OBJETIVOS:

1. Identificar a la cafeína por comparación de su tiempo de retención con el

obtenido en la sustancia de referencia.
2. Determinar el contenido de cafeína en refrescos de cola por cromatografía
en fase reversa (HPLC), con detección UV.

RESULTADOS

Figura 1. Perfil de elución del estándar de cafeína.

Figura 2. Perfil de elución de la muestra 1 (Pepsi Kick) para la cafeína

Figura 3. Perfil de elución de la muestra 2 (Pepsi Kick) para la cafeína.

Figura 4. Perfil de elución de la muestra 1 (Coca cola) para la cafeína

Figura 5. Perfil de elución de la muestra 2 (Coca cola) para la cafeína

 tR (min) Área bajo la curva Promedio

2.43 681731
Sustancia de Ẋ = 683618.5
referencia 2.48 685506 %DER = 0.28%

2.52 1077109
Muestra a (Pepsi Ẋ = 107919
Kick) 2.47 1081274 %DER = 0.19%

2.45 600764
Muestra b (Coca Ẋ = 601191
cola) 2.47 601618 %DER = 0.07%

CÁLCULOS:

Des. Estándar área bajo la curva (estándar cafeína) = 1887.5

Des. Estándar área bajo la curva (Pepsi Kick) = 2082.5
Des. Estándar área bajo la curva (Coca cola) = 427
𝐷𝑒𝑠𝑣.𝐸𝑠𝑡 1887.5
%DER (Estándar cafeína) = 𝑥 100 = 683618.5 𝑥 100 = 0.28%
𝑀𝑒𝑑𝑖𝑎

𝐷𝑒𝑠𝑣.𝐸𝑠𝑡 2082.5
%DER (Pepsi Kick) = 𝑥 100 = 𝑥 100 = 0.19%
𝑀𝑒𝑑𝑖𝑎 1079191.5

𝐷𝑒𝑠𝑣.𝐸𝑠𝑡 427
%DER (Coca cola) = 𝑥 100 = 601191 𝑥 100 = 0.07%
𝑀𝑒𝑑𝑖𝑎

mg de cafeína/100 mL:

10.4 mg (estándar) --------1 mL

X--------------------------------100 ml
X = 0.104 mg -------- diluido 1:10 = 0.0104 mg

mg cafeína en Pepsi:

683618.5----------------0.0104 mg
1079191.5----------------X
X = 0.0164 mg/mL ----- 16.4 mg cafeína/100 mL

mg cafeína en Coca cola:

683618.5------------0.0104 mg
601191--------------X
X = 0.0091 mg/mL ------9.1 mg cafeína/100 mL
PREGUNTAS EXTRA:

1. ¿Cuál es la importancia de desgasificar la fase móvil y de filtrar la fase móvil

y la muestra?
Eliminar completamente la presencia de partículas de gases que puedan
interferir en la determinación, y para tener una muestra pura.

2. Mencionar los métodos de desgasificación más frecuentemente utilizados en

HPLC:
 Sonicación
 Helio Sparging
 Desgasificación electrónica en línea de flujo
 Inline Degassing

3. ¿En que difiere la cromatografía en la fase normal de la cromatografía de

fase reversa empleada, en cuanto a la fase estacionaria, fase móvil y orden
de elución?
Las separaciones de fase normal son muy sensibles a la presencia de agua
en el disolvente (fase móvil), para acelerar el equilibrio de la fase estacionaria
con el cambio de eluyente, los disolventes orgánicos usados en
cromatografía de fase normal tienen que estar saturados en un 50% de agua,
En la cromatografía de fase reversa, se necesitan disolventes muy puros de
calidad HPLC, para evitar que se degraden por impurezas las columnas, y
para minimizar el ruido de fondo de las señales del detector debido a los
contaminantes. La fase estacionaria en la cromatografía de fase reversa es
de tipo poroso y son poco solubles.

4. ¿Cuál es el porcentaje de consumo de cafeína en humano al día?

De acuerdo a la NOM-218-SSA1-2011, nos dice que no se debe de exceder de
165 mg de cafeína por día por el consumo de bebidas adicionadas con cafeína.

DISCUSIÓN:

CONCLUSIONES:

1. Se logró identificar y separar a la cafeína de acuerdo a los tiempos de

retención en muestras de refrescos de cola, presentando un tiempo de
tención mayor para la muestra de Pepsi Kick que la de Coca cola, en
comparación al estándar de referencia.
2. Se logró determinar el contenido de cafeína en muestra de Pepsi Kick y Coca
cola, teniendo un mayor contendí de cafeína (16.4 mg/100 mL) en muestras
de Pepsi Kick, y un contenido de 9.1 mg/100 mL de cafeína para la muestra
de Coca cola.

BIBLIOGRAFÍA:
 Harris C. D. Análisis químico cuantitativo. 3° Edición. Editorial Reverté. México.
2013. Pp 608-635
 Skoog A.D., Holler F.J., Nieman T.A. Principios de análisis instrumental. 5° Edición.
Editorial McGraw Hill. Madrid. 2001. pp 810-811.
 Rubinson K.A. Análisis instrumental. Editorial Prentice Hall. Madrid. 2001.