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Tema 3
* En sentido estricto, un colorímetro es un instrumento que compara el color de una sustancia con el de
una disolución de referencia usando el ojo humano como detector, si bien, en la práctica, esta denominación
suele aplicarse a muchos fotómetros de filtro con sistemas de detección eléctricos.
Claudio González Pérez 3
En cuanto a la región ultravioleta, hay que indicar que la zona de mayor interés en
la práctica analítica ordinaria es la denominada como ultravioleta próximo (longitud de
onda entre 200 y 400 nm), pues el ultravioleta lejano o ultravioleta de vacío (de 10 a
200 nm) presenta el inconveniente de que oxígeno atmosférico absorbe en esa región,
siendo necesario eliminarlo del instrumento de medida. Debido a ello, la
espectrofotometría en esa región espectral no se ha desarrollado suficientemente.
Po
A = – log T = log
P
Po P
P P–dP
db
dP
= – k C db
P
P
dP b
=– k C db
P 0
Po
P P
ln = – k C b = 2.3 log
Po Po
P
log = – log T = A = ε b C
Po
Desviaciones
positivas
A
Desviaciones
negativas
Reales
Radiación no monocromática
Instrumentales Radiación parásita
Errores de lectura
Dimerizaciones
Influencia del equilibrio Acido-base
Complejos
Químicas Influencia del disolvente
Influencia de la temperatura
Impurezas en los reactivos
Interacción entre especies absorbentes
Personales
n
ε = ε verdadero
2
2
n +2
N N
A A
M M
λ1 λ2
λ C
a) b)
Figura 3.3. Influencia de la radiación policromática sobre la ley de Beer.
P 01 –ε b C
A1 = log = ε 1 b C ; P 1 = P 01 10 1
P1
P 02 –ε b C
A2 = log = ε 2 b C ; P 2 = P 02 10 2
P2
Claudio González Pérez 7
Cuando este haz constituido por las dos radiaciones atraviesa una disolución
conteniendo especies absorbentes, la potencia del haz emergente es P1+P2, mientras
que la del haz incidente sobre la muestra es P01 + P02. Según esto, la absorbancia
medida será:
P 01 + P 02 P 01 + P 02
A M = log = log
P1 + P2 –ε 1 b C –ε 2 b C
P 01 10 + P 02 10
que es la ley de Beer. Sin embargo, cuando ε1 es distinto de ε2, la relación entre AM y
la concentración deja de ser lineal. Evidentemente, cuanto mayor sea la diferencia
entre ε1 y ε2, mayores serán las desviaciones de la linealidad. Por eso mismo, aún
cuando la anchura de banda sea relativamente grande, si las diferencias en los valores
de la absortividad son pequeños, la utilización de un haz policromático no implica
diferencias significativas respecto a uno monocromático (ver Fig. 3.3.a., banda N).
P0 + Ps
AM = log
P + Ps
P0 + Ps P + Ps
AM = log - log 0
P + Ps Ps
Espectrofotometría de absorción ultravioleta-visible 8
%T
1 2 3 C
Figura 3.4. Errores de lectura.
DESVIACIONES QUIMICAS
Dimerizaciones. Cuando una disolución de dicromato potásico no tamponada se diluye, ocurre una
transformación parcial en cromato, como consecuencia del equilibrio dímero-monómero:
Cr2O72– + H2O <——> 2 CrO42– + 2 H+
(λmax = 350, 450 nm) (λmax = 372 nm)
2
A punto
3 isosbéstico
1 4
λ
Figura 3.5. Espectros de absorción de un indicador ácido-base.
Es evidente que cuando las especies absorbentes están implicadas en un equilibrio ácido-base, la
ley de Beer no se cumple, al menos que el pH o la fuerza iónica sean constantes, o se opere a la
longitud de onda del punto isobéstico, esto es, la longitud de onda a la cual las dos especies
absorbentes en equilibrio presenten la misma absortividad. En este sentido hay que mencionar
que los puntos isosbésticos se toman frecuentemente como criterio para la existencia de dos
especies absorbentes interconvertibles de un compuesto determinado.
Complejos. Cuando se mide la absorbancia de un complejo, por ejemplo Fe(SCN)63–, para que se
cumpla la ley de Beer hay que mantener constante la concentración de ligando libre, lo cual se
consigue frecuentemente operando en gran exceso de ligando respecto al metal.
Espectrofotometría de absorción ultravioleta-visible 10
ERRORES PERSONALES
En este sentido, los mayores errores suelen cometerse por el uso inadecuado de
las cubetas de absorción. Resultan de utilidad las recomendaciones siguientes:
* Las cubetas de vidrio y cuarzo pueden limpiarse con ácido nítrico o con agua
regia en frío, pero no con mezcla crómica.
* Una vez limpias, las cubetas deben enjuagarse con agua destilada y con varias
porciones de la disolución a medir.
ABSORCION DE RADIACION
σ*
π*
H ++ σ
C O++ π n
+n
H
π
σ
Figura 3.6. Transiciones electrónicas entre niveles de energía moleculares.
Claudio González Pérez 13
π —> π *
Intensidad
transferencia de carga
σ —> σ*
n —> π*
.
n —> σ*
campo ligando
En los hidrocarburos saturados, en los que solamente hay enlaces sencillos C–H
se producen estas transiciones; así el metano presenta máximos de absorción a 125 nm
y el etano a 135 nm. Desde el punto de vista analítico, estas bandas tienen poco
interés, debido a dificultades de tipo instrumental.
Transiciones n—>σ*. Las especies químicas saturadas que contengan átomos con
pares electrónicos en orbitales no enlazantes pueden dar lugar a que se produzcan
transiciones n—>σ*. Esto sucede, por ejemplo, en compuestos saturados conteniendo
heteroátomos de oxígeno, azufre y halógenos.
Espectrofotometría de absorción ultravioleta-visible 14
Estas transiciones requieren bastante energía, si bien en menor grado que las σ—
>σ*, por lo que las bandas correspondientes se presentan fundamentalmente en el
ultravioleta lejano. Por otra parte, la intensidad de las absorciones asociadas con
estas bandas suelen ser de pequeña magnitud.
Para que tengan lugar las transiciones consideradas en este apartado, es evidente
que la especie química tendrá que contener algún grupo funcional con enlaces π, esto
es, la estructura molecular deberá presentar centros absorbentes no saturados. A
estos grupos de átomos responsables de la absorción en las regiones ultravioleta y
visible se les denomina grupos cromóforos (por extensión, se considera que los
sistemas con electrones s son cromóforos en el ultravioleta lejano). En la tabla 3.1. se
muestran algunos grupos cromóforos y las transiciones implicadas en
espectrofotometría ultravioleta-visible.
Por otra parte, existen determinadas agrupaciones atómicas que por sí mismas no
comunican color a la molécula que pertenecen, pero son capaces de reforzar la acción
de un cromóforo. Estos grupos se denominan auxocromos.
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Tabla 3.1.
Grupos cromóforos y transiciones electrónicas
Cuando una molécula contiene dos o más grupos cromóforos pueden darse las
siguientes posibilidades:
a) Si los cromóforos están separados por dos o más enlaces sencillos se dice que están aislados,
y, en estos casos, la absorción es la suma de todos los grupos cromóforos presentes. Ejemplo:
b) Cuando los cromóforos están conjugados, esto es, separados por un enlace sencillo, se produce
un desplazamiento batocrómico acompañado de un efecto hipercrómico.
La razón de estos desplazamientos se considera que es debida a que la conjugación hace que se
produzca una deslocalización de los electrones π sobre, al menos, cuatro átomos, como
consecuencia de lo cual se rebaja el nivel de energía del orbital π*, con lo que al ser menor la
energía requerida para las transiciones, los máximos de absorción se desplazan hacia mayores
longitudes de onda, aumentando además las probabilidades de que tengan lugar las mencionadas
transiciones, lo que origina un aumento simultáneo en la intensidad de la absorción. Sin embargo,
cuando existe algún enlace triple, se observa una disminución de la intensidad de absorción
(efecto hipocrómico)
λmax ε max
CH2 = CH – CH = CH 2 219 21000
CH2 = CH – C CH 219 6500
λmax εmax
CH2=CH2 170 10000
CH2=C=CH2 225 500
Lo mismo que sucede con otros tipos de excitación electrónica, el electrón que ha
experimentado la transferencia vuelve a su estado original, si bien, ocasionalmente
puede tener lugar la disociación del estado excitado, teniendo lugar, en este caso, una
reacción fotoquímica.
R R
–
C = O + hν + =C—O
El origen de las bandas de campo ligando puede explicarse del siguiente modo: los
cinco orbitales d de un átomo o un ión de un elemento de transición, cuya
representación se muestra en la figura 3.8., en ausencia de un campo magnético o
eléctrico externo están degenerados, no siendo necesaria la absorción de radiación
para promover un electrón de un orbital a otro.
Como puede verse en la figura 3.8., los orbitales dx2–y2 y dz2 están orientados
según los ejes de coordenadas x, y y z. Estos orbitales forman el grupo eg. Por su
parte, los orbitales dxy, dyz y dxz, llamados orbitales t2g, se orientan según las
bisectrices a dichos ejes.
z z
z
y x
x y x
y
d yz z dxz
dxy
z
y
y
x
x
d x2–y 2
dz 2
Figura 3.8. Representación esquemática de los cinco orbitales atómicos d.
Claudio González Pérez 19
dx 2–y 2 d z2
d dxz dyz
xy
Figura 3.9. Desdoblamiento de los orbitales d por efecto del campo ligando.
La energía de separación entre los dos grupos, representada por ∆oct depende de
las características del ión metálico (carga y número cuántico principal del orbital d) y
del ligando (distribución de su densidad de carga y polarizabilidad). En este sentido,
es posible ordenar los ligandos más comunes en orden creciente de ∆ (serie
espectroquímica):
I–<Br–<Cl–<F–<OH–<C2O42– H2O<SCN–<NH3<etilendiamina<NO2–<CN–
Ejemplo: Las disoluciones acuosas de Cu2+, Cu(H2O)42+ son de color azul pálido, mientras que en
medio amoniacal, Cu(NH3)42+, el color es azul violeta muy intenso. Esto es debido al aumento que
experimenta el campo ligando cuando se sustituye el H2O por NH3.
* Cuando se forman complejos tetraédricos o con simetría cuadrada plana, se originan desdoblamientos que
pueden deducirse con razonamientos similares a los utilizados para la estructura octaédrica.
** Para profundizar en el tema pueden consultarse las siguientes publicaciones: Scott, "Interpretation of the
ultraviolet Spectra of Natural Products". Pergamon, Oxford (1964. H.H. Jaffe y M. Orchin, "Theory and
Applications of Ultraviolet Spectroscopy", Willey, Nuw York (1962).
Espectrofotometría de absorción ultravioleta-visible 20
Tabla 3.2.
Longitudes de onda de máxima absorción
Cl, Br +5 +7 +8
α +35 α +35
— OH +7 +16 β +30 β +30
γ +50 γ +50
—COOH +27 +19
Los cuerpos luminosos, como el Sol o una lámpara, emiten radiaciones en un amplio
espectro que comprende muchas longitudes de onda. Aquellas longitudes de onda que
están comprendidas entre unos 400 y 700 nm son capaces de afectar la retina del ojo
humano y con ello dar origen a las impresiones subjetivas de la visión. Se hace mención
de impresiones subjetivas, debido a que en la percepción del color influyen factores
químicos, fisiológicos y físicos; de hecho, la respuesta humana al color varía de una
persona a otra.
Las personas que tienen una visión normal del color son capaces de correlacionar
aproximadamente la longitud de onda de la radiación visible que llega al ojo con la
subjetiva sensación del color, y éste, a veces se utiliza para designar ciertas porciones
del espectro.
Claudio González Pérez 21
Tabla 3.1.
Colores del espectro visible
INSTRUMENTACION
espejo
.
Fuente de Filtro Medidor
o Detector o .
radiación monocromador
registro
Muestra
Referencia
Figura 3.10. Espectrofotómetro de doble haz.
Fuentes de radiación
.
Energia
Filtros y monocromadores
100
B (filtro naranja)
%T A (filtro verde)
50
anchura
combinación de los dos filtros
de banda
Los filtros de corte tienen transmitancias de casi el 100 % en una zona del
espectro visible, pero luego disminuye rápidamente hasta un valor de transmitancia
cero (figura 3.12.B). Por combinación de diferentes filtros pueden seleccionarse
bandas espectrales relativamente estrechas (figura 3.12.).
* La radiación monocromática es la radiación de una sola longitud de onda. Por supuesto, es imposible
producir radiación monocromática verdadera, en sentido estricto. Sin embargo, cuanto mejor sea el
monocromador, tanto más estrecho será el intervalo de longitudes de onda.
Espectrofotometría de absorción ultravioleta-visible 26
Cuando un haz de radiación incide sobre este dispositivo, una fracción atraviesa
la primera capa metálica, mientras que la restante se refleja. La parte que ha pasado
sufre una escisión similar al llegar a la segunda capa metálica. Si la parte reflejada en
la segunda interacción es de longitud de onda adecuada, se refleja, en parte, desde la
cara interior de la primera capa en fase con la radiación incidente de la misma longitud
de onda. El resultado es que se refuerza esa determinada longitud de onda, mientras
que la mayoría de las otras, fuera de fase, sufren una interferencia destructiva. Estos
filtros proporcionan anchuras de banda menores y transmitancias de pico mayores que
los filtros de absorción. Se dispone de filtros de interferencia para todas las zonas
de las regiones ultravioleta y visible, así como parte del infrarrojo.
Los prismas presentan las ventajas de su gran pureza espectral (no hay órdenes
de dispersión superiores, como en las redes), mientras que el principal inconveniente
reside en que la dispersión no es lineal; esto es, las longitudes de onda no se dispersan
de manera uniforme: es mayor para las longitudes de onda más cortas.
Las redes de reflexión*, que son las más utilizadas, consisten en una superficie
dura, pulida, sobre la que se ha grabado un gran número de surcos paralelos y muy
próximos entre sí (entre 300 y 2000 surcos por milímetro para las regiones
ultravioleta y visible).
Cuando un haz de radiación incide sobre una red de reflexión con un ángulo i
(figura 3.15.) se refleja según un ángulo φ, diferente del incidente. En la Figura 3.15.
se muestran los haces paralelos 1 y 2. La máxima interferencia constructiva entre
ambos se produce cuando la diferencia de caminos recorridos por ellos sea un múltiplo
entero de la longitud de onda, y esta diferencia es AB – CD. Los segmentos AB y CD
pueden expresarse en función de d y de los ángulos i y .
* Tambien existen las redes de transmisión, que normalmente se construyen trazando una serie de surcos
paralelos sobre una placa de vidrio, con una punta de diamante.
Espectrofotometría de absorción ultravioleta-visible 28
por lo cual,
nλ = d (sen i + sen φ)
3er orden
267
2º orden
400 200
300
1er orden
800
600 200
400
200
radiación incidente
(200–800 nm)
** El signo menos indica que el ángulo de reflexión, φ, cae en el lado opuesto al ángulo de incidencia, i.
Claudio González Pérez 29
En resumen, y comparando con los prismas, las redes de difracción presentan las
ventajas de su elevada resolución, dispersión lineal y pocas pérdidas de radiación por
absorción. Posiblemente, el mayor inconveniente esté relacionado con la presencia de
órdenes de difracción superiores.
Las celdas se deben llenar de tal forma que el haz de radiación pase a través de
la disolución, con el menisco por encima del haz. Las celdas típicas para las regiones
ultravioleta y visible tienen 1 cm de paso óptico, si bien existe una gran variedad en
cuanto a tamaño, forma y otras peculiaridades, como se muestra en la figura 3.17.
.
estándar cilíndrica
(1 cm) microcelda
de flujo térmica 2 cm
Detectores
Plata ( )
Selenio
Hierro ( )
Figura 3.18. Célula fotovoltaica.
se presenta hacia los 550 mn, mientras que la respuesta a 350 y a 750 nm disminuye
hasta un 10 % de la máxima), presentan dificultades para la amplificación, y
fenómenos de fatiga, de forma que la corriente de salida disminuye gradualmente con
el tiempo.
Fototubos. Consisten en un cátodo semicilíndrico recubierto interiormente de un
material fotosensible, y un ánodo, en el interior de un recipiente en el que se ha hecho
el vacío (figura 3.19.).
.
(–)
hν
(+) e–
.
Figura 3.19. Fototubo.
dínodos
C –550 V.
–600 V. –500 V.
C: càtodo A: ánodo
hν
Figura 3.20. Tubo fotomultiplicador.
APLICACIONES
Análisis cualitativo
Los espectros de absorción ultravioleta y visible son, en general, menos útiles con
fines cualitativos que los espectros en la región infrarroja, debido a que en aquellos
las bandas son más anchas y, por consiguiente, menos características.
Análisis cuantitativo
* Douglas A. Skoog y James J. Leary. "Análisis Instrumental". Ed. Mc Graw–Hill. Madrid (1993)
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color rojo de los complejos formados con SCN–; el Ni2+ por el color rosa de su
quelato con dimetilglioxima, etc.
pH. Esta variable suele jugar un papel muy importante en las reacciones de formación de
complejos. La importancia del pH y su influencia sobre los iones metálicos y los ligandos se
discute detalladamente en las obras que tratan el tema correspondiente a equilibrios en
disolución.
Orden de adición de los reactivos. A veces, es importante añadir los reactivos según una
determinada secuencia. Por ejemplo, la determinación de cobalto mediante la formación del
complejo entre Co(III) y nitrilotriacetato implica la formación previa del correspondiente
Claudio González Pérez 37
complejo con Co(II), por lo cual el peróxido de hidrógeno (oxidante) debe añadirse en último
lugar.
Eliminación de interferencias. Existen muy pocas reacciones que sean totalmente específicas,
por lo que en muchas ocasiones es necesario eliminar las interferencias de determinadas
especies, lo cual muy frecuentemente se consigue por enmascaramiento.
0.6
A o
o
0.4
o
0.2o
Cuando en una disolución hay varias sustancias que absorben radiación, es posible,
en muchos casos, llevar a cabo su determinación sin necesidad de separar previamente
los distintos componentes. Se va a considerar el caso de que la muestra esté
constituida por los componentes M y N. La forma de proceder depende de los
espectros de absorción de ambas especies, y pueden presentarse los siguientes casos:
A
M N
λ1 λ2
Figura 3.22. Análisis de mezclas. Espectros no superpuestos.
* Cuando la cantidad de muestra es limitada, las adiciones estándar pueden llevarse a cabo por sucesivas
adiciones de incrementos de una disolución patrón de concentración conocida a una única alícuota del
problema. Las medidas de la absorbancia se hacen en el original y despues de cada adición.
Claudio González Pérez 39
M+N
A
M N
λ1 λ2
Figura 3.23. Análisis de mezclas. Superposición parcial de espectros.
A M+N
N
M
λ1 λ2
Figura 3.24. Análisis de mezclas. Superposición completa de espectros.
Espectrofotometría de absorción ultravioleta-visible 40
En las ecuaciones anteriores, b representa el camino óptico y εM1, εM2, εN1 y εN2
las absortividades molares de M y N a las longitudes de onda λ1 y λ2, que deben
ser determinadas previamente a partir de disoluciones patrón, o mejor, a partir
de las pendientes de sus representaciones de la ley de Beer.
Esta forma de proceder es válida solo si se cumple la ley de Beer y si los dos
componentes se comportan independientemente uno del otro. La mayor precisión
se alcanza cuando se eligen longitudes de onda en las que las diferencias entre
las absortividades molares sean grandes: a λ1, εM grande y εN pequeña, y a λ2, εM
pequeña y εN grande. Sin embargo, no todos los sistemas se comportan de este
modo. Puede ocurrir que exista solapamiento a todas las longitudes de onda y que,
para cada λ, εM>εN. Un procedimiento alternativo para analizar estas muestras
consiste en un método gráfico, cuyo fundamento es el siguiente: la primera de las
ecuaciones anteriores puede escribirse así:
A1 ε N1
= CM + CN
ε M1 b ε M1
Valoraciones fotométricas
Punto final
del Cu
Punto final
del Bi
vol. de AEDT
Figura 3.26. Valoración de una mezcla de Bi(III) y Cu(II) con AEDT.
* Los datos experimentales que realmente interesan se toman muy alejados del
punto de equivalencia. De esta forma, las reacciones empleadas no necesitan
tener constantes de equilibrio tan favorables como las requeridas para una
valoración convencional, que depende de observaciones cerca del punto de
equivalencia. Por la misma razón pueden utilizarse disoluciones más diluidas.
valoración del ácido HA. Este punto puede obtenerse representando gráficamente la
absorbancia a una determinada longitud de onda frente al pH. En la figura 3.27. se han
representado los espectros de absorción de un indicador ácido-base a distintos
valores de pH.
615 nm
9
8
7.5
7
6.5
M + L <—> ML
M + 2 L <—> ML2
……etc
pero que en ciertas condiciones predomina uno. Para determinar la estequiometría del
complejo predominante por el método de las variaciones continuas, el procedimiento a
seguir consiste en preparar mezclas de diferentes concentraciones de M y L, pero
manteniendo constante la concentración final (en la práctica, se preparan disoluciones
del catión y del ligando de concentraciones idénticas y se mezclan en distintas
relaciones de volumen, pero de modo que el volumen total sea constante).
Método de la relación molar. Este método es similar al anterior, excepto que aquí se
mantiene constante la concentración de uno de los componentes (a menudo, el ión
metálico) mientras que el otro se hace variar.
1.2 ML
A
1.0
0.8
ML2 .
0.6
0.4
0.2
0
1 2 3 [L] /[M]
Figura 3.29. Método de la relación molar.
ESPECTROFOTOMETRIA DE DERIVADAS
dA
para la primera derivada
dλ
2
d A
para la segunda derivada
2
dλ
A A
1ª derivada 2ª derivada
Espectro normal
1ª derivada
a) b)
EJERCICIOS
contiene 11.1 p.p.m. de Fe(III), seguido de un exceso de ion tiocianato, para formar
complejo rojo Fe(SCN)2+. Después de enrasar a 50 mL, las absorbancias de las cinco
disoluciones medidas a 580 nm (longitud de onda de máxima absorción) fueron 0.240,
0.437, 0.621, 0.809 y 1.009 respectivamente (cubetas de 1 cm). Obtener la
concentración de Fe(III) en la muestra de agua.