CIARTEC LAMAR Vol. 1 No.

Estudio preliminar de la Identificación de Cryptococcus neoformans en

excretas de palomas en la zona metropolitana de Guadalajara Jalisco

Varelas Blanco Blanca Alicia1, Rivera Aguirre César Andrés2, René Crocker
Sagastume3, Fernández Galindo David Adrián4.

1.- Profesora investigadora de la Universidad Guadalajara Lamar. Guadalajara, México.

2.- Estudiante programa Delfín 2017. Universidad de Occidente, Los Mochis, México.
3.- Profesor investigador titular del Instituto Regional de Investigación en Salud Pública de la
Universidad de Guadalajara/Coordinador de Investigación de la Universidad Guadalajara Lamar.
Guadalajara, México.
4.- Profesor de la Universidad Guadalajara Lamar. Guadalajara, México.
Autor de correspondencia: Varelas Blanco Blanca Alicia.
Correo: bvarelasb@lamar.edu.mx

Resumen
La Criptococosis es una patología ocasionada por el hongo oportunista Cryptococcus neoformans, que
afecta principalmente a personas con problemas inmunológicos. Objetivo: determinar la presencia de
Cryptococcus neoformans en excretas de palomas en la zona metropolitana de Guadalajara Jalisco.
Material y métodos: Se realizó un estudio transversal donde se cultivaron 15 muestras de excretas de
palomas, provenientes de las Zona metropolitana de Guadalajara en agar Sabouraud dextrosa con
cloranfenicol. Posteriormente en las muestras que presentaban un crecimiento positivo, correspondiente
al de Cryptococcus se realizó un extendido del crecimiento y se le agregó una gota de tinta china, para
la observación microscópica del agente. Resultados: La prevalencia de Cryptococcus de las muestras
estudiadas fue de 46.66%, 7 de 15. El estudio permitió la estandarización de un método para establecer
la presencia de C. neoformans en excretas de paloma de la Zona Metropolitana de Guadalajara.

Abstract
Criptococosis is a pathology caused by the opportunistic fungus Cryptococcus neoformans, which
mainly affects people with immune problems. Objective: to determine the presence of Cryptococcus
neoformans in pigeon excreta in the metropolitan area of Guadalajara Jalisco. Material and methods: A
cross-sectional study was carried out where 15 pigeon excreta samples from the Metropolitan Zone of
Guadalajara were cultured on Sabouraud dextrose agar with chloramphenicol. Later in the samples that
presented a positive growth, corresponding to the one of Cryptococcus, a microscopic observation was
made with the Chinese ink stain, from a sample-extended growth. Results: The prevalence of
Cryptococcus in the studied samples was 46.66%, 7 of 15. The study allowed the standardization of a
method to establish the presence of C. neoformans in pigeon excreta from the Metropolitan Zone of
Guadalajara.

Palabras clave (Keywords): Cryptococcus, aves, micosis oportunista.

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Introducción
El hongo Cryptococcus neoformans es el
causante de criptococosis en humanos y gran
variedad de animales. Esta enfermedad es una
micosis oportunista, la cual tiene predilección
por el sistema nervioso central. Afecta a
pacientes inmunodeprimidos e [5]. Basado en las diferencias antigénicas de la
inmunocompetentes, y se adquiere por la
inhalación de las esporas del hongo, pequeñas
levaduras encapsuladas y probablemente
también basiodiosporas, presentes en el medio
ambiente [1, 2]. Una de las amenazas de los
pacientes y portadores de esta patología, es una
enfermedad micótica, infrecuente en los
inmunocompetentes, pero devastadora en los
inmunocomprometidos, la Criptococosis, donde
el factor principal de la deficiencia, es la
alteración del número o funcionamiento de los
linfocitos T; en los últimos 25 años los casos de
criptococosis humana han aumentado
considerablemente, en gran medida debido a la
supervivencia de enfermos con alteraciones en
el sistema inmunológico. La criptococosis es
una micosis sistémica de curso subagudo o
crónico y de amplia distribución mundial. El
agente etiológico es una levadura capsulada, del
género Cryptococcus, capaz de causar
enfermedades serias y aún fatales en individuos
inmunocomprometidos. En la actualidad esta
micosis se clasifica entre las tres infecciones
oportunistas más importantes que conducen a la
muerte en pacientes con Sida [1, 3]. Así mismo,
se reporta que hasta el 6 % de las personas con
deterioro de la función de la inmunidad celular
debido a otras causas (como neoplasias, lupus
eritematoso sistémico, trasplante de órgano
sólido o médula ósea, diabetes, sarcoidosis,
tratamiento con corticoides u otra medicación
inmunosupresora) se encuentran en riesgo de
presentar criptococosis [4].
Los Cryptococcus son levaduras redondas u
ovales (4-6 μm), rodeadas de una cápsula
polisacárida de tamaño variable. Los
aislamientos de fuentes ambientales, son por lo
general pequeños [4 μm) con cápsula
prácticamente inaparente mientras que en los de
origen clínico sucede lo contrario (≥ 30 μm)
capsula se identificaron cinco serotipos: A, B,
C, D y AD [5]. Entre los factores de
patogenicidad de Cryptococcus se encuentra la
cápsula, la capacidad de adherencia y las
proteínas con actividad enzimática como las
proteinasas, las fosfolipasas las fenoxilasas y
las ureasas [6].
La paloma juega un papel importante como
portadora de hongos patógenos [7]. Emmons,
en 1955, aisló C. neoformans de excretas de
palomas urbanas (Columba livia), siendo el
primero en establecer la relación existente, y
actualmente consolidada, entre el
microorganismo y las heces de estas aves [8].
Estudios posteriores muestran que las
excreciones viejas de palomas son la fuente
conocida más abundante de dicho
microrganismo; las deposiciones de paloma son
un importante reservorio de C. neoformans;
este hongo no suele aislarse en deyecciones
recientes, pero sí en las acumuladas y secas [9.
3]
Estudios realizados en otros países y ciudades
[2, 10-12] revelan la importancia de realizar
control sanitario de las palomas, consideradas
potenciales plagas transmisoras de múltiples
enfermedades.
Material y métodos
Se realizó un estudio trasversal, descriptivo. El
estudio se realizó en la Zona Metropolitana de
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Guadalajara, en áreas donde se encontró una
gran cantidad de palomas. De las 15 muestras
colectadas, 11 provenían de lugares que no
estaban expuestas al sol y 4 expuestas al sol.
Las 15 muestras de excretas, fueron tomadas
con hisopos impregnados de solución salina y
cloranfenicol, colocadas en bolsas de
polietileno de primer uso, marcadas y
trasportadas al laboratorio de microbiología de
la Universidad Lamar. 1 gramo de muestra fue
diluido en 9 mL de solución salina con
cloranfenicol al 0.9%. Se agitó en vortex
durante 3 minutos, se filtró en una gasa, se dejó
reposar durante 10 minutos, del sobrenadante se
tomaron 25 µL y se sembraron en agar
Saboraud dextrosa con cloranfenicol a 37 °C
durante 7 días, revisando y registrando la
cinética de crecimiento. Se utilizó un control
negativo donde se realizó el mismo
procedimiento sin colocar las excretas de
paloma. A las muestras que presentaron
características de crecimiento concordantes con
colonias mucoides, blancas y cremosas se
consideraron positivas para crecimiento de
Cryprococcus. Del crecimiento con estas
características se realizó un extendido y se
colocó una gota de tinta china para la
observación microscópica en un aumento de 40
a 100x [8, 11]. Para el análisis estadístico se
empleó estadística descriptiva, determinando la
participación porcentual del agente en la
población estudiada.
Resultados y discusión
Se analizaron 15 muestras de las cuales el 46.6
% fueron positivas (7/15). a C. neoformans
(Figura 1). En la literatura no existen estudios
que establezcan las condiciones de muestreo
adecuadas para determinar la presencia de C.
neoformans, mas sin embargo logramos
reproducir y estandarizar un método para la
toma y procesamiento de muestra, para el
cultivo de C. Neoformans. En nuestro estudio
observamos crecimiento en 7/15 (46.66%);
similar a lo reportado en Europa y
Latinoamerica en donde se arrojan incidencias
similares a la nuestra; 100/350 (28.57 %),
39/177 (22.0%), 336/1009 (33.3%) 26/124
(12.5%), 59/119 (49.6%), 35/225 (15.6%)
según las distintas series [12-15]. En el control
negativo no se observó crecimiento como lo
muestra la figura 2. De las 15 muestras
colectadas, 11 provenían de lugares que no
estaban expuestas al sol, de las cuales el 71.4 %
presentó crecimiento positivo (5/7), mientras
que de las 4 expuestas al sol, el 28.6 %
mostraron crecimiento (2/7). Según distintos
estudios las variables que más influyen en la
obtención de muestras positivas son las heces
secas, que estén en exteriores, expuestas a la luz
y al medio ambiente [12-16]. Según Rosario et
al., la probabilidad de aislar C. Neoformans es
mayor en heces secas, lo cual constituye el
elemento importante para la presencia del
hongo y que este factor es necesario para
mantener el hongo en la naturaleza [14]; otro
elemento muy importante para la recuperación
del patógeno es la cantidad de excretas lo que
está determinado por el número de palomas;
como lo menciona Caicedo et al [17]. De los
agares positivos tomamos una muestra de una
colonia y realizamos la tinción de tinta china
para comprobar que realmente fuera el
microrganismo en base a su morfología
microscópica. La figura 3, nos muestra lo
observado en la revisión microscópica,
concordante con la cápsula de polisacáridos de
C. neoformans, una variable muy importante a
considerar en cuanto al tipo de colonia es la
variabilidad según el microambiente del que
fueron aisladas [18].
La presencia de C. neoformans zonas públicas
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es de importancia epidemiológica, ya que, al ser

su vía de entrada respiratoria, puede ser
inhalada por las personas expuestas y
susceptibles a la enfermedad [8-11]. Factores
predisponentes para la enfermedad por C.
neoformans son VIH, tratamientos esteroideos
prolongados, Linfomas, Sarcoidosis, Diabetes
Mellitus y Trasplantes y terapia
inmunosupresora [19-22]. Las infecciones
micóticas oportunistas se han incrementado en
los últimos años, esto en parte al aumento del
número de pacientes con SIDA, la presencia del Figura 1: Colonias compatibles de
microorganismo y la viabilidad de este en zonas Cryptococcus neoformans en agar Sabouraud
públicas aunado a la presencia de pacientes con cloranfenicol.
susceptibles genera un entorno de posible
fuente de infección continua; además de sujetos
que desconocen su enfermedad o la cercanía de
estos a pacientes a sitios muy concurridos por
palomas y la ausencia de datos estadísticos que
demuestren la presencia del microrganismo
generan un problema de salud publica cada vez
mayor y mayor coste de estos. De acuerdo con
nuestros hallazgos, se recomienda realizar
muestreos durante todo el año.
Figura 2: Al lado derecho, el control negativo.
De los resultados obtenidos hasta el momento, No se observa crecimiento.
se desprende la necesidad de ampliar el área de
estudio de la ciudad, para justificar la
implementación de medidas de prevención,
sobre todo en hospitales que cuentan con
grandes jardines y con edificios elevados, dos
circunstancias que favorecen por una parte la
alta prevalencia de palomas y el anidamiento de
las mismas, cosas que favorecen la acumulación
de excretas en sitios concurridos por personas.

Figuras:
Figura 3: Extendido con tinción de tinta china
(100x) en donde se observa la cápsula de
polisacárido del hongo. (flechas)

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Referencias
1. Escandon P (2012) Results of the
national surveillance program for the
years 2006-2010. Biomédica; 32:387-
398.
2. Quintero E, Castañeda E, Ruiz A.(2005)
Distribución ambiental de Cryptococcus
neoformans en el departamento de
Cundinamarca - Colombia. Rev
Iberoam Micol; 22:93-98.
3. Mattsson, R.; Haemig, P.D. & Olsen, B.
(1999). Feral pigeons as carriers of
Cryptococcus laurentii, Cryptococcus
uniguttulatus and Debaryomyces
hansenii. Medical Mycology 37:367-
370
4. Levitz SM, Boekhout T. (2006)
Cryptococcus: The once-sleeping giant
is fully awake. FEMS Yeast; 6: 461-2.
5. Kronstad JW, Attarian R, Cadieux B,
Choi J, D’Souza CA, Griffiths J, et al.
(2011) Expanding fungal pathogenesis:
Cryptococcus breaks out of the
opportunistic box. Nat Rev Microbiol;9
(3):193-203.
6. Sánchez A, Escandón P, Castañeda E.
(2008) In vitro determination of
virulence factors activity associated
with several Cryptococcus neoformans
clinical isolates. Rev Iberoam Micol;
25:145-9.
7. Pollock C. (2003) Fungal diseases of
columbiformes and anseriformes. North
Am Vet Clin Exot Anim; 6:351-361.
8. Rosario I, Acosta B, Colom F (2008) La
paloma y otras aves como reservorio de
Cryptococcus spp. Rev Iberoam Micol;
25:13-18.
9. Curo M. Salinas M, Casquero J. (2005)
Cryptococcus neoformans en excretas
de palomas, suelo y aire de los
palomares del perímetro urbano de Ica.
Rev Perú Med Exp Salud Pública;
22(4):262-266.
10. Kielstein P, Bocklisch H, Hotzel H,
Schmalreck A, Otto B.(2000) Evidence
of Cryptococcus neoformans in
domestic and sports pigeons in
Thyringia. Mycoses; 43: 23-28.
11. Arredondo C.(2006) Cryptococcus
neoformans en heces de palomas
recolectadas en lugares públicos de la
ciudad de Santiago, Chile. [Tesis de
Grado]. Santiago de Chile: Facultad de
Medicina Veterinaria, Ciencias Agrarias
y Forestales, Universidad
Iberoamericana de Ciencias y
Tecnología.
12. Vallejo DA, Benavides CJ, Chaves CA,
Morillo MI, Castillo AM.(2016)
Aislamiento de Cryptococcus
neoformans en heces de palomas
(Columba livia) en el casco urbano del
municipio de Pasto, Colombia. Revista
Biosalud; 15(1):62-71.
13. Silva M, Luiza P. (1963) Isolamento de
Cryptococcus neoformans de
excrementos e ninhos de pombos
(Columba livia) em Salvador, Bahia
(Brasil). Rev Inst Med Trop São Paulo;
5: 9-11.
14. Emmons C. (1955) Saprophytic sources
of Cryptococcus neoformans associated
with the pigeon Columba livia. Am J
Hyg; 62: 227-32.
15. Caicedo B LD, Alvarez V MI , Llanos
CE, Molina D (1996) Cryptococcus
neoformans en excretas de palomas del
perímetro urbano de Cali Colombia
Médica Vol. 27 No 3-4,
16. Telechea A, Ampuero A, Degarbo SM,
Arenas GN, Bartolomé K, Serio R.
5
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Cryptococcus neoformans (2014)

Frecuencia de aislamiento en heces de
palomas de paseos públicos de
Mendoza. Segundo Encuentro de
Investigadores de la RADU 2014
17. Alvarez C, Salim R, Runco R. Presencia
de Cryptococcus neoformans en
excretas de palomas urbanas en San
Miguel de Tucuman. Boletin
micologico 25:29-35 2010
18. Muñoz P, Giannella M, Valerio M,
Soria T, Díaz F, Longo JL, et al.(2007)
Cryptococcal meningitis in a patient
treated with infliximab. Diagn
Microbiol Infect Dis; 57(4):443-6.
19. Tuxen AJ, Yong MK, Street AC,
Dolianitis C. (2007) Disseminated
cryptococcal infection in a patient with
severe psoriasis treated with efalizumab,
methotrexate and ciclosporin. Br J
Dermatol; 157:1067-1068.
20. Wilson ML, Sewell LD, Mowad
CM.(2008) Primary cutaneous
cryptococcosis during therapy with
methotrexate and adalimumab. J Drugs
Dermatol; 7(1):53-4.
21. Ingram PR, Howman R, Leahy MF,
Dyer JR. (2007) Cryptococcal immune
reconstitution inflammatory syndrome
following alemtuzumab therapy. Clin
Infec Dis; 44(12):e115-7.
22. Silveira FP, Husain S, Kwak EJ, Linden
PK, Marcos A, Shapiro R, et al. (2007)
Cryptococcosis in liver and kidney
transplant recipients receiving
antithymocyte globulin or alemtuzumab.
Transpl Infect Dis; 9:22-27.