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Sistema ABO y Discrepancias

Ana Claudia Peron


Gerente Cientifica Bio-Rad para América Latina
ana_peron@bio-rad.com
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Sistema ABO - Consideraciones

• 1900 Landsteiner describió el primero grupo sanguineo,


• El Sistema ABO
 A, B y O (primeramente llamado C)
• 1902 AB fue identificado por De Castello y Sturli.
• 1930 Landsteiner recebió el premio Nobel.
• 1960 Watkins propuso que 2 glicosiltransferasis estaban
involucradas.
• 1990 Yamamoto clonó en gene ABO.

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Sistema ABO - Consideraciones

• Los Antígenos ABO son antígenos de histocompatibilidad.


• Cuando el indivíduo es secretor podemos encontrar los
antígenos en distintos tejidos

• Antígenos
– A (ABO 1);
– B (ABO 2);
– AB (ABO 3);
– A1 (ABO 4)

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Sistema ABO - Consideraciones

N°. 001
Nombre del sistema ABO
Símbolo del sistema ABO
Nombre del Gene ABO
Ubicación en LA cromosoma 9q34.2

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Sintesis deL Carbohidrato

Gene
Genetic level

Asa Helberg, TSC, 2017 - Brasil


Glycosyltransferase (GT)
Enzymatic level

Carbohydrate antigen
Glycoconjugate level

Antibodies
5 Immunological level
Caracterización del gene ABO

•Cromosoma 9q34.1- 9q34.2

•Codifica proteína de 353 aa,


presenta actividad de
glicosiltransferase sobre el
antígeno H

9q 34.1-2
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Estructura del gene ABO

Mapa físico del gene ABO

exon

Tamaño del DNA = 19,55 Kb


Tamaño del mRNA = 1064 pb

7 exons 6 introns
Con 28 a 688pb Con 554 a 12982pb

7
8
B
A2
A1

O2
O1

O1v
1
Exon

53G>T
2

106C>T
3
4

188G>A
189C>T

220C>T
5

261delG
Alelos ABO más comunes

297A>G

467C>T
526C>G
646T>A
Cartoon modified from Bahram Hosseini-Maaf

657C>T
681G>A
7

703G>A
771C>T
796C>A
802G>A
803G>C
829G>A
930G>A
1061delC
Antígenos del Sistema ABO

• Son estructuras complejas de


carboidratos unidos a las
glicoproteínas y glicolipídios.
Fucose

• Los ags del Sist ABO no son


productos primários de los
genes. (glicosiltransferases)

• En RN presentes en baja
cantidad

9
9
700.000 a
Antígenos del Sist ABO N-acetil- 1.300.000
Galactosamina
sítios/hematie

Fucose

Galactose

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Anticuerpos del Sist ABO

Anticuerpos
• Son regulares, naturales, IgM.
• Reaccionan desde 4ºC a 37ºC

• Individuos O ↑IgG
• Activan complemento a 37oC
Hemólisis intravascular

• EHFRN, generalmente de baja


intensidad / Ac maternos

• No están presentes en RN
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Implicaciones clínicas

Antígenos Anticuerpos

Receptores de patógenos Reacciones hemolíticas

Expresión alterada en algunas Incompatibilidad materno fetal


enfermedades (EHFRN)

Expresión alterada durante el Abortos expontaneos recorrentes


embarazo

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Tipificacón

Prueba directa Prueba Inversa

Buscamos la presencia o ausencia de


los Ags del Sistema ABO en los GR, Estudiamos la presencia o
utilizando Sueros(Ac) comerciales ausencia de los Ac Naturales del
(antiA, -B, -AB) Sistema ABO en el plasma
utilizando células con
fenótipos conocidos
(céls A1 y B)

¿Anticuerpos?
¿Antigenos ?
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Metodologias

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Sobre la prueba inversa
 No és Facultativa !

– No realizarla en muestras de Recién nacidos !


• Ac a partir de los 03-06 meses

– Después de los 65 años el título de los acs


disminuyen
• Algunas veces es difícil la identificación

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História clínica

Es posible que la
edad del paciente
tenga alguna
importancia cuando
veo una
discrepancia?

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¿Que es?

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Sistema ABO X Discrepancias

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Prueba directa X Prueba inversa

Direta Inversa

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¿Que son discrepancias ABO?

• Cuando ocurre incompatibilidad entre los resultados observados en la


prueba directa y la prueba inversa.

Toda discrepancia ABO debe ser aclarada


antes de la liberación de los resultados.

Todavía debemos liberar


la transfusión !!!!
21
21
En caso de transfusión de emergencia

En caso de transfusión de emergencia sin


tiempo para estudios complementários
para definirse el tipo ABO

Que hacer?

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Causas de las discrepancias
• La mayoria de las discrepancias son debidas a
ERRORES TÉCNICOS, tales como :

1. El uso incorrecto de reactivos -


INSERTO
2. Identificación incorreta de la
muestra
3. Error de interpretación y/o
transcrición de resultados
4. Falla al adicionar el reactivo
5. Contaminación bacteriana de los
reactivos
6. Super o sub-centrifugación
7. Vidrios mal limpiados
8. Equipos no calibrados, etc.

23
23
¿Frente a los resultados discrepantes, que hacer?

• Pergunte-se
– Que puede estar errado?

24
Pregunte, piense....

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Las discrepancias pueden ocurrir por causas

• Transfusión
• Embarazo
Adquiridas • Trasplante
• Enfermedad

• Quimerismo
• Débil/no expresión del
Heredadas antígeno de A y/o B
• Débil/no expresión del
antígeno de H

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Las características heredadas

mutaciones en la recombinación entre dos


región reguladora alelos ABO formando un
nuevo alelo híbrido

deleciones/inserciones mutaciones del


sitio del splice

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Causas de las discrepancias
• Anticuerpos • Anticuerpos
ausentes o débiles irregulares,
hiperproteinemia

Prueba inversa Reactividad extra


con reactividad en la prueba
débil o ausente inversa

Prueba directa Reactividad


débil o ausente extra en la
prueba directa

• Ausencia o poca • Presencia de


cantidad de Anticuerpos pegados
a los glóbulos rojos.
Antigenos
• Reacciones
inespecíficas

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Discrepancias ABO

Problemas en el suero/plasma:

 Ausencia de anticuerpos del sistema ABO

 Ac. irregular anti-A1

 Auto/alo ac. irregulares frios

29
29
Discrepancias ABO

Problemas con los hematíes:

 Formación de rouleaux
 Ags debilmente expresos

 Ag A o B debilitados en pacientes con leucemia


 Transfusión/ TMO reciente
 Poliaglutinación
 Quimera
 T.A.D positivo (IgG altos títulos RN)

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Subgrupos ABO

Que son
Subgrupos?

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Subgrupos ABO

• Subgrupos A:

Genes variantes 80%


– Aproximadamente llevan a la expresión
indivíduos disminuída
A/AB son A1;
de los antígenos en la membrana del eritrocito
– 19% A2,
– 1% otros subgrupos - A débiles
• (A3, Ax, Afinn, Amos,Ael,etc)

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32
Genética

33
33
A y B – Definición serológica

A1 B
A2

Decreasing antigen expression


A3 B3
Ax Bx
Afinn
Aweak Amos Bmos Bweak
Ael Bel

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* Anti-A/B pueden ser absorvidos y eluidos de estas celulas
Picture modified from Annika Hult
Subgroup RBC reactions with ABO substance Anti-A1

of A Anti-A Anti-A,B Anti-A1 Anti-H in saliva in serum


A3 2+/+ mf 2+/+ mf 0 4+ A, H No
Ax 0/+ 2+/+ 0 4+ H Often
Ael 0* 0* 0 4+ H Sometimes

Aend + + 0 4+ H Sometimes

Afinn + + 0 4+ H Yes
Abantu +/(+) +/(+) 0 4+ H Yes
Am 0*/+ 0*/+ 0 4+ A, H No
Ay 0* 0* 0 4+ A, H No

Subgroup RBC reactions with ABO substance Anti-B

of B Anti-B Anti-A,B NA Anti-H in saliva in serum


B3 mf mf NA 3+ B, H No
Bx (+) (+) NA 3+ (Bx), H Yes
Bm 0*/(+) 0*/(+) NA 3+ B, H No
B35
el 0* 0* NA 3+ H Sometimes
A1 X A2

Diferencias cuanto a los antígenos Diferencias en las transferases

• Cuantitativa: • pH optimo: A1 (pH 5.6) X A2 (pH 7-8)


• Diferencia de tamaño: La transferase
• A1 (~106 Antigenos por A1 es más pequeña que la A2)
hematie) X A2 (~2x105)

• Cualitativa: Distribución en los tejidos:


• Solamente la transferase • Hay muy pocos sitios A los
A1 puede repetir el riñones de los individuos A2, lo
epítope A tipo 3 que es que significa que los A2 pueden
específico del A1 ser trasplantados al O.

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37
Subgrupos ABO – Aspectos serológicos

• El azucar inmunodominante de los


subgrupos es idéntico a los originales.

• ¿ Es importante distinguir subgrupos en las


pruebas pré-transfusionales?

NO !
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Soluciones para resolver discrepancias

• Prueba Directa • Reactividad débil


• Reactividad ausente
• Reactividad extra

• Prueba Inversa • Reactividad débil


• Reactividad ausente
• Reactividad extra

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Casos prácticos de discrepancias

44
Casos prácticos de discrepancias

45
Casos prácticos de discrepancias

46
Casos prácticos de discrepancias

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Resúmen de como resolver discrepancias

Prueba Directa
Repetir las pruebas ( ***Cambiando la técnica a buscar resultados distintos)

 Utilizar reactivos COMERCIALES monoclonales/ Cambiar lotes de reactivos

 Hematies de cordón (lavar hematies 8- 10 X)

 En caso de muestra de RN , repetir las pruebas después de 6 meses ***

 Aumentar el tiempo de incubación y/o disminuir la temperatura de incubación

 Realizar TAD (auto-anticuerpos frios/calientes) / Lavar hematies con sol salina 37ºC/ID- Diluent 2

 Investigar los subgrupos (fenotipificación con lectinas (si necesario) / técnicas de fijación/eluición)

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Anti A1 – ¿Cómo probarlo ?

Prueba de
Comprobación del
amplitud
Anti A1 T.A. Resultado
37°C Definición
Definición
térmica
T.A.
Ac Frio sin
Plasma
Plasma X A1
X cel celulas A1 Positivo
Negativo
Positivo importancia clínica
Plasma X celulas A2 (?) Negativo Confirmado que es un
anti A1
Plasma X celulas O Ac reacciona a
Plasma X cel A1 Positivo Negativo
Positivo
37°C
49 Importancia clínica
Prueba Directa – Reactividad Débil

 Verificar el historico del paciente


(niño/transfusión/transplante)
 Aumentar el tiempo de incubación a TA o a 4°C

¿Esto es una discrepancia? Ex: Subgrupo de A


A débil (probable A3) A débil (probable Ax B )
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Prueba Directa – Reactividad Ausente

 * Fijación y eluición – Eluído reactivo con hematies A

Direta: “O” inversa: “A”

Resultado: A débil (probable Am)

51
Prueba Directa – Reactividad Ausente
Fijación y eluición – Eluído reactivo con hematies A

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Fijación

C
M I e
e N n
C t
z r
Anti A policlonal c U
i
B
l f
A
a g
R a
Hematíes del r
r
paciente

53
Elución

EJ: Elución ¿Que Ac esperamos encontrar?


Ácida
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Comprobación ?? ? ? ?
? ?

A A1 B O

Antígeno A

55
Prueba Directa – Reactividad Extra

Ex: Presencia de
auto-anticuerpos frios
 Lavar los hematies con ID-Diluent 2 a 37°C
 Realizar TAD (auto-anticuerpos frios/calientes)
 IgM en alto titulo – reacciones 4+ - Tratamiento de las células y/o suero con DTT (Thiol) –
destruición de las puentes SS

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Prueba Inversa – Reactividad ausente

Directa: “A” Inversa: “AB”

4 oC

Ex: anticuerpos anti-B en bajo título

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Prueba Inversa – Reactividad Débil/ Ausente

 Bajo título de los anticuerpos (RN/niños y ancianos)


 Ausencia de anticuerpos (hipo o agamaglobulinemia,
medicamientos)

¿Cómo solucionar ?
 Repetir las pruebas
 Verificar los datos clínicos (RN*/ niños, ancianos, enfermedad, medicamientos)
 Aumentar el tiempo y/o disminuir la temperatura de incubación

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Prueba Inversa – Reactividad Extra

Repetir PR a 37oC
Repetir PR con suero auto-adsorvido
Ex: auto-anticuerpos frios
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Prueba Inversa – Reactividad Extra

 Auto-anticuerpos frios libres en el plasma


 Aloanticuerpos (reactivos a TA: anti-M,-N,-Le,-P1)
 Enfermedades (fibrinogeno alto, hipergamaglobulinemia, utilización de
Expansores del plasma)

¿Cómo solucionar?
 Repetir las pruebas (chequear la temperatura de los reactivos y muestras)
 Incluir la prueba del autocontrole,
si positivo - Repetir Prueba inversa a 37ºC (auto-anticuerpos frios)/ auto-adsorción
si negativo - Pesquisar anticuerpos irregulares (repetir PR a 37ºC)

 Investigar subgrupos (presencia de anti-A1 natural )


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