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Núcleo de Sucre
Escuela de Ciencias
Departamento de Biología
Bioquímica I
DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS
METODOS DE BIURET Y LOWRY
Sección: 04
Cumaná, noviembre de 2014
INTRODUCCION
Se agitó suavemente cada uno de los tubos y se dejó reposar a los tubos
durante 20 min. Se procedió a medir en el espectrofotómetro, ajustándose el
mando de selección de la longitud de onda del espectrofotómetro a 540 nm. Se
ajustó el cero de absorbancia con la solución blanco exenta de proteína (tubo
1).
Se midieron las absorbancias de los tubos 2 a 6. Siempre que se
realizaron las medidas desde la solución menos concentrada (tubo 2) a la más
concentrada (tubo 6), se cometerá el mismo error de medida, por lo que no
será necesario enjuagar y secar la cubeta después de cada medición. Luego se
procedió a medir las concentraciones problemas tubos 7 y 8.
Método de Lowry
La determinación de proteínas de acuerdo al reactivo de fenol de Folin-
Ciocalteu´s es muy sensible. La cantidad de color, sin embargo, varío con las
diferentes proteínas y el color no es estrictamente proporcional a la
concentración. Este método pudo determinar concentraciones de proteínas en
el orden de 5-200 µg/ml.
Curvas de calibración
Para comparar dos curvas de calibración, se requiere medir la bondad del
ajuste de los patrones, De los valores estadísticos el coeficiente de correlación
es el más popular. Un valor de +1 indica una relación lineal perfecta entre la
absorbancia y la concentración.
RESULTADOS
TUBOS 1 2 3 4 5 6
t 0 75 59 46,5 37 31
Abs 0 0,12 0,23 0,33 0,43 0,51
𝑨𝒃𝒔 = 𝟐 − 𝒍𝒐𝒈 𝒕
X 0,2 ml
0,1 mg 1 ml X = 0,04 mg
X 0,4 ml
0,1 mg 1 ml X = 0,06
mg
X 0,6 ml
0,1 mg 1 ml X = 0,08 mg
X 0,8 ml
0,1 mg 1 ml X = 0,1 mg
X 1 ml
𝐘𝟐 − 𝐘𝟏
𝐦=
𝐗𝟐 − 𝐗𝟏
0,33 − 0,23 0,1
m= = =5
0,06 − 0,04 0,02
Abs DEL TEJIDO DE PROTEÍNA
0
𝐴𝑏𝑠−0
Y = mx + b 𝑚𝑔 =
𝑚
0,20 − 0
𝑚𝑔 = = 0,04 𝑚𝑔
5
𝐦𝐠 𝐝𝐞 𝐏𝐫𝐨𝐭𝐞í𝐧𝐚𝐬
[𝐏𝐑𝐎𝐓𝐄Í𝐍𝐀] =
𝐦𝐚𝐬𝐚 𝐝𝐞 𝐡𝐮𝐦𝐞𝐝𝐚𝐝
0,04 mg
[PROTEÍNA] = = 1,82
0,022 g
DISCUSION
Voet, D.; J.G. Voet. 2004. Biochemistry. 3a ed. Wiley international edition.
USA.