Sparaffinatura e Idratazione

Le sezioni vengono idratate in modo completo e progressivo percorrendo la scala dei

solventi sotto indicata. Quando le sezioni vengono trasferite da un solvente all’altro
devono essere immerse più volte nel nuovo solvente e solo successivamente lasciate
in immersione.
1) Xilene II 5 minuti;
2) Xilene I 5 minuti;
3) Etanolo assoluto II 3 minuti;
4) Etanolo assoluto I 3 minuti;
5) Etanolo 95% II 3 minuti;
6) Etanolo 95% I 3 minuti;
7) Etanolo 90% 3 minuti;
8) Acqua distillata 5 minuti.
Hematoxilin&Eosin (H&E)
Le soluzioni coloranti ematossilina ed eosina vanno filtrate ogni volta.
1) Immergere le sezioni idratate in ematossilina 1% per 5 minuti. Controllare al
microscopio che i nuclei si siano colorati bene, in caso contrario ripetere la
colorazione per altri 5 minuti.
2) Sciacquare con acqua distillata e poi lasciare per 2 minuti in acqua del
rubinetto corrente.
3) Immergere le sezioni in eosina 1% per 2 minuti, scolare, sciacquare in 200 ml
di acqua deionizzata per 3 volte e controllare la colorazione al microscopio. Le
sezioni devono avere colorazione abbastanza accesa, in caso risulti tenue
ripetere la colorazione per 1 minuto e controllare.
4) Disidratare rapidamente in scala di alcoli, lasciando 1 minuto in Etanolo
assoluto e 1 minuto in Xilene.
5) Montare e lasciare sotto cappa fino a completa asciugatura del montante.
Masson trichrome
1) Depositare sulla sezione 6 gocce di reagent A e 6 gocce di reagent B: lasciar
agire 10 minuti.
2) Senza sciacquare, sgocciolare le fettine e depositare sulla sezione 10 gocce di
reagent C: lasciar agire 4 minuti.
3) Sciacquare rapidamente in acqua distillata (3-4 secondi) in distilled water e
depositare sulla sezione 10 gocce di reagent D: lasciar agire 4 minuti.
4) Sciacquare in acqua distillata e depositare sulla sezione 10 gocce di reagent E:
lasciar agire 10 minuti.
5) Senza sciacquare, sgocciolare le fettine e depositare sulla sezione 10 gocce di
reagent F: lasciar agire 5 minuti.
6) Sciacquare in acqua distillata.
7) Disidratare rapidamente in scala di alcoli, lasciando 1 minuto in Etanolo
assoluto e 1 minuto in Xilene.
8) Montare e lasciare sotto cappa fino a completa asciugatura del montante.

Nuclei Nero
Citoplasma, cheratina, fibre muscolari Rosso
Collagene, muco Blu
Eritrociti Giallo
Preparazione Alcian Blue 1% (pH 2.5) solution
1) Sciogliere 1 g di Alcian Blue in 97 mL di acqua deionizzata.
2) Aggiungere 3 mL di Acido Acetico glaciale.
3) Mischiare bene.
4) Filtrare.
Preparazione Nuclear Fast Red (0,1%) solution
1) Sciogliere 5 g di Solfato di Alluminio in 100 mL di acqua deionizzata.
2) Aggiungere 0,1 g di Nuclear Fast Red.
3) Portare ad ebollizione e lasciar raffreddare.
4) Filtrare.
Alcian Blue & Fast Red Staining
5) Incubare le sezioni in Acido Acetico 3% per 3 minuti.
6) Incubare in Alcian Blue 1% (pH 2.5) per 30 minuti o 15 minuti a 37° C.
7) Sciacquare per 2 minuti in acqua del rubinetto corrente, seguita da viraggio in
acqua distillata.
8) Incubare le sezioni in Nuclear Fast Red (0,1 %) per 5 minuti.
9) Sciacquare per 2 minuti in acqua del rubinetto corrente, seguita da viraggio in
acqua distillata.
10) Disidratare rapidamente in scala di alcoli, lasciando 1 minuto in Etanolo
assoluto e 1 minuto in Xilene.
11) Montare e lasciare sotto cappa fino a completa asciugatura del montante

Muco, Acido Ialuronico, Blu

Nuclei Rosso
Background Rosa