Departamento de Ciencias de la Vida y la Agricultura

Ingeniería en Biotecnología
QUÍMICA AMBIENTAL

Nombre: Muñoz Gualotuña Alejandra. Fecha de entrega: 25/04/2019 NRC: 5198

Tema: Procedimiento para el muestreo de aguas y determinación de oxígeno disuelto.

1. OBJETIVO

Describir el procedimiento para el muestreo de aguas y determinación del oxígeno

disuelto.

2. APLICACIÓN

Este método se aplica para aguas limpias y residuales.

3. FUNDAMENTO DEL MÉTODO

Muestreo de Agua
El muestreo de agua se utiliza para determinar parámetros de calidad y confiabilidad del
agua (Barreto P., 2009) consiste en extraer una porción representativa de una masa de
agua con el propósito de examinar diversas características (Ramirez, 2007)
La recolección de las muestras de agua implica la utilización de frascos con capacidad de
250 a 300 ml, de plástico o vidrio, esterilizados, con tapa hermética y en lo posible de
boca ancha (INTA, 2011), es fundamental asegurarse que el rótulo sea seguro y que la
identificación sea unívoca, para que no se confundan o se pierda la trazabilidad de las
muestras, finalmente para conservar la muestra, deberá tomarse las precauciones de tal
forma que no experimente ninguna modificación desde el momento de su toma hasta su
análisis. Sin embargo, si la muestra ha sido conservada por veinticuatro horas para
realizar su análisis es recomendable mantener en refrigeración a ± 4ºC (±2ºC) (USAL,
2004).

Oxígeno Disuelto (OD)

El oxígeno es un elemento necesario para todas las formas de vida. El oxígeno se
introduce en el agua mediante difusión desde el aire que rodea la mezcla, por aeración
(movimiento rápido) y como un producto de desecho de la fotosíntesis. El OD es la
cantidad de oxígeno disuelto en el agua (CIMCOOL, 2004), puede expresarse en
miligramos por litro (mg/L) o en porcentaje de saturación (%). La primera de las
opciones expresa la masa de oxígeno por litro de agua, mientras que la segunda el
porcentaje de la concentración de saturación para una determinada temperatura
(Goyenola, 2007).
Los animales acuáticos suelen ser más vulnerables a bajas [OD] por la mañana en días
cálidos de verano, ya que las plantas acuáticas no producen oxígeno desde el atardecer
anterior.
La concentración de oxígeno disuelto (OD) puede asociarse con la corrosividad, actividad
fotosintética y grado de contaminación del agua (INEN, Norma Técnica Ecuatoriana,
NTE INEN 1106:2013, 2013), mientras que la disminución de OD se debe al aumento de
temperatura, presión y salinidad en el agua.
4. MATERIALES Y EQUIPOS

No se empleó ningún equipo, los materiales necesarios se enlistan a continuación.

 Botellas Winkler de 300 mL
 Vasos de precipitación de 10 mL
 Balones aforados de 100 mL
 Probeta de 50 mL
 Bureta de 50 mL
 Pipetas automáticas de 1 mL
 Termómetro

5. REACTIVOS

A continuación se enumera los reactivos que se emplearan en este procedimiento.

 Solución Sulfato Manganeso: Disolver 364 g 𝑀𝑛𝑆𝑂4 ∙ 𝐻2 𝑂 en agua destilada, filtrar y

diluir a 1 L.

 Solución de Álcali-Yoduro-Ácido: Para muestra saturada o menos que la muestra saturada,

disolver 500 g hidróxido de sodio (𝑁𝑎𝑂𝐻) y 150 g KI en agua destilada y diluir a 1 L.
Añadir 10 g de Azida de sodio (𝑁𝑎𝑁3), disueltos en 40 mL de agua destilada. Precaución: el
𝑁𝑎𝑂𝐻 concentrado es muy corrosivo para la piel. Usar guantes y lavar inmediatamente las
zonas afectadas.

 Ácido Sulfúrico concentrado (𝑯𝟐 𝑺𝑶𝟒 )

 Solución de Almidón: Disolver 2 g almidón soluble (grado de laboratorio) y 0.2 g ácido

salicílico como un conservante, en 100 mL de agua destilada caliente.

 Titulante estándar de Tiosulfato de sodio: disolver 6.205 g de 𝑁𝑎2𝑆2𝑂3.5𝐻20 en agua

destilada. Añadir 0.4 g de 𝑁𝑎𝑂𝐻 y diluir a 1 litro.

6. PROCEDIMIENTO

6.1. Toma y preservación de muestras

Se procederá de acuerdo a lo establecido en los métodos estándares para análisis de

agua y agua residual.

6.2. Determinación de oxígeno disuelto

1. Se recogió una muestra de agua en una botella Winkler de 300 mL.

2. Se eliminó el agua sobrenadante y se añadió por debajo de la superficie 1 mL de sulfato
manganosos (𝑀𝑛𝑆𝑂4 ) con una pipeta, y se agitó la mezcla vigorosamente.
3. Se agregó 1 mL del reactivo de álcali-yoduro-ácido, se desechó el exceso y se agitó
nuevamente.
4. Se dejó en reposo y hasta que el precipitado se asiente hasta 1/3 de la botella, se destapó el
frasco y se agregó 1 mL de ácido sulfúrico concentrado. Se tapó y agitó hasta que el
precipitado se disuelva.
 5. Se extrajo 97 ml de la muestra con los tres reactivos en una probeta de 50 mL.
6. Se tituló un volumen correspondiente a 200 mL de la muestra original con una solución
0,025M de tiosulfato de sodio (𝑁𝑎2 𝑆2 𝑂3), hasta obtener un color amarillo pálido.
7. Se añadió tres gotas de solución de almidón y se continuó la titulación hasta la primera
desaparición del color azul.
8. Se realizó el mismo procedimiento empleando una muestra de agua del grifo de la ESPE.

7. CÁLCULOS Y EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS

El cálculo del oxígeno disuelto se realizará con la siguiente ecuación:

𝑚𝑔
1 𝑚𝐿 𝑑𝑒 𝑁𝑎2 𝑆2 𝑂3 = 1 𝑑𝑒 𝑜𝑥í𝑔𝑒𝑛𝑜 𝑑𝑖𝑠𝑢𝑒𝑙𝑡𝑜
𝐿

Los datos obtenidos de la titulación se muestran en la Tabla 1.

Tabla 1: Volúmenes obtenidos de la titulación con 𝑁𝑎2 𝑆2 𝑂3

Tipo de muestra Volumen inicial de Volumen final de Volumen

𝑵𝒂𝟐 𝑺𝟐 𝑶𝟑 𝑵𝒂𝟐 𝑺𝟐 𝑶𝟑 consumido de
𝑵𝒂𝟐 𝑺𝟐 𝑶𝟑
Muestra de río 24 mL 31,3 mL 7,3 mL
(Santa Clara)
Muestra de grifo 31,3mL 36, 9mL 5,6 mL
(ESPE)

El volumen consumido se encuentra con la siguiente fórmula:

𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑐𝑜𝑛𝑠𝑢𝑚𝑖𝑑𝑜 = 𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑓𝑖𝑛𝑎𝑙 − 𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑖𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙
𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑐𝑜𝑛𝑠𝑢𝑚𝑖𝑑𝑜 = 31,3 𝑚𝐿 − 24 𝑚𝐿
𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑐𝑜𝑛𝑠𝑢𝑚𝑖𝑑𝑜 = 7,3 𝑚𝐿
Aplicando los datos obtenidos a la primera ecuación tenemos que la concentración de
oxígeno disuelto (OD) es igual al volumen consumido de 𝑁𝑎2 𝑆2 𝑂3 .
𝑚𝑔
7,3 𝑚𝐿 𝑑𝑒 𝑁𝑎2 𝑆2 𝑂3 = 7,3 𝑑𝑒 𝑜𝑥í𝑔𝑒𝑛𝑜 𝑑𝑖𝑠𝑢𝑒𝑙𝑡𝑜
𝐿
Como:
𝑚𝑔
= 𝑝𝑝𝑚
𝐿
La concentración de oxígeno disuelto en la muestra de río expresado en ppm es:
[𝑂𝐷] = 7,3 𝑝𝑝𝑚 𝑑𝑒 𝑜𝑥í𝑔𝑒𝑛𝑜 𝑑𝑖𝑠𝑢𝑒𝑙𝑡𝑜
Para la muestra de grifo (ESPE) realizamos el mismo procedimiento y aplicamos las
mismas fórmulas obteniendo la concentración de oxígeno disuelto:
𝑚𝑔
5,6 𝑚𝐿 𝑑𝑒 𝑁𝑎2 𝑆2 𝑂3 = 5,6 = 5,6 𝑝𝑝𝑚 𝑑𝑒 𝑜𝑥í𝑔𝑒𝑛𝑜 𝑑𝑖𝑠𝑢𝑒𝑙𝑡𝑜
𝐿
 Para determinar la concentración de saturación de oxígeno se emplea la fórmula:
1.575701 ∙ 105 6.642308 ∙ 107 1.243800 ∙ 1010 8.621949 ∙ 1011
ln 𝐶𝑠 = −139,34411 + − + −
𝑇 𝑇2 𝑇3 𝑇4
Conociendo que la temperatura del río es de 16ºC lo que corresponde a 289 K tenemos
que:
ln 𝐶𝑠 = −139,34411 + 545.2252592 − 795.285976 + 515.2963001 − 123.59875
ln 𝐶𝑠 = 2.2723254
𝐶𝑠 = 𝑒 2.2723254
𝑚𝑔
𝐶𝑠 = 9,67
𝐿
El porcentaje de saturación de la muestra de río obtenemos empleando la ecuación:
𝑂𝐷 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎
% 𝑆𝑎𝑡 = ( ) ∙ 100
𝐶𝑠
7,3 𝑚𝑔/𝐿
% 𝑆𝑎𝑡 = ( ) ∙ 100
9,67 𝑚𝑔/𝐿

% 𝑆𝑎𝑡 = 75,49 % ≈ 75%

8. ANÁLISIS DE LOS RESULTADOS

“El criterio de calidad de aguas de uso agrícola o de riego”, del Ministerio del Ambiente,
(2015) nos indica que el agua debe presentar 3 mg/L de oxígeno disuelto para que pueda
emplearse para la irrigación de cultivos y otras actividades complementarias que establezcan
los organismos competentes.

Tabla N° 1.- Criterios de OD para la preservación de la flora y fauna en aguas dulces, frías
o cálidas, y en aguas marinas y de estuario
Parámetros Expresado Unidad Límite máximo permisible
como Agua fría dulce Agua cálida Agua marina y
dulce de estuario
Oxígeno OD mg/l No menor al No menor al No menor al
Disuelto 80% del 60% del 60% del
oxígeno de oxígeno de oxígeno de
saturación y no saturación y no saturación y no
menor a 6 mg/l menor a 5 mg/l menor a 5 mg/l
Fuente: Libro VI, Anexo 1 TULAS. (Presidencia de la República, 2015)

El Ministerio del Ambiente, (2015) menciona mediante la Tabla 1., que para agua fría
dulce el criterio de calidad en % de saturación debe ser no menor al 80% del oxígeno de
saturación y no menor a 6 mg/l, de acuerdo a los datos obtenidos en el laboratorio de la
muestra de río correspondiente a 75%, condiciones que no permiten la presencia de vida
acuática, y la concentración de 7,3mg/l excede el valor estándar.
 El resultado de OD de la muestra de Agua de la llave, muestra claramente que la
concentración del parámetro analizado no cumple con el límite permisible por la ley, esta
indica que no debe ser menor a 6 mg/L, siendo en promedio un valor de 5,6 mg/L lo
obtenido, pero aplicando un proceso de desinfección es considerada aceptable. Esto se
debe a que la fuente del agua que se utiliza en la universidad, es proveniente de un pozo
cuyo nivel freático es bajo, por lo cual esta agua no tiene la suficiente aireación.

9. CONCLUSIONES

La muestra de agua del río Santa Clara presento porcentaje de saturación de 75% y una
concentración de OD de 7,3 mg/l mientras que la OD de la llave fue de 5,6 mg/l. Los
resultados de OD de ambas muestras nos indican que son aguas que se encuentran en
rangos aceptables, mientras que el 75% de saturación de oxígeno de la muestra de río nos
indica que no hay la presencia de matería orgánica.

10. RECOMENDACIONES

Para el muestreo de aguas es necesario partir desde los parámetros que se necesitan
analizan, y de esta manera manejarse bajo un proceso ordenado de protocolos y normas
realizar un buen análisis que tenga validez.

11. REFERENCIAS

12. CUESTIONARIO

a) Demostrar que para el procedimiento de Determinación de OD indicado:

𝑚𝑔
1 𝑚𝐿 𝑑𝑒 𝑁𝑎2 𝑆2 𝑂3 = 1 𝑑𝑒 𝑜𝑥í𝑔𝑒𝑛𝑜 𝑑𝑖𝑠𝑢𝑒𝑙𝑡𝑜
𝐿
Los miliequivalentes gastados de solución valorada de Tiosulfato de Sodio (Na2 S2 O3 )
son iguales a los miliequivalentes de Yodo presentes en la solución, lo que nos indica
que la cantidad de yodo I2 liberado es equivalente al oxígeno O2 que se encuentra en la
muestra, por lo tanto tenemos que:
Eq Na2 S2 O3 = Eq I2 = Eq O2
EqNa2 S2 O3 = N ∗ V

Suponiendo que los datos obtenidos en la experimentación son los siguientes:

 Volumen de tiosulfato de sodio gastado: 1,80 mL
 Normalidad del tiosulfato de sodio: 0,01 N
 Volumen de la alícuota de muestra que contiene OD: 25 mL
Eq
Eq Na2 S2 O3 = 0,01 ∗ 1,80 ∗ 10−3 L = 1,8 ∗ 10−5 Eq
L

Por lo tanto el número de equivalentes (Eq) de O2 son: 1,8 ∗ 10−5 Eq

O2
Eq O2 = gramos de
PE
 gramos de O2 = Eq O2 ∗ PE

Donde (PE) es el peso equivalente, para el O2 corresponde a: 8g/Eq

8g
gramos de O2 = 1,8 ∗ 10−5 Eq ∗ = 1,44 ∗ 10−4 g de O2
Eq

mligramos de O2
Parte por millón de O2 (ppm) =
Volumen de alícuota (L)

0,144 mg
ppm O2 =
25 ∗ 10−3 L
mg
ppm O2 = 5,76 = 5,76 ppm O2.
L

b) Describa el fundamento de un método instrumental para determinar el oxígeno

disuelto y compare sus ventajas e inconvenientes con el método de Winkler.

Método: Electrométrico-Medidor de oxígeno y SI

Fundamento:
El método electrométrico se basa en la tasa de difusión de oxígeno molecular a través
de una membrana plástica permeable al oxígeno, que recubre un elemento sensible
de un electrodo y actúa a la vez como barrera de difusión contra muchas impurezas
que interfieren en los otros métodos para la determinación de Oxígeno Disuelto
(Navarro, 2007). Bajo condiciones regulares, la “corriente de difusión” es lineal y
directamente proporcional a la concentración del O.D.

El medidor de OD USI 52 es un instrumento basado en un microprocesador

designado para medidas en campo y en el laboratorio del oxígeno disuelto. Los
electrodos de YSI de OD usan protectores de membrana, sensores polarográficos tipo
Clarck con termistores hechos para medida y compensación de temperatura. Una
membrana permeable delgada, extendida sobre el sensor permeable al oxígeno cubre
una celda electrolítica consistiendo de un cátodo de oro y un ánodo de plata,
elementos del sensor aislantes del medio ambiente, excepto del oxígeno y ciertos
gases permitidos a entrar (Biologika, 2018).

Ventajas con el método Winkler

El método de determinación por electro de membrana es recomendado para muestras

que contengan sustanciales tales como sulfito, tiosulfato, politionato, mercaptanos,
cloro libre o hipoclorito, sustancias orgánicas fácilmente oxidables en medio
alcalino, yodo libre, color o turbidez intensos y agregados biológicos, que interfieren
con la determinación del Oxígeno Disuelto por el método Winkler y sus
 modificaciones. En el método Winkler ciertos agentes oxidantes liberan yodo a partir
del yoduro (interfiriendo de manera positiva) y algunos agentes reductores
transforman el yodo en yoduro (interferencia negativa); la mayor parte de materia
orgánica se oxida parcialmente cuando se acidifica el precipitado de manganeso
oxidado, lo que causan errores negativos. (Navarro, 2007)

Limitaciones e interferencias del método Electrométrico-Medidor de oxígeno y

SI comparado con el Método Winkler
El uso prolongado de electrodos de membrana en aguas que contienen gases como el
sulfuro de hidrógeno, tiende a disminuir la sensibilidad de la celda, interfiere si el
potencial aplicado es mayor que el potencial de onda media de ion sulfuro; si el
potencial aplicado es menor, no ocurre la reacción interferente, pero puede tener
lugar un recubrimiento del ánodo con el sulfuro del metal anódico. Esta interferencia
se elimina mediante el cambio y la calibración frecuente del electrodo (Rodier,
1997).

Las sales inorgánicas disueltas afectan el funcionamiento de las sondas de O.D. Las
membranas responden a la presión parcial del oxígeno, la cual es a la vez función de
la salinidad de la muestra. A partir de los datos de saturación de OD contra salinidad
se pueden calcular factores de conversión, sin embargo factores para sales
específicas deben calcularse experimentalmente.

Los gases reactivos como el cloro interfieren con el desempeño del electrodo, por
ejemplo, el cloro despolariza el cátodo y origina una salida de la señal mayor al valor
esperado. (Navarro, 2007)

c) Complete la siguiente tabla 1, de Procedimientos oficiales aplicables en Ecuador, para

recolección y preservación de muestras instantáneas de agua según lo establecido por
las Normas Ecuatorianas (Normas INEN), la EPA (Environmental Protection Agency),
así como los SM (Métodos Estándares para Análisis de Agua y Agua Residual).

Nombre y número de procedimiento

Parámetro INEN EPA SM
NTE INEN 0978 agua METHOD:377.1 Sulfite- 4500 SULFITE
potable. Determinación de titration . Iodometric Method
Sulfatos Sulfatos
NTE INEN-ISO 9963-1 Method 310.1: Alkalinity by
Calidad del agua. Titration. 2320 ALKALINITY. Titration
Determinación de la method
alcalinidad. Parte 1:
DETERMINACIÓN DE
LA ALCALINIDAD
TOTAL Y COMPUESTA
(ISO 9963-1:1995,IDT)
Alcalinidad PARTE 2:
DETERMINACIÍN DE
LA ALCALINIDAD DEL
CARBONATO (ISO 9963-
2:1994,IDT)
Coliformes
fecales
Coliformes
totales
NTE INEN 1203:85 Agua. Method 410: CHEMICAL 5220 CHEMICAL OXYGEN
Demanda química de OXYGEN DEMAND (COD DEMAND (COD)*
DQO oxígeno (DQO) * 6

DBO
NTE INEN-ISO 6468: EPA Method 8081: GC 6630 ORGANOCHLORINE
Determinación de ciertos Analysis of Organochlorine PESTICIDES. Liquid-liquid
Insecticidas Pesticides on Equity®-5 extraction gas chromatographic
organoclorados,
method I
Cromatografía de gases
Pesticidas Con extracción líquido-
Clorados Líquido (ISO 6468:1996)
*Los datos detallados en la tabla son de fuentes de (INEN, Instituto Ecuatoriano de
Normalización, 2013)
 d) Complemente la siguiente tabla comparativa de los procedimientos para recolección y preservación de muestras instantáneas de agua
(los parámetros se indicarán en la práctica).

PARÁMETRO TIPO DE RECIPIENTE MÉTODO DE PRESERVACIÓN TIEMPO MÁXIMO DE OBSERVACIONES GENERALES AL

PRESERVACIÓN PROCEDIMIENTO DE MUESTREO
INEN EPA SM INEN EPA SM INEN EPA SM
Cloro Residual Plástico o Plástico Plástico o ND ND Analizar ND Analice ND Transportar en obscuridad. Realizar el
Vidrio o Vidrio Vidrio inmediatame inmedia análisis lo antes posible.
nte tamente
Oxígeno Vidrio Vidrio Vidrio Fijar el oxígeno Mantener a ND 4 días a lo 4h-8h ND Fijar el oxígeno de acuerdo con el
Disuelto (300ml) en el sitio y 10-20 ºC en la mucho método de análisis usado
guardar en la obscuridad
obscuridad
Demanda Plástico o Plástico Vidrio Se enfría a 1 °C Refrigerarse y Refrigerar 24 horas 1 día Mantener muestras almacenadas en la
bioquímica de Vidrio o Vidrio ámbar y 5 °C mantener en la 4ºC oscuridad. En caso de congelación para -
oxígeno (DBO) oscuridad 20 °C: 6 meses (1 mes si <50 mg/L)

Demanda Plástico o Plástico Plástico o Refrigerar, Acidificar con Congelar a - 28 días 1 30 días Envases de vidrio son preferibles para
química de Vidrio o Vidrio Vidrio agregar H2S04 ácido sulfúrico 20 ºC semana muestras con baja DQO (<5 mg / L)
oxígeno (DQO) hasta pH < 2 a pH 1 a 2

Metales Plástico o Plástico Plástico o Filtración en el HNO3 a pH<2 Acidificar la 1 mes 6 meses 6 mese El aluminio disuelto y el adherido a la
Vidrio o Vidrio Vidrio lugar del muestra, materia en suspensión se pueden
muestreo y Filtrar y determinar en la misma muestra.
acidificación del refrigerar a
filtrado a pH < 2 4ºC
Detergentes Vidrio Plástico ND Refrigerar entre Frío, 4°C ND 48 h 48 ND Lave el recipiente de vidrio como se
(Surfactantes) o Vidrio 2°C y 5°C horas describe en ISO 7875-1 y 7875-2.
Analizar las muestras tan pronto sea
posible.
Grasas y Vidrio Vidrio Vidrio Cuando sea Frío, 4°C, HCl Agregar HCl 24 h 28 días ND Se recomienda adicionar el agente de
Aceites lavado con posible extraer o H2SO4 a hasta pH 2, extracción inmediatamente luego de
el solvente en el sitio y pH<2 refrigerar a recoger la muestra; o realizar la
usado en la refrigerar entre 4ºC extracción en el sitio.
extracción. 2°C y 5°C
Coliformes Recipiente Plástico Plástico o Refrigerar entre Frío, 4°C, ND 8 h (agua 6h 8h Para aguas clorinadas o bromatadas la
Fecales estéril o Vidrio Vidrio 2°C y 5°C 0,008% potable, muestra se debe recoger en un frasco que
estéril Na2S2O3 agua contenga tiosulfato de sodio [0,1 cm3 de
superfici una solución al 10% de Na2S2O4 por
al, de cada 125 cm3 de muestra]. Para aguas
pozo y que contengan concentraciones de
lodos) metales pesados superiores a 0,01 mg/l,
adicionar al recipiente 0,3 cm3 de EDTA
al 15 % por cada 500 cm3 de muestra
*Los datos detallados en la tabla son de fuentes de (INEN, Instituto Ecuatoriano de Normalización, 2013) (Barreto, 2009), (Duncan, Harvey, &
Walker, 2007) (EPA, 2017)