FISIOLOGÍA 2019

Universidad de El Salvador
Facultad de Química y Farmacia
Departamento de Bioquímica y Contaminación Ambiental
Sección de Fisiología y Farmacología
Laboratorio #2: Fisiología Renal

Introducción
Los riñones, la vejiga urinaria y los uréteres constituyen el Sistema Renal. En el interior de
los riñones la unidad funcional es la nefrona y cada riñón tiene aproximadamente 1 millón
de estas. Los riñones intervienen de manera esencial en la regulación de la homeostasis
hídrica, la composición de electrolitos, la regulación del volumen extracelular y con ello la
presión arterial y la homeostasis acido básica. Los riñones filtran el plasma sanguíneo y
producen orina, liquido por el cual se excretan los productos de desecho metabólico del
cuerpo como urea, amoniaco y sustancias extrañas como metabolitos de fármacos.
Otras de sus funciones son la reabsorción de glucosa y aminoácidos a partir del filtrado
plasmático, además de regular la entrada de calcio y fosfato. Los riñones intervienen en la
gluconeogénesis y durante el ayuno sintetizan y liberan glucosa en la sangre y producen casi
20% de la capacidad glucógena del hígado, los riñones también son órganos endocrinos y
elaboran cininas, así como 1,25-dihidroxicolecalciferol, eritropoyetina; además sintetizan y
secretan renina.
De manera específica, en los riñones, se filtran un líquido parecido al plasma a través de los
capilares glomerulares hacia los túbulos renales. Conforme este filtrado glomerular pasa
por los túbulos, se reduce su volumen y se modifica su composición por el fenómeno de
reabsorción tubular y secreción tubular para formar la orina que entra en la pelvis renal.
Desde la pelvis renal, la orina pasa hacia la vejiga y es expulsada hacia el exterior mediante
micción.
Las enfermedades de los riñones son muchas y entre las más comunes están las lesiones
agudas y crónicas de los mismos como nefropatía diabética, síndromes nefríticos y
nefróticos, riñón poliquístico, obstrucción e infección de las vías urinarias y canceres de
riñón. Cuando la función de estos órganos disminuye al grado de que dejan de funcionar
para conservar la salud, en ocasiones se recure a la diálisis y al final al trasplante.
Las dos enfermedades que originan la mayor prevalencia de disfunción renal son la diabetes
y la hipertensión arterial. Se sabe que en el planeta casi mil millones de personas tienen
hipertensión arterial y el número posiblemente aumente a 1,560 millones para el año 2025.
A nivel mundial hay más de 240 millones de diabéticos cifra, que según cálculos, aumentara
a 380 millones para el 2025. En promedio, 40% de la población de diabéticos terminara por

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mostrar algunas nefropatías crónica, lo cual significa que también se agrava el riesgo de
complicaciones cardiovasculares. Se calcula que para el próximo decenio el costo global
acumulativo de la diálisis y trasplante de riñón rebasará el billón de dólares estadounidense
(un millón de millones).
La presente práctica de laboratorio estudia las formas en que podemos evaluar algunos de
estos mecanismos así el estudiante podrá lograr a través de la práctica una mayor
comprensión de los conceptos obtenidos en forma teórica y ahondar en aquellos que
especialmente se exploraran en la práctica.

Objetivos específicos
Al finalizar la práctica el estudiante será capaz de:
1. Explicar a través de la depuración de creatinina y el funcionamiento tubular el concepto
de depuración renal.
2. Interpretar los resultados obtenidos de la depuración de creatinina.
3. Interpretar los resultados obtenidos durante la determinación con tiras reactivas.

Función renal
Los procedimientos serán:
1. Determinación rápida de sangre, urobilinogenos, bilirrubina, proteínas, nitritos,
cetonas, glucosa, valor de pH, densidad y leucocitos en orina.
2. Determinación de la depuración de creatinina endógena con hidratación.

Material que traerá el alumno

 Un par de guantes
 Mascarillas
 Plumón
 Viñetas

Prueba N° 1
Determinación rápida de sangre, urobilinogenos, bilirrubina, proteínas,
nitritos, cetonas, glucosa, valor de pH, densidad y leucocitos en orina.
Emplear orina fresca no centrifugada

Materiales y equipo
 Frasco para toma de muestra
 Tiras reactivas
 Estuche de tiras reactivas

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Procedimiento
1. Colectar una muestra de orina a las 8:00 a.m. (teniendo en consideración que la
muestra debe tener por lo menos 2 horas de estar almacenada en la vejiga urinaria
para que los datos obtenidos sean certeros).
2. Introducir una tira reactiva de URIT 10G durante un segundo.
3. Eliminar el exceso de orina apoyándola en el borde del contenedor.
4. Leer el resultado comparando las áreas reactivas con la escala cromática que aparece
en el estuche después de 30-60 segundos.
5. Leer el resultado del área para leucocitos después de 60-120 segundos. No considere
cambios de color desarrollados tras 2 minutos.
6. Anotar los parámetros encontrados en la siguiente tabla.

Resultados de la tira reactiva

Parámetro Valor normal Sensibilidad Valor observado
pH De 4.5 a 8 pH de 5 a 9
Densidad De 1.000 a 1.030 De 1.005 a 1.030
Eritrocitos De 0 a 1/campo Alrededor de 5-10 /µL
Glóbulos blancos De 0 a 6/campo 15-40 Cel/µL granulocitos
Negativo 0.5 – 1.0 mmol/L ácido
Cuerpos cetónicos
acetoacetico
Nitritos Negativo 18-33 µmol/L
Urobilinógeno Negativo 17-33 µmol/L
Proteínas Negativo 0.1-0.3 g/L albumina
Glucosa Negativo 2.2-2.8 mmol/L
Bilirrubina Negativo 8-6-17 µmol/L

Nota: al tener todos estos datos, proceder a descartar la orina.

Prueba N° 2
Determinación de la depuración de creatinina endógena con hidratación

Procedimiento
Una semana antes de realizar la práctica cada grupo de laboratorio elegirá 1 compañero
que serán el sujeto de estudio, quienes deberán acordar con su docente un día para reunirse
a recibir las indicaciones de las condiciones en las que deberán presentarse el día del
desarrollo de la práctica.
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Antes de realizar la pruebe el sujeto debe:

1. Haber tomado su desayuno habitual.
2. Buscar al docente responsable del laboratorio para que le proporcione el depósito en
el cual colectara las muestras de orina.
Notas:
 Para obtener resultados óptimos, el sujeto elegido para esta prueba no deberá
someterse a ejercicios de cualquier clase un día anterior a la prueba.
 Antes de dar inicio deben estar organizados para apoyar a cada uno de los sujetos ya que
no es solamente responsabilidad de Él, el buen desarrollo de la práctica.

DETERMINACIÓN IN VIVO DE CREATININA EN SUERO, PLASMA U ORINA

Fundamento
La creatinina es una molécula de deshecho que se genera a partir del metabolismo
muscular. La creatinina proviene de la creatina, una molécula muy importante para la
producción de energía muscular. Aproximadamente el 2% de la creatina del cuerpo se
convierte en creatinina cada día. La creatinina se transporta desde los músculos por medio
de la sangre hacia el riñón. Los riñones filtran la mayoría de la creatinina y la eliminan en la
orina.
Aunque es una sustancia de deshecho, la creatinina es una prueba diagnóstica esencial, ya
que se ha observado que su concentración en sangre indica con bastante fiabilidad el estado
de la función renal. Si los riñones no funcionan bien, no eliminan bien la creatinina y por lo
tanto ésta se acumula en la sangre. Por esto la creatinina puede avisar de una posible
disfunción o insuficiencia renal, incluso antes de que se presenten síntomas. Por eso la
creatinina suele figurar en los análisis de sangre que se realizan comúnmente.

En medio alcalino la creatinina reacciona con el ácido pícrico generando un compuesto

coloreado (picrato alcalino de creatinina) que se puede cuantificar fotométricamente. El

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color generado es proporcional a la concentración de creatinina en muestra, en condiciones

óptimas de ensayo.
Para los fines didácticos de la asignatura de Fisiología, la cuantificación de creatinina se
llevara a cabo en una muestra de orina de acuerdo a las indicaciones que serán dadas por
sus instructores.

Parte experimental

Esquema de trabajo

8:00 a.m. 9:00 a.m. 9:30 a.m.

• Orinar. • Realizar la Preparar la muestra y

• Almacenar la muestra lectura proceder a hacer la
durante el tiempo de haciendo uso de medición de creatinina en
duración del pre- tiras reactivas. el espectrofotómetro
laboratorio. • Proporcionar la
• Consumir la cantidad de 2ª Muestra de
agua indicada por el orina.
profesor.

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Procedimiento
Preparación del reactivo de trabajo y de la muestra
1. Mezclar 10mL de reactivo R1 y 10mL de reactivo R2 en un matraz de Erlenmeyer y
homogenizar en agitador Vortex, a este lo rotulara como reactivo de trabajo.
2. Tomar 1mL de muestra de orina y diluir 1/50 con agua desionizada (al obtener el dato
final de concentración de creatinina tener en cuenta que, se deberá multiplicar por 50
por esta dilución que se realiza), rotular como muestra diluida.
3. Trasladar la dilución a un beaker de 100mL y tapar con papel parafilm.
4. Homogenizar la muestra diluida haciendo uso del agitador Vortex.
5. Rotular una hoja de papel toalla sobre la mesa de trabajo, de acuerdo a la siguiente
indicación:

Blanco Estándar Muestra

6. Colocar en las 3 celdas del espectrofotómetro las siguientes cantidades de reactivos

utilizando jeringas de tuberculina de 1mL.

Reactivos Materiales y equipo

 R1 Reactivo Pícrico (Sln  Probeta de 10mL
de Acido Pícrico 15.5  Probeta de 25mL
mmol/L)  3 Pipetas Pasteur
 R2 Reactivo  Beaker para dilución de orina
Alcalinizante ( Sln de  Jeringas de tuberculina de 1mL
NaOH 0.29 mol/L)  Espectrofotómetro
 CREATINE CAL (patrón  Celdas
primario acuoso de  Papel parafilm
Creatinina 2mg/dL)

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Técnica Celda blanco Celda muestra Celda estándar

Estándar -- -- 0.1mL
Muestra -- 0.1mL --
Reactivo de trabajo 1mL 1mL 1mL

7. Primero se deberá agregar 1mL de reactivo de trabajo a cada celda.

Preparación del espectrofotómetro Genesys 10S UV-Vis

8. Dar click en el botón blanco.
9. Programar las tres longitudes de onda: 492nm.
10. Establecer el parámetro de medida: recuerde que para los reactivos a utilizar se deberá
programar en absorbancia.
11. Colocar el blanco en el espectrofotómetro y dar autocero para calibrar el equipo.
12. Identificar los análisis: como prueba de laboratorio de Fisiología grupo 01. 1 y así
sucesivamente, blanco, estándar y muestra.
13. A las celdas de muestra y estándar agregar al mismo tiempo: la muestra diluida y el
estándar respectivamente, colocarlas en el espectrofotómetro.
Nota: La sincronía y la velocidad de este paso es crucial para obtener buenos
resultados.
14. Dar click en aceptar, el espectrofotómetro realizara la lectura correspondiente a la
primera medición, tomar nota de las absorbancias.
15. Luego de la primera medición, realizar una segunda lectura a los 90s de la misma
muestra y estándar (sin sacar las celdas del espectrofotómetro) que corresponderá a la
segunda medición, tomar nota de las absorbancias.

El cálculo del aclaramiento renal se realizara mediante la utilización de las siguientes

formulas:
∆𝐴𝑏𝑠 = 𝐴𝑏𝑠 2𝑑𝑎 𝑚𝑒𝑑𝑖𝑐𝑖ó𝑛 − 𝐴𝑏𝑠 1𝑒𝑟𝑎 𝑚𝑒𝑑𝑖𝑐𝑖ó𝑛

∆ 𝐴𝑏𝑠 𝑚𝑥 𝑚𝑔
𝑥 2 𝑥 50 = 𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑑𝑒 𝑐𝑟𝑒𝑎𝑡𝑖𝑛𝑖𝑛𝑎 ( )
∆𝐴𝑏𝑠 𝑠𝑡 𝑑𝐿

𝐶𝑜𝑛𝑐 𝑑𝑒 𝑐𝑟𝑒𝑎𝑡𝑖𝑛𝑖𝑛𝑎 𝑥 𝑚𝐿 𝑑𝑒 𝑜𝑟𝑖𝑛𝑎 𝑒𝑛 24 ℎ

𝐴𝑐𝑙𝑎𝑟𝑎𝑚𝑒𝑛𝑡𝑜 𝑟𝑒𝑛𝑎𝑙 = = 𝑚𝐿/𝑚𝑖𝑛
𝑚𝑔 𝑐𝑟𝑒𝑎𝑡𝑖𝑛𝑖𝑛𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑑𝐿 𝑒𝑛 𝑠𝑢𝑒𝑟𝑜 𝑥 1440

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Valores de referencia de creatinina en Valores de referencia de aclaramiento

suero renal
Suero y plasma Aclaramiento
Hombres 0.7-1.4 mg/dL Hombres 97-137 mL/min
Mujeres 0.6-1.1 mg/dL Mujeres 88-128 mL/min

Investigar

 Que es aclaramiento renal y porque es un parámetro útil para el diagnóstico de disfunción

renal.
 Razones por las cuales se pueden identificar valores anormales de creatinina en suero, plasma
y en orina.
 En qué momentos se pueden encontrar elevada en orina los siguientes parámetros: sangre,
urobilinogenos, bilirrubina, proteínas, nitritos, cetonas, glucosa, valor de pH, densidad y
leucocitos en orina.

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