Universidad de Concepción

FACULTAD DE MEDICINA
CARRERA DE TECNOLOGIA MEDICA

Histoquímica de Pigmentos
e Iones

TM. Mabel Pinilla Fernández

2010
 HQ Pigmentos
• Los pigmentos son sustancias coloreadas de origen muy diverso
que suelen hallarse en células y tejidos. Estas sustancias pueden
plantear interrogantes de relevancia para el diagnóstico.

CLASIFICACIÓN
Pigmentos derivados del
metabolismos de la tirosina Y del Melanina y Cromafines
triptofano
Porfirinas; Hemoglobina;
Pigmentos derivados del grupo
Hemosiderina; Bilirrubina; Hematoidina;
pirrólico
Pigmento Malárico; Pigmento Formolado.
Pigmentos lipídicos Lipofucsina; Ceroide.
Carotenoides

Exógenos Cristales de mercurio; pigmento formolado, Antracosis

(carbón); tinturas de tatuaje; Pigmento malárico.
Endógenos Melanina; Bilirrubina, Lipofucsina, etc
 HQ Pigmentos
Metabolismo de Grupo
Tirosina y Triptofano Pirrolico Lipidicos Síntesis

• La melanina es un pigmento
intracelular granuloso,
amarillo, pardo o negro, que
proviene de la acción de la
tirosinasa (DOPA-oxidasa)
sobre la tirosina y sus
derivados.
 HQ Pigmentos
Metabolismo de Grupo
Tirosina y Triptofano Pirrolico Lipidicos Síntesis

Melanina
 HQ Pigmentos
Metabolismo de Grupo
Tirosina y Triptofano Pirrolico Lipidicos Síntesis

• Existen 3 estrategias de estudio de la Melanina

Captura del ión
Reducción Decoloración
ferroso

Schmorl Fontana
Masson
 HQ Pigmentos
Metabolismo de Grupo
Tirosina y Triptofano Pirrolico Lipidicos Síntesis

MÉTODOS DE REDUCCIÓN:
Capacidad reductora per se, según su estructura

Masson-Fontana: ( ARGENTAFÍN)
Sol. De plata amoniacal Plata Metálica
Melanina

Reacción de Schmorl:
Cloruro férrico (Fe+3) + Ferricianuro de potasio → Ferrocianuro Férrico
H&E Fontana-Masson
 HQ Pigmentos
Metabolismo de Grupo
Tirosina y Triptofano Pirrolico Lipidicos Síntesis

Método de Captura del Ion Ferrosos (Rx. de Lillie):

Formación Quelatos con el ión ferroso
Sulfatoferroso
Sulfato Ferroso Melanina Melanina Ferricianuro de Potasio
+ +
ferrosa

Ferricianuro Ferroso (+2)

Azul de Turnbull
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Metabolismo de Grupo
Tirosina y Triptofano Pirrolico Lipidicos Síntesis

3. DECOLORACIÓN: Al oxidarse este pigmento pierde su coloración

característica (por ruptura del anillo fenólico con dobles enlaces).
Agentes oxidantes: Peróxido de Hidrógeno, ácido ascórbico (son de los
más específicos) y Con el Permanganato de Potasio a 60ºC ó bien con
energía de microondas (también decolora otros pigmentos), pero es útil
para blanquear melanomas melánicos que enmascararían la tinción con
cromógenos como el DAB utilizado en IHQ de melanomas.
 HQ Pigmentos
Metabolismo de Grupo
Grupo
Tirosina y Triptofano Lipidicos Síntesis
Pirrolico
Pirrolico
DERIVADOS DE LA HEMOGLOBINA.
Bilirrubina y Hemosiderina
 Bilirrubina:
 Insoluble en agua.
 Soluble en cloroformo; tetracloruro
de carbono; álcalis.
 No reacciona con Fierro.
 No es decolorado por agentes
oxidantes.
 Da reacción argentafin.
 No se colorea con lisocromos.
REACCIONES DE OXIDACIÓN: La bilirrubina se presente de color pardo-
amarillento. Al oxidarla se logra su conversión a biliverdina (verdosa)

Reacción de KUTLIK (1957): Utiliza Cloruro Férrico que en presencia de ácido acético ó
Alumbre Férrico en agua. La bilis es oxidada a biliverdina (verde) y colecianina (azul verdoso).

La reacción de FOUCHET (1917): Utiliza Cloruro Férrico en solución con ATC.

 HQ Pigmentos
Metabolismo de Grupo
Tirosina y Triptofano Lipidicos Síntesis
Pirrolico

H&E Reacción de Kutlik

 HQ Pigmentos
Metabolismo de Grupo
Tirosina y Triptofano Lipidicos Síntesis
Pirrolico
 HQ Pigmentos
Metabolismo de Grupo
Tirosina y Triptofano Lipidicos Síntesis
Pirrolico

Técnicas Histoquímicas
 En la reacción de PERLS no se identifica la Hemosiderina
como tal sino los iones Férricos. La hemosiderina y la
ferritina liberan iones férrico (+3) en presencia de un ácido
mineral diluido.

 Identificación del ión Ferroso (+2):

Fe+3+Sulfuro de amonio→Fe+2+Ferricianuro de Potasio→Ferricianuro Ferroso
 HQ Pigmentos
Metabolismo de Grupo
Tirosina y Triptofano Lipidicos Síntesis
Pirrolico

H&E Azul de Prusia

 HQ Pigmentos
Metabolismo de Grupo
Tirosina y Triptofano Lipidicos Síntesis
Pirrolico

H&E Azul de Prusia

 HQ Pigmentos
Metabolismo de Grupo
Tirosina y Triptofano Lipidicos Sintesis
Pirrolico

 Lipofucsina:
 Resistente a solventes orgánicos.
 Presenta resistencia al tratamiento con álcalis concentrados
 Presenta fluorescencia café-rojiza.
 Reacciones Fierro negativas.
 Test de Schmorl positiva (reducen al ferrocianuro).
 Se tiñen con lisocromos.
 Acido resistencia variable.
 PAS positiva en fases intermedias de oxidación.
 Intracelular
 Se les denomina “pigmentos de desgaste”, generándose a todas las edades y
donde se acumula a lo largo del tiempo. Se pueden encontrar en
hepatocitos; miocardio; neurona; zona reticular de corteza suprarrenal; células
intersticiales del testículo
 HQ Pigmentos
Metabolismo de Grupo
Tirosina y Triptofano Lipidicos Síntesis
Pirrolico

TÉCNICAS HISTOQUÍMICAS:
1. Método de Schmorl
2. Sulfato Azul de Nilo
3. Ziehl-Neelsen
 HQ Pigmentos
Metabolismo de Grupo
Tirosina y Triptofano Lipidicos Sintesis
Pirrolico
 HQ Pigmentos
Metabolismo de Grupo
Tirosina y Triptofano Lipidicos Sintesis
Pirrolico

Sulfato Azul de Nilo

H&E Ziehl Neelsen

 HQ Pigmentos
Metabolismo de Grupo
Tirosina y Triptofano Lipidicos Sintesis
Pirrolico

CARACTERÍSTICAS HISTOQUÍMICAS DE LOS

PRINCIPALES PIGMENTO
 HQ Pigmentos
Metabolismo de Grupo
Tirosina y Triptofano Lipidicos Sintesis
Pirrolico
 Iones inorgánicos
Ca2+; Cu2+; Fe+3; Fe+2

 Técnicas para Ca2+

1.- Formación de Lacas: la más conocida es la del Rojo de Alizarina S, en
donde el color de la laca varía de acuerdo al pH de la reacción y van del
Anaranjado al Rojizo.
2.- Reacciones de Quelación: Hay atrapamiento del Calcio a través de una
sustancia (colorante o no) que actúa como quelante. Ejm: Glioxal (GBHA).
3.- Reacción de sustitución: Se utilizan sales de plata (Nitrato de Plata) y en
donde la plata sustituye al ión calcio (o cualquier ión metálico) en
las sales y posteriormente se reduce a plata metálica (Ag0) en presencia
de luz solar.
Von Kossa. Es una reacción Argirófila basada en la reducción de sales de plata,
formándose un Carbonato de plata. El método de VK lo que está
demostrando en sí son los fosfatos y carbonatos
Sustitución Quelación Formación de Lacas
Von Kossa
 Técnicas para Cu2+
Depósito tóxico en el hígado y Sistema Nervioso (acumulación)
de personas que sufren la enfermedad de Wilson
2.- Acido Rubeánico (Ditiooxamina), cuya especificidad es
relativa (sensibilidad < 15%). En esta reacción existe
quelación del Cobre por medio del ácido Rubeánico
formándose un polímero que adquiere un color típicamente
verdoso. El tratamiento paliativo de estos pacientes es la
aplicación de agentes quelantes como el Zinc que atrapa cobre.
HQ de Iones