2.

Pruebas de Certeza

Son ensayos específicos que confirman fehacientemente que la mancha examinada

contiene o corresponde a sangre.

a. Métodos microscópicos

Consiste en la observación de elementos figurados de la sangre, es decir,

que los glóbulos rojos, glóbulos blancos y plaquetas, cuyas características
pueden encontrarse alteradas y deben ser reconstituidas. Dentro de los
factores que modifican las características de dichos elementos cabe
mencionar la naturaleza del soporte que la contiene, la antigüedad, la
putrefacción e incluso el manipuleo.

b. Métodos cristalográficos

La muestra o mancha en estudio se somete a la acción de distintos reactivos,

para obtener determinados derivados de la hemoglobina. Estos derivados
forman cristales de colores y formas característicos que pueden ser
identificados por observación con un microscopio, y permiten asegurar la
naturaleza sanguínea de la muestra que se está analizando.

Entre los más conocidos tenemos los siguientes:

 La prueba de Teichmann: Consiste en la cristalización característica

del clorhidrato de hematina (cristales romboédricos de color café)
formando al reaccionar el ácido acético glacial más vestigio de cloruro
de sodio con la hemoglobina presente en la solución obtenida al
disolverse una mancha de sangre seca, que se mezclan en un cristal
y se somete a ebullición. Esta prueba da buenos resultados cuando la
mancha de sangre se encuentra sobre metales oxidados o cuando se
 ha sometido a altas temperaturas, en manchas antiguas o cuando se
encuentra en muy pequeña cantidad.

 La prueba Takayama. Se basa en la obtención de los cristales de

piridina – hemocromogeno (piridina ferro protoporfirina), resultado de
la reacción del reactivo de Takamaya (ss.glucosa, NaOh al 10%,
piridina y agua destilada en proporciones 1:1:12) con la hemoglobina
presente en la muestra. Cuando se produce la hidrolisis alcalina se
libera el grupo prostético de la hemoglobina, se forma la
metahemoglobina con fe, que luego con la glucosa caliente se reduce
a Fe, el cual se combina con la piridina formando los cristales que son
de color rosado

3. Determinación de especie
Una vez que se tiene la certeza de la naturaleza o presencia de sangre en una
mancha o soporte, queda ahora investigar si la misma es de origen humano o de
especie diferente. Dentro de los métodos utilizados en el laboratorio forense, se
incluyen técnicas microscópicas y diversas técnicas biológicas e inmunológicas.

a) Técnicas microscópicas

La presencia de glóbulos rojos en una muestra puede ser determinante, ya

que comparativamente el tamaño y la morfología de los mismos difieren
entre las especies.
Los glóbulos rojos del hombre, como los de casi todos los mamíferos, son
circulares y sin circulares y sin núcleo; se exceptúan los glóbulos rojos del
camelio y de llama, que son ovales, pero también sin núcleo. En cambio, las
aves, reptiles y peces poseen glóbulos rojos nucleados y de mayor tamaño
que el de los humanos
b) Técnicas Inmunológicas

Se refiere fundamentalmente a la reacción antígeno – anticuerpo, conocida

como la reacción o ensayo de las precipitinas. Las moléculas del anticuerpo
(inmunoglobinas) reaccionan con el antígeno y de anticuerpo. Esta reacción
antígeno- anticuerpo está influida por varias fuerzas, interactuando entre los
factores reaccionantes como son las fuerzas de Vander Walls, puentes de
hidrogeno, interacción de dipolos, atracción entre los antígenos no polares y
la superficie de anticuerpo, y la atracción electroestática.

Inicialmente se forma un complejo antígeno – anticuerpo soluble, luego del

cual empieza a unirse, formando una tupida red compuesta de moléculas de
anticuerpo bivalente y moléculas de antígeno polivalente para luego formar
partículas del tamaño suficiente como para ser insolubles y formar
precipitado visible.

La reacción se lleva a cabo siempre y cuando la concentración del antígeno

y del anticuerpo es equivalente. La técnica de precipitinas en tubo o en
capilar, tiene la ventaja de ser rápida y sencilla, pero hace necesario tener
una muestra clara. Se requiere de una valiosa estratificación, donde la capa
de solución del antígeno se encuentra sobre la preparación del anticuerpo.

La precipitación sobre gel tiene la ventaja de poder realizarse con el extracto

de una mancha de sangre aunque este sea turbio y requiere de una pequeña
cantidad de muestra, pero tiene como desventaja el emplear varias hojas
para que efectué la difusión.

La técnica electroforética tiene la ventaja de acelerar la difusión sobre el gel

y, por lo tanto, disminuye el tiempo de reacción además de ser más sensible
que las otras técnicas.
4. Tificacion de manchas de sangre

Tipificar una mancha de sangre es encontrar su tipo o su grupo dentro de un

determinado sistema o sistemas, y es fundamental para llegar a la
individualización. La reacción de aglutinación de la sangre fresca es
producida o no por la presencia o ausencia de un antígeno de glóbulos rojos
que reacciona cuando son puestos en contacto con un antisuero especifico,
lo cual hace posible su individualización (método directo).
En manchas de sangre seca a pesar de que los glóbulos rojos están
generalmente destruidos, los antígenos no se desnaturalizan
inmediatamente y retienen la capacidad de combinarse con anticuerpos
específicos (métodos indirectos).

Cuando en la escena del crimen encuentran manchas de sangre luego que

se comprueba que las mismas no pertenecen a la víctima, su estudio es
determinante para dar al criminal. Asimismo si en ropas u objetos
pertenecientes a un sospechoso, se encuentran manchas de sangre
diferente a la suya y coincidente con la de la víctima, es casi probable su
culpabilidad, la cual no se daría si existiera semejanza entre los grupos
sanguíneos de sospechoso y victima

Los sistemas o grupos sanguíneos más aprovechables son los siguientes:

- Sistema ABO: con cuatro grupos sanguíneos: “A”, “B”, “AB”,”O”.
- Sistema MN: con tres combinaciones: “MN”, “M” y “N”
- Sistema Rh: fundado en los antígenos D,C,E,c,e, que constituyen factor
Rh
5. Identidad genética de las manchas de sangre

La tecnología del ADN como método de identificación en el campo forense

se ha convertido en una herramienta ineludible en el análisis de indicios
biológicos recuperados en la escena del crimen. La posibilidad de extraer
material genética de cualquier indicio biológico incluyendo manchas de
sangre.