CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES.

Sesión Fecha Prac Tema

tica
1 Organización de grupos de laboratorio
16-21 1) Determinación de la longitud de onda óptima.
2 1 2) Representación de la curva espectral del Azul de metileno
Abril y del CoCl2
27.28 Espectrofotometría visible
3 2 a) Elaboración de la Curva de calibración proteínas
Abril b) Determinación del contenido de proteínas en alimentos.
Espectrofotometría visible
30 abril-5 a) Elaboración de la Curva de calibración del carmín
4 3
Mayo b) Extracción y cuantificación de carmín a partir de la
cochinilla
7-12 Espectrofotometría ultravioleta
5 4 a) Análisis de cafeína en bebidas
Mayo b) Preparación del estándar
Espectrofotometría ultravioleta
14-19 a) Análisis de polifenoles en alimentos
6 5
Mayo b) Proceso de extracción de polifenoles en producto
agroindustrial
14-19
7 Primer examen
Mayo
21-26 Espectrometría infrarroja
8 6 Interpretación del perfil espectral de compuestos en productos
Mayo agroindustriales
28 May-2 Espectrofotometría de absorción atómica
9 7
Ju Determinación de hierro en alimentos
04-09
10 8 Análisis por Cromatografía liquida de alta resolución.(HPLC)
Junio
11-16
11 9 Análisis por Cromatografía Gases en alimentos (CG)
Junio
18-23 Medida de pH. Calibración del instrumento
12 10 Estandarización de solución de NAOH con biftalato de potasio.
Junio Determinación de acidez en vino y vinagre tinto
25 -30
13 Examen final
Junio

Prof. Rosario Calixto C. 2018-I

 PRÁCTICA 1
ESPECTROFOTOMETRÍA: .SELECCIÓN DE LA LONGITUD DE
ONDA ÓPTIMA

I. COMPETENCIA
Determina la longitud de onda óptimo mediante el método de la
espectrofotometría.

II. INTRODUCCION. Consideraciones Teóricas

Un rayo de radiación electromagnética se manifiesta como movimiento
ondulatorio, de campos eléctricos y magnéticos, la cual se transmite en
forma de onda, formada por paquete de “fotones” de energía, que en su
trayectoria describe una onda.
Los parámetros ondulatorios de la radiación electromagnética son
frecuencia, amplitud, velocidad de propagación y longitud de onda.
La distancia entre dos cumbres o crestas consecutivas de dos ondas se
denomina longitud de onda (). Las  de las olas en una playa se
expresan en metros y las de la luz en nanómetros (nm)..

Cuando decimos que una sustancia química absorbe luz de longitud de

onda, esto significa que las moléculas de esa sustancia absorben fotones
de esa longitud de onda.
La luz visible es una forma de radiación electromagnética (ver tabla).

Prof. Rosario Calixto C. 2018-I

 Color y longitud de onda de la radiación electromagnética

Tipo de radiación Long. de onda (nm)

Rayos X y Rayos Gamma 3
Ultravioleta 200 -400
Luz visible 400 – 780
Violeta 420 - 455
Azul 455 - 492
Verde 492 - 577
Amarillo 577 - 597
Naranja 597 - 620
Rojo 620 - 780
Infrarrojo 1000
Microondas y ondas de radio  3 x 106
Esta radiación es una herramienta para el estudio de los átomos, porqué
el campo eléctrico ejerce acciones sobre las partículas cargadas, como los
electrones.
Cuando una molécula absorbe un fotón en un intervalo espectral, se excita
pasando un electrón de un orbital del estado fundamental a un orbital de
estado excitado de energía superior. Cada molécula tiene una serie de
estados excitado que dependen de su estructura electrónica y que la
distinguen del resto de moléculas. Por tanto, el espectro de absorción es
decir la luz absorbida es función de la longitud de onda, y constituye una
verdadera señal de identidad de cada sustancia o molécula.
Diferentes longitudes de onda de la radiación electromagnética
corresponden a diferentes regiones del espectro. Nuestros ojos detectan
radiación visible electromagnética con  comprendidas en el rango de 780
a 400 nm; correspondiente a longitudes de onda que transmite y no que
absorbe. El color que absorbe es el complemento del color que
transmite. Por tanto, para efectuar mediciones de absorción es necesario
usar la longitud de onda a la cual la solución coloreada absorbe luz. Una
solución roja absorbe luz verde y transmite luz roja.
La radiación UV es la radiación de frecuencia mayor que la luz violeta, su
longitud de onda es algo menor de 400 nm. y es componente perjudicial
de la radiación solar.

Prof. Rosario Calixto C. 2018-I

 La radiación IR tiene frecuencia menor y longitudes de onda más larga
que la luz roja, es mayor a 800 nm. Es utilizado para identificar grupos
funcionales orgánicos. En clínica se emplea frecuentemente en el análisis
de los cálculos renales. Los datos de absorbancia, transmitancia, y
concentración del analito (muestra a identificar /cuantificar) se obtienen por
comparación de la magnitud de la muestra con estándares
ESPECTROFOTOMETRÍA
Se denomina así a la medición de la cantidad de energía radiante
que absorbe una sustancia química, en función de la longitud de onda de
la radiación.
Es útil por su precisión, sensibilidad y su aplicabilidad a moléculas de
distinta naturaleza (contaminantes, biomoléculas, metabolitos del plasma,
componentes de un alimento, bioelementos, etc.)
PARTES BASICAS DE UN ESPECTROFOTOMETRO

Tèrminos usados
Transmitancia (T): Cantidad de radiación que se transmite, después de
incidir sobre la celda y la solución absorbente. Se expresa a menudo como
porcentaje:
%T = I x 100 %
Io
Absorbancia (A): Cantidad de radiación absorbida por la solución
absorbente (analito). También se denomina densidad óptica o extinción, y
se expresa mediante la ecuación:

Prof. Rosario Calixto C. 2018-I

 A = log I0 = - log It = log 1/ T = - Log T , Si I0 = 100;
It I0

A = 2 – log T
Los valores de T y A se registran en el espectrofotómetro, sus valores están
entre 0 a 100% y de 0 a 2 respectivamente
III. PARTE EXPERIMENTAL
MATERIALES Y REACTIVOS
Gradilla con 8 tubos de ensayo,
Pipetas de 1, 2, y 10 mL.
Bombilla succionadora
Azul de Metileno 2 mg/mL
Agua destilada.

PROCEDIMIENTO
Espectro de absorción del CoCl2
1. Colocar en la celda solución deCoCl2 en HCl al 1%
2. Colocar en otra celda HCl al 1% (blco)
3. Medir las transmitancia en el rango de 450 a 700nm y con un intervalo
de 5 nm Anotar el modelo de equipo
4. Anote los valores de absorbancia y transforme a transmitancia (
Registre de acuerdo al cuadro 1)
5. Trazar en papel milimetrado el gráfico con las variables % T vs Long
de onda. Igualmente realizar con los datos de A vs long de onda
6. Unir los puntos y diseñe la curva obtenida, trace un línea
perpendicular a eje x, y ubique la longitud de onda òptima.
7. Expliqué sus resultados
8. Registre también con el azul de metileno (opcional) Preparar a 100
ug/mL y 10 ug/mL (rango de 580 a 720 nm ( intervalo der 5 nm)
9. El valor obtenido y la forma de la curva se compara con lo registrado
en los libros de la sustancia.

Prof. Rosario Calixto C. 2018-I

 RESULTADOS
Cuadro 1
1. Registre sus resultados.
Concentración
Long de onda Absorbancia Transmitancia
(nm)

Curva espectral de ………..Nombre del analito

Rango de long onda
Intervalo
Solvente
Instrumento marca y modelo

Long de onda X

Prof. Rosario Calixto C. 2018-I

 Absorbancia Y

Cuál es la  óptima seleccionada:

IV. CUESTIONARIO
1. Cuál es la importancia de trabajar con long de onda òptima en el desarrollo
del análisis instrumental.
2. Investigue y registre la long de onda òptima, de glucosa, ácido àscorbico,
luteína, carotenos, cianocobalamina, piridoxina, quercetina, y cúrcuma,
Asimismo como procedería determinarlo cada uno de ellos.
V. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
1. Nielsen. Analisis de alimentos.Ed Acribia. España. 2003
2. Calixto Cotos. Guìa de Biofisica. Fac. Medicina. UNMSM 2007.
3. Skoog, D.A. Principios de anàlisis instrumental. 4º ediciòn. Haarcourt.

Prof. Rosario Calixto C. 2018-I