Jenis Praktikum : Uji Kepekaan Antibiotik : Penetuan Kadar Hambat Minimal (KHM) Antibiotik

Secara Dilusi Padat

Tujuan : Menentukan Kadar Hambat Minimal (KHM) dari suatu antibiotik secara dilusi padat.

Buatlah seri
pengenceran/variasi
konsentrasi larutan antibiotik
ampisilin dalam aquades
steril. (Seri pengenceran
yang dibuat adalah 400, 200,
100 ug/mL media)
Siapkan media NA (siap dituang Buatlah suspensi bakteri uji
ke petri secara pour plate). Bila dengan kepadatan setara
media dalam keadaan memadat dengan larutan standar Mac
cairkan terlebih dahulu dengan
Farland II.
pemanasan sampai menjadi cair
dan buat hingga suhunya sekitar
45 – 50oC sehingga siap untuk
dicampur dengan bakteri uji.

A. Pembuatan kontrol negative (kontaminasi media)

Ambil 15 ml media NA, tuang ke dalam petri Beri label pada dasar petri : kel.
streril secara pour plate. Biarkan memadat. prakt/tgl/perlakuan lalu inkubasi terbalik selama
24 jam pada suhu 370C

B. Pembuatan kontrol positif pertumbuhan bakteri uji (per meja)

Ambil 15 ml media NA dalam tabung. Masukkan Tuang dalam petri steril secara pour plate. Biarkan
1 ml suspensi bakteri uji ke dalam tabung tersebut. memadat. Beri label pada dasar petri : klp
prakt/tgl/perlakuan/nama bakteri uji lalu inkubasi terbalik
selama 24 jam pada suhu 370C

C. Pengujian potensi antibiotik secara dilusi padat

Ambil 4 tabung yang masing-masing berisi 15 ml
media NA suhu 45 – 50oC, tambahkan 1 ml
suspensi bakteri uji pada masing-masing tabung
tersebut. Tambahkan pula larutan antibiotik
dengan konsentrasi yang telah ditetapkan pada
langkah 1.
Siapkan 4 petri steril untuk menuang ketiga
preparat di atas secara pour plate. Biarkan
memadat. Beri label pada dasar petri. Inkubasi
selama 24 jam. Amati dan bandingkan kekeruhan
dari masing-masing petri. Bandingkan antara
kontrol dan perlakuan.

D. Pembacaan Hasil

Setelah masa inkubasi, kekeruhan media yang
menunjukkan kepadatan pertumbuhan bakteri uji
diamati dan diberi penilaian menggunakan notasi (+)
untuk media yang tampak keruh dan (-) jika tidak
ada kekeruhan yang berarti tidak ada pertumbuhan
bakteri uji dalam media agar tersebut.
Hasil pengamatan dianalisis untuk mendapatkan
konsentrasi atau kadar hambat minimal senyawa
antibiotik. Kadar Hambat Minimal (KHM) adalah
konsentrasi minimal senyawa antibiotik yang
menunjukkan adanya penghambatan pertumbuhan
bakteri uji.
 ALAT DAN BAHAN

1. Kultur murni bakteri uji dalam media NB umur 24 jam

2. Senyawa uji berupa antibiotik (misalnya Amoxycilllin sirup kering). Variasi konsentrasi ditentukan berdasarkan
hasil percobaan
3. Alat-alat gelas : petridish steril, pipet volume steril, erlemeyer
4. Media nutrien agar (NA)
5. Deret larutan standar Mac Farland
6. NB steril untuk pembuatan suspensi bakteri uji
7. Alkohol 70 %
8. Aquades steril
9. Bunsen
10. Mikropipet
 LEMBAR PENGAMATAN

PLAT UJI GAMBAR KETERANGAN

Kontrol Negatif

Kontrol Positif

Uji (400 ug/mL media)

Uji (200 ug/mL media)

Uji (100 ug/mL media)

Uji (50 ug/mL media)

 JURNAL SEMENTARA

PRAKTIKUNM MIKROBIOLOGI DAN VIROLOGI

“Uji Kepekaan Antibiotik : Penetuan Kadar Hambat Minimal (KHM) Antibiotik Secara Dilusi Padat”

I KETUT ASTIKA FEBRI WIRANTAWAN

NIM: 172200060

B2A

JURUSAN FARMASI KLINIS

INSTITUT ILMU KESEHATAN MEDIKA PERSADA

2018