Akta Kimindo Vol. 2 No.

2 Oktober 2007: 93-98

AKTA KIMIA
Akta Kimindo Vol. 2 No. 2 April 2007: 93 – 98 INDONESIA

Pemakaian Kitosan Limbah Udang Windu sebagai Matriks Pendukung

pada Imobilisasi Papain‡

Sari Edi Cahyaningrum*, Rudiana Agustini dan Nuniek Herdyastuti

Jurusan Kimia, FMIPA, Universitas Negeri Surabaya,

Gd. C-3, Kampus UNESA Ketintang, Surabaya.

ABSTRAK
Telah dilakukan imobilisasi papain (EC.3.4.22.2) pada kitosan dari limbah udang dengan metode
adsorpsi dan metode carrier crossling menggunakan kation magnesium sebagai agen bifungsional. Proses
adsorpsi magnesium pada kitosan dilakukan pada pH 7, dengan waktu interaksi 2 jam. Proses imobilisasi
papain pada matriks kitosan dilakukan pada pH 7, konsentrasi papain 20 mg/mL dengan waktu interaksi
12 jam. Papain imobil menunjukkan karakteristik yang berbeda bila dibandingkan dengan papain yang
tidak diimobilisasi. Stabilitas termal papain imobil relatif lebih tinggi bila dibanding papain bebas. Papain
imobil mampu digunakan secara berulang sebanyak 6 kali.

Kata kunci : Kitosan, imobilisasi, papain

ABSTRACT
Papain (EC.3.4.22.2) was immobilized on chitosan isolated from shell waste by adsorption and
subsequent cross-linking method with magnesium bifungsional reagent. Adsorption of magnesium on
chitosan was conducted at pH optimum 7 with contact time 2 hours. Immobilization of papain on chitosan
matrix was carried out at pH 7, papain concentration 20 mg/ml and contact time 12 hours. Characteristics
of immobilized papain were different from non immobilized papain. Thermal stability of immobilized papain
was relatively higher than non immobilized papain. The immobilized papain can be used for six cycles.

Keywords : Chitosan, immobilization, papain.

PENDAHULUAN
Kemajuan bidang bioteknologi dan industri,
memungkinkan dilakukannya berbagai upaya
untuk memanfaatkan proses-proses enzimatis.
Enzim mempunyai sifat yang potensial untuk
dimanfaatkan, antara lain daya katalitiknya yang
besar dan spesifitasnya terhadap substrat dari
reaksi yang dikatalisisnya (Lehninger, 1999).
Pada industri yang menggunakan enzim
tersebut, 59% enzim yang digunakan adalah
kelompok protease, dimana salah satunya adalah
papain. Papain dapat menghidrolisa ikatan
peptida pada residu asam α-amino seperti tirosin,
lisin, glutamin, histidin dan glisin. Papain
merupakan protease sulfihidril, yang mempunyai
residu sulfihidril (SH) pada situs aktifnya.
‡ Makalah ini disajikan pada Seminar Nasional Kimia VIII,
di Surabaya 8 Agustus 2006
* Corresponding author Phone : 031-8298761-; Fax : 031-
5475332 ; e-mail : -
Pada proses dan analisa yang melibatkan
enzim, umumnya menggunakan cara bath yaitu
mereaksikan substrat dengan enzim yang sudah
dilarutkan dalam air, sehingga enzim bercampur
dengan substrat (Sarah, 2001; Agustini, 2001).
Cara ini memiliki kelemahan karena enzim hanya
digunakan sekali pakai. Secara teknis sangat sulit
untuk memisahkan enzim dan produk dan
mendapatkan kembali enzim yang aktif diakhir
reaksi. Umumnya setelah reaksi selesai, enzim
diinaktifkan dengan pemanasan, pengubahan pH,
atau cara lain yang dapat menyebabkan enzim
terdenaturasi (Chibata,1978).
Salah satu cara mengatasi kelemahan
dalam penggunaan enzim tersebut adalah melalui
imobilisasi enzim yaitu mengikatkan enzim pada
bahan pendukung yang tidak larut air. Enzim
dapat membentuk ikatan ionik, kovalen, ikatan
silang atau terjebak pada bahan pendukung.
Pada saat digunakan, enzim imobil dapat
berfungsi sebagai katalis tanpa ikut terlarut

© Kimia ITS – HKI Jatim 93

 Cahyaningrum, Agustini dan Herdyastuti - Pemakaian Kitosan Limbah Udang Windu Sebagai Matriks Pendukung
dalam substrat (Darwis dan Sukara, 1990).
Setelah proses selesai, enzim imobil dapat
dipisahkan dari produk dan diperoleh kembali,
sehingga enzim imobil dapat dipakai berulangkali
Beberapa matriks pendukung yang dapat
digunakan pada proses imobilisasi enzim antara
lain bentonit, sheparose, gelatin dan kitosan.
Pada penelitian ini digunakan kitosan sebagai
matriks pendukung pada imobilisasi papain.
Kitosan merupakan hasil deasetilasi kitin,
sedangkan kitin dapat diisolasi dari serangga
dan jamur, kerangka dan cangkang hewan
golongan Artropoda, Molusca, Nematoda, dan
Crustacea. Pada penelitian ini kitin diisolasi dari
cangkang udang. Pada industri pengolahan udang
disamping menghasilkan produk utama berupa
udang bersih juga menghasilkan limbah, berupa
cangkang udang yang sangat potensial sebagai
pencemar lingkungan. Limbah udang dapat
mencapai 30% sampai 40% dari berat udang.
Limbah cangkang udang ini masih mengandung
protein, karbohidrat dan mineral. Jika dibuang
begitu saja, akan mengalami denaturasi protein
dan hidrolisis secara alami. Proses tersebut
menghasilkan bau busuk, meningkatkan BOD air,
sehingga menurunkan kualitas air (Indra, 1994 ).
Sebagai matriks pendukung pada proses
imobilisasi enzim, kitosan mempunyai beberapa
keuntungan karena mudah didapat, prosedur
isolasinya mudah, tidak beracun dan tidak
membahayakan. Kitosan mempunyai beberapa
sifat yang menguntungkan antara lain
hydrophilicity, biocompatibility, biodegradability,
sifat anti bakteri dan mempunyai afinitas yang
besar terhadap enzim (Sun, 1994). Kitosan
merupakan polimer alam yang dapat berikatan
secara crosslink apabila ditambahkan cosslinked
agent misalnya glutaraldehid, glioksal atau kation
Cu2+ ( Sarah, 2001). Proses imobilisasi enzim
dengan kitosan yang telah mengalami crosslinked
disebut sebagai imobilisasi tipe pengikatan carrier
–crosslinked. Pada penelitian ini cosslinked agent
yang digunakan adalah kation magnesium(II).
ALAT DAN BAHAN
Alat
Seperangkat alat refluks, seperangkat alat
untuk analisa Kjeldhal, Spektrofotometer IR merk
Shimadzu FTIR –8010PC, AAS merk Perkin Elmer,
pH-meter merk Orion model 710A, shaker ,
sentrifus merk Fischer scientific dengan
kecepatan maksimum 3500 rpm,
Spektrofotometer UV-vis Lamda bio 20, Perkin
Elmer.
Bahan
Cangkang udang windu (diambil dari
industri pengolahan udang di Sidoarjo).
Bahan–bahan kimia yang diperoleh di
pasaran komersial dengan kemurnian p.a antara
lain : NaOH, HCl, , MgCl2, Na2CO3, bahan buffer,
94
papain ,BSA, reagen Bradford, tirosin, TCA, reagen
folin, kasein dan air bidestilasi bebas ion.
PROSEDUR PENELITIAN
Preparasi dan Karakterisasi Kitosan
Kitosan dipreparasi dengan metode yang
dikembangkan No(1989) melalui deproteinasi,
demineralisasi dan deasetilasi. Karakterisasi
gugus fungsi kitosan dan % Deasetilasi dianalisa
dengan metode spektroskopi IR.
Adsorpsi Kation Magnesium Pada Kitosan
Larutan magnesium diinteraksikan dengan
100 mg kitosan pada pH, waktu interaksi dan
konsentrasi larutan dibuat bervariasi. Hasilnya
dianalisa pada pH optimum, laju dan kapasitas
adsorpsinya.
Imobilisasi Papain Pada Matriks
Sebanyak 100 mg matriks kitosan
diinteraksikan dengan 5 mL papain 20 mg/ml,
pH 7, selama 12 jam. Setelah interaksi kemudian
disentrifus pada 3500 rpm selama 10 menit.
Endapan selanjutnya diuji aktivitasnya.
Uji Aktivitas Papain
Sebanyak 2,5 mL buffer pospat pH 6,5;
0,05 M ditambah 0,5 mL kasein dimasukkan ke
dalam tabung sentrifus. Pada tabung lain
dimasukkan enzim papain 0,25 mL. Keduanya
dipreinkubasi pada suhu 55 0C selama 10 menit.
Setelah preinkubasi, enzim papain dimasukkan
dalam tabung yang berisi buffer dan kasein,
kemudian diinkubasi pada suhu 55 0C selama 10
menit. Setelah inkubasi, reaksi dihentikan dengan
ditambah 1 mL TCA 10 %, didinginkan selama 10
menit, kemudian disentrifus pada 3000 rpm
selama 10 menit. Filtrat dianalisa dengan cara: 2
mL filtrat ditambah 4 mL Na2CO3 ditambah 1 mL
reagen folin, diamkan selama 10 menit,
selanjutnya dianalisa dengan Spektrofotometer
UV-vis pada panjang gelombang 650 nm.
HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil isolasi kitin dari cangkang udang
dikarakterisasi gugus fungsinya dengan FTIR
Shimazu 8201. Data spektra ditunjukkan pada
Gambar 1 dan 2. Dari kedua gambar tampak pita
serapan pada bilangan gelombang 3448,5 cm-1
yang berasal dari vibrasi ulur –OH dan pita
serapan 2891,7 cm-1 yang berasal dari vibrasi
ulur C-O. Pada Gambar 1, muncul serapan pada
1580,5 cm-1 yang berasal dari vibrasi tekuk N-H
yang diperkuat oleh pita 3100,0 cm-1 sebagai
indikasi adanya gugus amina (-NH2) yang telah
terbentuk saat deproteinasi. Pada Gambar 2,
terjadi perubahan intensitas pada pita serapan
1580,3 cm-1 yang berasal dari vibrasi tekuk N-H
yang diperkuat oleh pita serapan 3116,8 cm-1
menunjukkan keberadaan amina (-NH2) pada
kitosan yang telah mengalami peningkatan bila
© Kimia ITS – HKI Jatim
Akta Kimindo Vol. 2 No. 2 Oktober 2007: 93-98
dibandingkan dengan kitin. Spektra IR hasil
identifikasi gugus fungsional kitin, dan kitosan
dapat digunakan untuk menentukan persentase
deasetilasi.
Gambar 1. Spektra IR Kitin
Hasil perhitungan persentase deasetilasi
dapat digunakan untuk membedakan senyawa
tersebut kitin atau kitosan. Hasil perhitungan
derajat deasetilasi dengan metode base line
untuk kitin 53,96%, sedangkan untuk kitosan
diperoleh hasil 84,80 % .
ADSORPSI KATION MAGNESIUM PADA KITOSAN
Hasil adsorpsi kation Magesium oleh
kitosan untuk menentukan pH optimum pada
tabel 1 menunjukkan bahwa adsorpsi kation
Mg(II) meningkat pada pH 4-7, kemudian
menurun pada pH 8. Adanya protonasi pada
Gambar 2. Spektra IR Kitosan
© Kimia ITS – HKI Jatim
gugus –NH2 menyebabkan melimpahnya ion H+ ,
sehingga terjadi persaingan pengikatan antara
gugus –NH2 kitosan dengan Mg(II) dan H+ . Hal ini
menyebabkan adsorpsi pada pH 4 rendah. Pada
pH 8 adsorpsi rendah karena sebagian kation
Mg(II) telah mengendap menjadi Mg(OH)2
disamping itu juga karena adanya persaingan
dengan ion Na untuk berikatan dengan gugus –
NH2 kitosan.
Hasil adsorpsi ion logam Cd(II) oleh kitosan
pada variasi konsentrasi ditampilkan pada
Gambar 3, yang secara umum menunjukkan
adsorpsi ion logam Mg(II) pada kitosan memiliki
kecenderungan mengalami peningkatan jumlah
logam teradsorpsi hingga konsentrasi awal 300
mg/L. Pada konsentrasi awal 600 mg/L kenaikan
konsentrasi logam tidak disertai kenaikan
adsorpsi ion logam Mg(II) secara signifikan. Pada
konsentrasi 900 mg/L diperkirakan situs aktif
kitosan telah jenuh oleh ion logam dan kitosan
telah mencapai kapasitas adsorpsinya. Dari data
yang diperoleh dapat disimpulkan bahwa adsorpsi
ion logam Mg(II) pada kitosan mengikuti pola
adsorpsi isoterm Langmuir. Menurut teori isoterm
Langmuir, adsorpsi diperkirakan terjadi pada
lapisan tunggal. Pada saat adsorbat memenuhi
lapisan, molekul yang terserap tak akan melebihi
jumlah situs aktif pada permukaan adsorben.
Perhitungan kapasitas adsorpsi, konstanta
kesetimbangan adsorpsi Mg(II) didapatkan
kapasitas adsorpsi sebesar 3,4673.10-4 mol/g,
konstanta kesetimbangan adsorpsi sebesar
2853.
95
 Cahyaningrum, Agustini dan Herdyastuti - Pemakaian Kitosan Limbah Udang Windu Sebagai Matriks Pendukung

Tabel 1.Pengaruh pH terhadap adsorpsi Mg(II) oleh kitosan

NO. pH Efisiensi Mg(II) teradsorpsi (%)

1. 4 10.9295

2. 5 15.234

3. 6 25.436

4. 7 50.678

5. 8 22.457

6. 9 19.672

600
jumlah Mg(II) teradsorpsi

500

400
(mg/L)

300

200

100

0
0 300 600 900 1200 1500 1800
konsentrasi awal (mg/L)

Gambar 3. Pengaruh konsentrasi pada adsorpsi Mg(II) oleh kitosan

jumlah Mg(II) teradsorpsi (mg/L)

500

400

300

200

100

0
0 30 60 90 120 150
w aktu (menit)

Gambar 4, Pengaruh waktu pada adsorpsi Mg(II) oleh kitosan

Data pengaruh waktu terhadap adsorpsi lama laju adsorpsi relatif konstan. Pada tahap ini
Mg(II) pada kitosan disajikan pada Gambar 4. proses adsorpsi diperkirakan telah mencapai
Data menunjukkan bahwa secara umum adsorpsi kesetimbangan. Dari data tersebut dapat
Mg(II) pada kitosan di atas mula-mula diperkirakan bahwa tahap kesetimbangan
berlangsung relatif cepat. Pada 30 menit pertama tercapai setelah adsorpsi berlangsung selama 60
adsorpsi meningkat tajam, penambahan waktu menit dan penambahan waktu adsorpsi ternyata
berikutnya ada sedikit peningkatan jumlah logam tidak memberikan kenaikan laju adsorpsi yang
yang teradsorpsi dan setelah berlangsung cukup signifikan.

96 © Kimia ITS – HKI Jatim

Akta Kimindo Vol. 2 No. 2 Oktober 2007: 93-98

16
aktivitas enzim(Unit) 14
12
10
8
6
4
2
0
0 20 40 60 80 100
suhu

Gambar 5. Suhu optimum papain ( ■ ) papain bebas; ( ▲ ) papain imobil

IMOBILISASI PAPAIN PADA KITOSAN DAN UJI UCAPAN TERIMA KASIH

AKTIVITAS PAPAIN IMOBIL
Hasil imobilisasi papain pada kitosan
menghasilkan 44,67 % papain dapat terimobil
pada kitosan. Uji aktivitas pada papain imobil
menunjukkan bahwa papain imobil mempunyai
suhu optimum 80 oC, sedangkan papain bebas 55
0C. Hal tersebut menunjukkan bahwa matriks
Penulis mengucapkan terima kasih yang
sebesar-besarnya atas dukungan dana penelitian
Proyek Peningkatan Penelitian Perguruan Tinggi
DP2M-DIKTI melalui Penelitian Hibah Bersaing XIV
dengan No. kontrak 020/SP3/PP/DP2M/II/2006
tanggal 1 Februari 2006.

mampu melindungi papain terhadap panas DAFTAR PUSTAKA

sehingga mampu bertahan pada suhu yang tinggi. Agustini, 2003. Karakteristik Imobilisasi
Dengan demikian papain imobil mempunyai range Karakterisasi Imobilisasi Protease
kerja yang tinggi sehingga hal ini sangat Mikroorganisme Thermofilik Isolat CG-10
menguntungkan pada proses-proses di industri. Yang Hidup Di Air Panas Cangar Jawa Timur
Pada pemakaian berulang papain imobil Dengan Matriks Pendukung Bentonit
mampu digunakan sebanyak 6 kali, dan pada Disertasi, UNAIR.
penggunaan ke 6 aktivitas katalitiknya masih 25- Cahyaningrum, S.E., 2003. Isolasi dan
30 % , papain bebas hanya sekali pakai karena Karakterisasi Kitosan Cangkang Udang
papain tercampur dengan produk sehingga Windu , Jurnal Hayati, Vol 2.
dilakukan proses perusakan untuk memisahkan Cahyaningrum, S.E., 2003. Kinetika Adsorpsi
dengan produk. Pada aplikasinya hal tersebut Kation Nikel Oleh Kitosan. Media MIPA,
sangat tidak ekonomis mengingat papain mahal UNESA.
harganya. Enzim imobil yang dihasilkan dengan Cahyaningrum, S.E., 2005 Pemanfaatan Limbah
cara imobilisasi tipe carrier–crosslinked Cangkang Udang Windu Sebagai Penyerap
mempunyai beberapa keuntungan antara lain: Kation Kadmium Dalam medium Air . Indon.
tidak mudah larut, tahan terhadap panas dan Journal Chem Vol .2.
penurunan aktifitas relatif kecil (Chibata,1978 , Chibata,I. 1978. Immobilixe Enzymes Research
Kiling,2001). and Development. Kodansha LTD, Tokyo,
Johan and Wiley and Sons, New York.
Darwis dan Sukara, 1990. Penuntun Praktikum
KESIMPULAN
Isolasi, Purifikasi dan Karakterisasi Enzim.
1. Kation Mg(II) teradsorpsi maksimum oleh
IPB. Bogor.
kitosan pada pH 7, kesetimbangan terjadi
Indra., Akhlus, S., 1993. Hidrolisis Khitin Menjadi
pada konsentrasi awal 900 mg/L dan waktu
Khitosan serta Aplikasinya Sebagai
interaksi 120 menit.
Pendukung Padat, Jurusan Kimia FMIPA ITS ,
2. Imobilisasi papain pada kitosan
Surabaya.
menghasilkan enzim papain imobil yang
mempunyai suhu optimum 80 0C dan mampu
digunakan secara berulang sebanyak 6 kali.

© Kimia ITS – HKI Jatim 97

 Cahyaningrum, Agustini dan Herdyastuti - Pemakaian Kitosan Limbah Udang Windu Sebagai Matriks Pendukung

Lehninger AL. 1990. Dasar-dasar Biokimia , Sun S. and Tu Si. 1999. Immobilization of
terjemahan Maggy Thenawidjaya. Jaharta, Horseradish Peroxidase in Cross-linked
Penerbit Erlangga.. Phylloilicates: Condition and
H, K, No.., Meyer,S.P. 1989., Isolation and Characterizations. Biotechnol Appl. Biochem.
Characteization of Chitin From Crawfish Shell 29 (Pt 2):185-189
Waste, J.Agric.Food. Chem, 37,575-579.
Sarah, A., 2001. Immobilization and Stabilization
of Papain on Chelating Sepharose, Electronic
J. Biotechology. Catolica de Velparaaiso
Chile.

98 © Kimia ITS – HKI Jatim