UNIVERSIDAD TECNICA DE COTOPAXI

DIRECCION DE POSGRADO

MAESTRIA EN SANIDAD VEGETAL

Informe de Laboratorio 2
ECOFISIOLOGIA
Titulo:

Extracción de ADN vegetal de las frutas

Autor
Ing. Andrés Fernando Ramírez Cruz
Ing. Cristian Javier Corrales Paredes
Ing. Edgar Alexander Amaya Oñate
Docente
Ing. Msc. Clever Castillo de la Guerra

LATACUNGA –ECUADOR
09/06/2019

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Introducción
El ADN, es una macromolécula además de un polímero compuesto por varios
nucleótidos.
Los nucleótidos a la vez se encuentran conformados por un grupo fosfato, la
desoxirribosa y una base nitrogenada (A, T, G, C). Este se encuentra presente en
todas las células de los seres vivos, codificando su forma, color, sus funciones y
miles de más características fenotípicas. Estas características van pasando de
generación por generación de manera hereditaria.
El ADN es una de las partes fundamentales de los cromosomas, son estructuras
constituidas por dos pequeños filamentos o brazos, que pueden ser iguales o
desiguales, están unidos por un punto común llamado centrometro, varían en
forma y tamaño pueden verse fácilmente al momento de la división celular por
medio de un microscopio. Además, el ADN es una molécula muy larga y tiende
agruparse, de ahí la facilidad para retirarla.
La extracción del ADN, es el punto de partida y la base para que muchos
otros procedimientos en el área de Genética puedan llevarse a cabo, tal como el PC
R y la electroforesis. Estos permiten la secuenciación del ADN, que en ciencias
deriva en cientos de aplicaciones. Además del procedimiento casero, existen otras
maneras de extraer el ADN. Una de ellas denomina FENOL CLOROFORMO, en donde
el ADN es aislado de proteínas y otras sustancias a través de la degradación de las
mismas, para luego poder ser observado. Sin embargo los reactivos de este
procedimiento son altamente tóxicos y la muestra final de ADN no es grande en
cantidad. En Este y otros procesos diferentes al método casero, son utilizados otros
reactivos, incluso enzimas, que pueden hacer que estos procedimientos sean
mucho más eficientes. La manera de extraer el ADN es romper sus membranas
lipídicas y proteínas que no dan paso directo al ADN puro.
Para poder extraerlo se usa una sustancia tampón emulsionante que logra que se
separen el resto de los componentes para dejar libre al ADN. Sus preparaciones son
variadas, pero suelen hacerse con elementos caseros.
Objetivo
 Realizar la extracción de ADN de tejidos vegetales y reflexionar sobre la
simpleza de su composición con sencillas técnicas.
 Observar la estructura fibrilar del ADN.

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Materiales
• 1 tazas o vaso de plástico
• Licuadora
• Una cuchara plástica para medir y mezclar
• 2 filtros de papel de café Nº 2, tamices
• 250 ml de agua destilada por cada fruta
• Jabón liquido
• Muestra vegetal, 1 mandarina, 2 bananas
• Sal de mesa
• Bicarbonato de sodio
• 1 pipeta de transferencia plástica o un gotero médico
• 1 conservadora con hielo para enfriar los tubos con alcohol ( conservar la cadena
de frío)
• 1 tubo ependor
• 1 dropper

Procedimiento para la extracción del ADN

La Universidad Técnica de Cotopaxi, cuenta con el Centro experimental y dentro de

sus instalaciones se encuentra con el Laboratorio de Agronomía, que es el sitio en
donde se desarrolló el presente ensayo:

1. En una licuadora, mezclar una banana por taza de agua destilada (250ml), en este
caso fueron 2 con 500ml de agua destilada.

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2. Licuar por 15-20 segundos, hasta que la solución se mezcle.

3. Filtrar la mezcla vertiéndola dentro de un filtro o coladera y dejar que la solución

drene, impidiendo que pase la pulpa al recipiente.

4. En una taza, preparar una solución consistente en una cucharadita de té de

shampoo y dos pizcas de sal, bicarbonato (solución tapón, rompe la pared
celular) a este se lo denomina tapón de lisis.

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5. En un recipiente agregar la solución de la fruta.

6. Al recipiente con solución de fruta, añadir el tapón de lisis hasta en una

proporción igual a la anterior, y mezclar la solución.

7. Mezclar la solución agitando la misma.

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8. Colocar solución de la fruta en un tubo de ensayo

9. Tomar el alcohol en un tubo de ensayo, mientras más frio este el alcohol el

resultado será mucho mejor.

10. Agregar alcohol al tubo de ensayo que contiene solución de fruta.

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11. Es importante no batir el tubo de ensayo, sino removerlo lentamente en forma
circular. Se puede observar el ADN blanco el cual precipita en la capa de alcohol

12. El ADN no es soluble en alcohol. Cuando el alcohol se agrega a la mezcla, los

componentes, excepto el ADN, permanecen en la solución mientras el ADN
precipita en la capa de alcohol.

13. Con los buenos resultados, hay suficiente ADN, este se levantó con un
dropper de plástico (el ADN se enrolla a la punta de dropper), este se colocó en
un tubo ependor. El ADN tiene la apariencia de mucus blanco y fibroso.

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Resultados

 Al finalizar el procedimiento fuimos capaces observar el ADN, tal como se

esperaba.
 En el tubo de ensayo, luego de mover el mezclador se hizo evidente la
aparición de una sustancia blanca algodonosa, que se adhería al mezclador
mientras este se movía.
 Nuestro mayor inconveniente durante el proceso, fue que al intentar extraer
el ADN del tubo de ensayo, este no se adhería de manera correcta al
dropper.

Interpretación

Las técnicas de extracción pueden ir desde la más casera, a la más especializada,

pero en definitiva, no se puede extraer el ADN sin romper la unión de proteínas y
membranas lipídicas.

Para la correcta extracción, hay ciertos pasos básicos que requieren de ciertos
reactivos que cumplen una función en cada momento del procedimiento. En la
técnica casera es definitivo el uso del jabón, ya que este trabaja emulsionando las
membranas haciendo que estas se separen del material genético. Además, el jabón
une a las proteínas restantes con el ADN. El jabón es capaz de unirse a las
membranas, inactivarlas y hacer posteriormente el rompimiento de los lípidos
y proteínas que hay presente en ellos.

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En el método casero el detergente reemplaza a las enzimas que se usan en otros
procedimientos.

Por otro lado, la sal de mesa hace que cambien las propiedades del ADN,
haciéndolo precipitar sobre el alcohol. La sal, puede romper la estructura tridimensi
onal de las macromoléculas, provocando en este caso la desnaturalización del ADN.
El ADN es soluble en agua, pero no en alcohol. Cuando se encuentra en este se
desenrolla y precipita en la interface entre el alcohol y solución con la muestra y la
sustancia buffer. El bicarbonato sódico, también influye en la etapa de
precipitación. El alcohol, aparte de dejar al ADN en el medio por su densidad,
disuelve los azúcares y las proteínas restantes. El método empleado para la
extracción de ADN puede denominarse como casero y por medio de este
procedimiento casero se puede hacer la extracción y observación del ADN

Bibliografía
Bibliografía: Cervantes J.: Obtención de ácido desoxirribonucleico (ADN) útil para el
análisis genético, a partir de uñas recortadas.
Disponible en línea:www.scielo.org.pe/pdf/rmh/v14n4/v14n4cc03.pdf Vélez J.:
Extracción de ADN. Disponible en línea: <http://academic.uprm.edu>Autor
desconocido.
La extracción y purificación de ADN para el análisis por PCR.Mitos y realidades.
Revista NEWSLETTER Enero- Febrero 2009. Disponible en línea:<www.microbial-
systems.com/web/docs/Newsletter_Microbial_03.pdf,
http://learn.genetics.utah.edu/es/units/activities/extraction/
http://html.rincondelvago.com/extraccion-del-adn-de-una-cebolla.html
http://centros5.pntic.mec.es/ies.victoria.kent/Rincon-C/Practica/PR-5.htm
http://www.joseacortes.com/practicas/extraccionADN.htm
http://www.jpimentel.com/ciencias_experimentales/pagwebciencias/pagweb/la_ci
encia_a_tu_alcance_II/quimica/Experiencias_quimica_extraccion_de_adn.htm
http://www.bioapuntes.cl/laboratorio/extrac-adn.htm
http://www.slideshare.net/marcia_karina/extraccion-adn

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