Profª Ana Katerine de Carvalho Lima Lobato

Conceituação de biotecnologia
Áreas de atuação da biotecnologia
Produtos e serviços de origem biotecnológica
Evolução histórica
Processos biotecnológicos
Diferença entre bioprocessos e processos químicos
Etapas de um típico bioprocesso
Fatores importantes num bioprocesso
Agentes biológicos
Meios de cultivo
Estudo de caso
É o conjunto de conhecimentos que permite a utilização de
agentes biológicos (organismos, células, organelas,
moléculas) para obter bens ou assegurar serviços.

Agentes biológicos
Conhecimentos
Organismos, células,
Ciência e Tecnologia
organelas, moléculas

Biotecnologia

Resolver problemas
Fazer produtos úteis
Tratamentos de
Antibióticos...
despejos sanitários...

Fonte: Malajovich, 2009

 Biotecnologia
Conceituação
Áreas de conhecimento Bioquímica
Biologia molecular
Genética
Microbiologia
Cultura de células de
animais e vegetais

Química de produtos naturais

Química fina
Tecnologia das enzimas

Biologia Química
Biotecnologia
Industrial

Engenharia Química
Processos downstream
Purificação de produtos
Bioengenharia
Desenvolvimento de
processos scale-up
Engenharia
Biorreatores
Sistemas de controle

Fonte: Bonzani, 2001. Adaptado

 Biotecnologia
Aplicabilidade

• Energia

• Indústria

• Meio ambiente

• Agricultura

• Pecuária

• Alimentação

• Saúde
 Biotecnologia
Aplicabilidade

Energia
◦ Etanol
◦ Fermentação alcoólica
É o processo biológico anaeróbico
em que os açúcares de plantas são
convertidos em álcool, por meio da
ação de MOs.
 Biotecnologia
Aplicabilidade

Energia
◦ Biogás

Fonte: http://energia-biomassa.blogspot.com.br/2011/10/biogas.html
 Biotecnologia
Aplicabilidade

Produção de biogás Polímeros complexos

Digestão anaeróbica (Matéria orgânica)

Proteínas Carboidratos Ácidos Graxos

Hidrólise
Aminoácidos Açúcares Ácidos graxos de cadeia longa

Acidogênese
Ácidos graxos voláteis e álcoois
Acetogênese
Hidrogênio, Acetato
Dióxido de carbono

Metanogênese Metano
Dióxido de carbono Redução
Redução de sulfato
de sulfato
Sulfato de hidrogênio
Dióxido de carbono
 Biotecnologia
Aplicabilidade

Energia
◦ Biohidrogênio a partir de algas
Produzido diretamente no interior das células das microalgas pelas
enzimas hidrogenases
Através da fotólise da água
4 0 →2 4

Luz solar Luz solar

H2, CO2
H2O Crescimento Produção de H2 Separação e
CO2 da biomassa utilização
CO2
CO2 O2 H2O
H2O
 Biotecnologia
Aplicabilidade

Energia
◦ Recuperação de petróleo (MEOR)
 Biotecnologia
Aplicabilidade

Indústria
◦ Butanol
◦ Acetona
◦ Glicerol
◦ Ácidos
◦ Vitaminas
◦ Enzimas (têxtil, de detergentes)
 Biotecnologia
Aplicabilidade

Meio ambiente
◦ Biorremediação
Tratamento de águas servidas e de lixo

Eliminação de poluentes
 Biotecnologia
Aplicabilidade

Agricultura
◦ Adubo
◦ Silagem
◦ Biopesticidas
◦ Biofertilizantes
◦ Mudas de plantas livre de doenças
◦ Mudas de árvores para reflorestamento
 Biotecnologia
Aplicabilidade

Agricultura
◦ Plantas com características novas incorporadas (transgênicas)
Maior valor nutritivo

Resistência a pragas e/ou condições de cultivo adversas (seca, salinidade)

 Biotecnologia
Aplicabilidade

Pecuária
◦ Embriões
◦ Animais com novas características (transgênicos)
◦ Vacinas
◦ Medicamentos para uso veterinário
 Biotecnologia
Aplicabilidade

Alimentação
◦ Panificação (pães, biscoitos)
◦ Laticínios (queijos, iogurtes,
bebidas lácteas)
◦ Bebidas (cervejas, vinhos,
aguardente, bebidas destiladas)
◦ Aditivos (shoyu, adoçantes)
◦ Alimentos de origem transgênicas
com novas propriedades
 Biotecnologia
Aplicabilidade

Saúde
◦ Antibióticos
◦ Medicamentos
◦ Hormônios
◦ Reagentes
◦ Testes para diagnóstico
◦ Vacinas
 Fluxos de entrada
SO4 PO4 O2 H Gro GLC FACoA ACP AA NH3
v8 v7 v6 v5 v4 v3 v2 v1 v11...v28 v9

Glco ADPGlc Glicólise Biossíntese de His

v65 v64 Histidina v113
G1P v31 PRPP
v63
Biossíntese de carboidratos v42 v43
G6P Ru5P
Açúcares v44 v139
polipeptídicos Reações de ácido fólico v32 v47
G1P THF Form MTHF R5P
v211 v169 v170 v171 v172 F6P S7P

Fluxo de materiais EstPyr

v216 ForTHF MetTHF MeTHF v34
PGA3
v45
XyL5P

Substrato v212
v213
Biossíntese
fam ília do Gly v115 Ser
v37
v46

Metabólitos intermediários v218

OdiGlu Serina
Cys v117
v114 PG3 E4P
Pentose fosfato
Biossíntese dos AA
Biomassa dRodi dFuc dRodo Biossíntese
v162 v39
Arom áticos Phe
fam ília do Aspartato v79 v80 v81
Produtos do metabolismo v122
Adomet Ile
v103 v60
PEP
v62
Chor Prep
v83
C Met Thr v40 v84 v86 Tyr
O v121 v120 v91 Pyr Trp
S Rhod Hcy Hse v59
M MaCoA v95 v90 v110 Ala Leu
O v206 Lys AspSA v61 v48 v97 v100
M v207 ProCoA v88 v89 OIV
I Asn Asp AcCoA Biossíntese v98
C v198 v87 v194 fam ília do Alanina Val
I MaCoA
N Biossíntese da
A Cos v67 v66 OAA Cit v50 Icit fam ília do Glutam ato
v49 GluSA Pro
Biossíntese de v56 v51 v104 v105
Ácidos graxos MaACP AcACP Mal Glx v161
Palm HexACP v58 v57 OG Glu Gln
v69 v68 v55 AcCoA v52 v153 v154
v106
NADH v189 v188 Fum Suc SucCoA Orn
ATP ADP v54 v53 v107
FADH2 v190 Ciclo do ácido tricarboxílico
Transporte de elétrons Citr Arg
e fosforilação oxidativa v109

Fluxos de saída
v186 v219 v221 v222 v223 v224 v225 v226 v220
Biom assa Ac CO2 Cos Form H NH3 Pyr Adocys 18
 Biotecnologia
Evolução histórica

Na Antiguidade
6.000 a.C. - bebidas alcoólicas (cerveja e vinho) são
produzidas por sumérios e babilônios

2.000 a.C. – panificação, bebidas fermentadas (iogurtes)

e queijos são utilizadas por egípcios e gregos
Século XVIII
• Primeira vacina contra varíola

Século XIX
• Pasteur chama de fermentação as reações bioquímicas causada
por microrganismos

• Desenvolvimento da fermentação industrial (ácido lático,

etanol, vinagre)
Século XX
◦ Síntese de glicerol, acetona e ácido cítrico
◦ Descoberta da Penicilina por Alexander Fleming
◦ Antibióticos são produzidos em larga escala por
processos fermentativos – Engenharia Bioquímica
◦ James Watson e Francis Crick descrevem a estrutura
do DNA
◦ Técnica do DNA recombinante – Engenharia Genética
◦ Produção de Insulina Humana
Século XXI
◦ Desenvolvimento de espécies transgênicas (OGM)
◦ Fabricação de órgãos humanos
◦ Novas tecnologias conceptivas
◦ Mapeamento sequencial do genoma humano
◦ Intervenções genéticas
◦ Experimentos com células-tronco embrionárias
◦ .....
 Processos conduzidos por agentes biológicos e
definidos como um conjunto de operações que efetuam:

Esterilização Processos de
Tratamento da (quando o separação e
matéria- processo purificação de
prima/resíduo demandar) produto(s)

Preparo Transformação
dos meios dos substratos
em produto(s)
por rota
bioquímica
Processos fermentativos com microrganismos naturalmente
ocorrentes ou recombinantes

Processos com células animais ou vegetais

Processos enzimáticos

Tratamentos biológicos de resíduos e efluentes

 Bioprocessos versus Processos Químicos
Bioprocessos Processos Químicos
Decorrentes da atividade biológica Decorrentes das reações químicas

Biocatalisadores (células, enzimas) Catalisadores químicos

Catalisadores de alta especificidade Catalisadores não específicos

Condições brandas de T, P e pH Condições drásticas de T, P e pH

Maiores volumes Menores volumes

Podem requerer esterilidade Não requerem esterilidade

Fonte: Pereira Jr., 2008 modificado

 Upstream

Seleção do MO; preparo do inóculo

Transformação

Downstream
 Tratamento da
matéria-
matéria-prima

Preparo do Efluente/ Tratamento/

meio Resíduo Aproveitamento

Esterilização Biorreator
de
produção
Biorreator de Meio
propagação isento de
Separação
de células células

Inoculação Filtração Purificação da

do ar biomolécula
Biomassa
Banco de extracelular
células
Aeração
Rompimento
celular Biomolécula
Biomolécula com alto grau
com alto grau Purificação da de pureza
de pureza biomolécula
intracelular
Efluente/ Efluente/
Tratamento/
Resíduo Resíduo
Aproveitamento
 Agente
biológico

Etapas de
Meio de
purificação do Sucesso
cultura
bioproduto

Forma de
condução do
processo
 Tipos

Células Animais Células Vegetais

Bactérias

Fungos e Leveduras
Enzimas
Formas de obtenção
Formas de obtenção dos microrganismos
◦ Isolamento a partir de recursos naturais
Muito trabalho experimental
Custo relativamente elevado
Isolamento de linhagens melhor produtoras
Descoberta de novos produtos
Formas de obtenção dos microrganismos
◦ Compra em coleção de culturas
Viável
Coleções de cultura em diversos países
European Culture Collections’ Organisation (ECCO)
Agricultural Research Service Culture Collection - USA
EMBRAPA (Brasil)
CCMB (Brasil – Bahia)
Limitações de especificidade
Formas de obtenção dos microrganismos

◦ Obtenção de mutantes naturais

Surgimento a partir da proliferação de células
Evolução da espécie
Não são interessantes para o processo fermentativo
Isolados e ensaiados – verificar sua potencialidade
Podendo levar a linhagens de interesse prático
Sua obtenção demanda tempo
Formas de obtenção dos microrganismos

◦ Obtenção de mutantes induzidos por métodos convencionais

Radiação ultravioleta
Substâncias químicas mutagênicas

Verificação
da direção
da mutação
S. olindensis DAUFPE 5622 – Cepa selvagem

S. olindensis ICB20 – Cepa mutante (mutagêneses utilizando

metil-metano-sulfonato)

ICB20 maior produtividade em retamicina

36
Formas de obtenção dos microrganismos

◦ Obtenção de MOs recombinantes por técnicas de engenharia

genética
Tecnologia do DNA recombinante
Modificação genética –
reprimir AG
Regulação da expressão
genética do gene FabH
↑µp – 60%

38
Características desejáveis
 Características desejáveis

◦ Apresentar elevada eficiência na conversão de substrato em produto

Fonte orgânica de carbono

Matérias-primas – custo de produção – 40-80%
 Características desejáveis

◦ Permitir acúmulo de produtos no meio

Condições de não inibição custos de recuperação
Fermentação alcoólica – inibição das leveduras (8-10%) pelo etanol
 Características desejáveis

◦ Não produzir substâncias incompatíveis com o produto

Degradação
Inativação
Ideal é a produção de um reduzido número de metabólitos
Características desejáveis

Tolerante e resistente a substâncias tóxicas

Provenientes das etapas de upstream – tratamento da MP
Presentes no meio – resíduos e efluentes
 Características desejáveis

◦ Apresentar constância quanto ao comportamento fisiológico

Conhecimento das técnicas de preservação – etapas de estocagem
Manutenção da sua produção durante todas as etapas do processo fermentativo
Possibilidade de ser reaproveitado no processo
Características desejáveis

Estabilidade sob condições ambientais extremas

Elevada pressão osmótica do meio
Elevada temperatura
Elevada força iônica
 Características desejáveis

◦ Não ser patogênico

Manipulação sem riscos ambientais – término do processo fermentativo
Cultivos de patogênicos – câmaras assépticas
 Características desejáveis

◦ Não exigir condições de processos muito complexas

Economia da produção
Apresente faixas de valores ótimos (pH, T...) para a produção do
produto e não valores pontuais
Bom desempenho em baixas condições de oxigênio dissolvido
Utilização de sistemas de controlador de espuma ou adição de
antiespumante
 Características desejáveis

◦ Não exigir meios de cultura dispendiosos

Economia de processo produtivo
Estudo e conhecimento das necessidades nutricionais do MOs
Avaliar a adição de precursores para o produto
 Características desejáveis

◦ Permitir a rápida liberação do produto para o meio

Permeabilidade da membrana celular
Condições de cultivo (pH..)
 Microrganismo Bioproduto
Saccharomyces cerevisiae Cerveja, vinho, saquê, cachaça, etanol
Aspergillus niger Ácido cítrico
Lactobacillus bulgaricus Ácido lático, bebidas lácticas
Aspergillus aureus Pectinases
Acetobacter sp. Vinagre
Penicillium chrysogenum Penicilina G
 Esquema simplificado do metabolismo celular

Produtos
Acoplamento energético

Fonte: Lehninger, 1988

Nutrição dos microrganismos
◦ Fontes de Energia – ATP, NADP, FAD....
Luz, substratos inorgânicos e substratos orgânicos
◦ Fontes de Carbono – Carboidratos, proteínas, lipídios, ácidos
nucléicos
Glicose, frutose, manose, galactose
◦ Fontes de Nitrogênio – Aminoácidos, ácidos nucléicos
Nitratos, amônia, nitrogênio gasoso, aminoácidos, bases purínicas e
pirimidínicas
◦ Fontes de Minerais – Funções estruturais e fisiológicas
Hidrogênio, oxigênio, fósforo, enxofre, potássio, cálcio, magnésio,
sódio, ferro, cloro, manganês, cobre, zinco, molibdênio, cromo, níquel,
cobalto e boro
Fatores de Crescimento – Enzimas e coenzimas
Aminoácidos, substâncias orgânicas e vitaminas
Tipos
◦ Classificação física
Sólido
Semi-sólido
Líquido
◦ Classificação química
Sintético – composição química definida
Natural – materiais complexos
Extrato de levedura, extrato de carne, melaço...
Características desejáveis
◦ Composição adequada ao crescimento do agente biológico e à
formação do produto de interesse
◦ Baixo custo de obtenção, beneficiamento, transporte e estocagem
◦ Auxiliar no controle do processo (meios tamponados)
◦ Elevada disponibilidade e facilidade de padronização dos
componentes
◦ Não contribuir para dificultar os processos de separação do
produto
◦ Não causar dificuldades no tratamento final do efluente
Otimização do meio de cultivo
◦ Efeitos dos componentes individuais do meio
Fontes de carbono
Fontes de nitrogênio
◦ Combinações dos componentes (planejamento fatorial)
◦ Descarta-se os compostos repressores
◦ Mantem-se os compostos que estimula-se ou induz-se a
síntese de enzimas
Influência do meio de cultivo e MOs na produção de
bioprodutos (Estudo de caso)
Identificar o produto e importância
Identificar o setor de atuação
Etapas de produção
Identificar o biocatalisador
◦ Características que influenciaram na escolha
◦ Forma de obtenção
Meio de cultivo
◦ Identificar as fontes de C, N, ...
◦ Tipo de meio usado (físicas e químicas)
◦ Características do meio que influenciaram na escolha
◦ Estratégia usada pra otimização do meio
Livro Fundamentos (Volume 1)
◦ Capítulo 1 (itens 1.3 e 1.4)
◦ Capítulo 9
Livro Engenharia Bioquímica (Volume 2)
◦ Capítulo 2