consiguen absorber la luz UV, la visualización del
cromatograma necesita usar un agente revelador. Dicho revelador debe reaccionar con los
productos que son absorbidos dando compuestos de colores. Por lo cual, el revelador a usar
depende del tipo de compuesto que queramos visualizar” (2)

4. METODOLOGÍA

Colocamos gotas de nuestra solucion que contiene los alcaloides que se

obtuvo previamente sobre la placa para realizar la cromatografia en
capa fina

Debemos asegurarnos que estas gotas se coloquen aproximadamente a

1 cm del borde

Colocal esta placa verticalmente en un vaso de presipitacion que

contiene el eluyente

Retirar la placa del vaso percatandonos antes de que el eluyent llegase

1 cm antes del borde

Colocar esta placa en el UV-visible y observar

Identificar con ayuda de un lapiz, las zonas donde se encontro los

compuestos en la placa

Realizar el revelado de los alcaloides

 5. RESULTADOS OBTENIDOS

2
1

RECORRIDO DEL ELUYENTE: 9

RECORRIDO DEL SOLUTO: 8

CÁLCULOS:
𝐷𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑑𝑒𝑙 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑡𝑜
𝑅𝑓 = Distancia recorrida del eluyente
8
𝑅𝑓 = 9
𝑅𝑓 = 0,889

MANCHAS RECORRIDO RF COLOR OBSERVADO EN

UV
1 6.2 0.688 Azul fluorescente

2 7 0.778 Azul fluorescente

(3)
 6. CONCLUSIONES:
 Para el proceso del fraccionamiento e identificación de alcaloides mediante cromatografía en
capa fina de la Banisteriopsis caapi., se siguió una serie de pasos, con la utilización de
disolventes mediante el cual se logró el fraccionamiento de alcaloides
 La fase estacionaria se encuentra colocada uniformemente, formando una finísima capa de un
espesor en torno a 0.1 mm, sobre un soporte o placa de vidrio o metal. La mezcla que deseamos
analizar se colocará a una corta distancia del borde inferior de la mencionada placa, la cual
introduciremos en una cubeta o recipiente que contendrá la fase móvil, o también llamado,
eluyente. La fase móvil irá ascendiendo poco a poco sobre la placa de la fase estacionaria a
través de capilaridad, desplazando a los diferentes componentes de la mezcla a analizar, a
distintas velocidades, lo que provocará la separación de la mezcla. Cuando el frente del
disolvente se sitúe próximo a la parte superior de la placa, sacaremos la placa de la cubeta con
la finalidad de dejarla secar para poder ver las manchas de los diferentes componentes.
 El eluyente usado está preparado con cloroformo (CHCl3), metanol (CH3OH) y EtNHeEt en
proporciones de 5:4:1 respectivamente que corresponde a 75 ml de cloroformo, 60 ml de
metanol y 15 ml de EtNHeEt.

7. RECOMENDACIONES

 Aprovisionarse del material necesario previo a la práctica.

 Realizar una limpieza profunda del material de vidrio necesario para llevar a
cabo la actividad.
 Usar todo el material de protección como son guantes, mandil, mascarilla y gorro

8. BIBLIOGRAFÍA

1. J.M. García-Segura. Técnicas Instrumentales de Análisis en Bioquímica. Editorial

Síntesis; 1996.
2. . D. Harvey. Mc Graw Hill. Química Analítica Moderna, Editorial Sintesis; 2002.
3. Hildeberg W. Medicamentos que contienen aceites esenciales (Aetherolea), bálsamos y
resinas oleo-goma. 2da ed. Germany: Springer; 1996.
ANEXOS

a) b) c) d)

NOTAS Categoría del Diagrama E.S.P.O.C.H

a) Cromatorrollo TLC de silica Facultad de Ciencias Lámina Escala Fecha
gel Bioquímica y Farmacia
b) Capilar fraccionado en la Por calificar Laboratorio de Recursos
mitad Naturales 1 1:1 20/05/2019
c) Preparación del eluyente
CHCl3
d) Preparación del eluyente
CH3OH
e) f) g) h)

NOTAS Categoría del Diagrama E.S.P.O.C.H

e) Preparación del eluyente Facultad de Ciencias Lámina Escala Fecha
EtNHeEt Bioquímica y Farmacia
f) Placa con el eluyente Por calificar Laboratorio de Análisis
g) Placa con el eluyente que ya Instrumental 2 2:2 20/05/2019
subió
h) Placa en el UV-Visible