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METTHEY Nathanaëlle M2

TVIA

PAVEL Andreea

SUCIU Iuliana

NACEUR Lynda

MEGLOULI Hacène

DAHMANE Ismahane

TP Purification II
Extraction solide-liquide des composés
phénoliques à partir des fruits de caroube

I. Introduction

Le but de ce TP est de déterminer les conditions optimales pour l’extraction


de polyphénols à partir des cosses de caroube. Les différents paramètres testés
sont l’agitation, la température, les solvants, le rapport poids de
l’échantillon/Volume de solvant et enfin l’utilisation de cosses ou de graines.

Les extraits sont ensuite analysés par les méthodes de Folin et DPPH pour
déterminer l’activité anti-oxydante ainsi que pour mesurer les phénols totaux.

II. Matériels et Méthodes

Procédé d’extraction :

Nous avons utilisé un système de chauffage à reflux pour extraire les


polyphénols. Après avoir pesé une masse d’échantillon, nous l’avons introduite
dans le ballon posé sur le chauffe-ballon. Nous avons ensuite introduit le solvant
choisi puis nous avons fixé la colonne réfrigérante et mis en route l’alimentation
en eau et le chauffage. Nous avons laissé le montage en place une heure à partir
du début d’ébullition puis nous avons laissé refroidir le ballon. Nous avons
ensuite prélevé 30mL d’échantillon que nous avons centrifugé 15 minutes à
10 000g et 22°C pour éliminer les molécules non solubles. Le surnageant a
ensuite été analysé.

Pour les expériences sur l’influence de l’agitation, les solutions n’ont pas
été chauffées.

Matériel :
Eau

Ethanol à 95%

Colonne réfrigérante

Agitateur magnétique

Chauffe ballon

Folin

Solution de carbonate de sodium

DPPH

Verrerie

Echantillons testés :

N° Solvant m Températ Agitatio V solvant M


Echantill éch/V ure n (mL) échantillon
on solvan (g)
t
1 Eau 1/20 Ebullition Oui 100 5
2 Ethanol 1/20 Ebullition Oui 200 10
3 Eau/Ethan 1/20 Ebullition Oui Eau : 95 10
ol 50/50 EtOH : 105
4 Eau 1/20 Ambiante Oui 200 10
5 Eau 1/20 Ambiante Non 200 10
6 Eau/Ethan 1/20 Ebullition Oui Eau : 95 10
Graines ol 50/50 EtOH : 105
7 Eau 1/10 Ebullition Oui 50 5
8 Eau 1/50 Ebullition Oui 200 4

Techniques d’analyse :

• Matière sèche : Cette technique permet de déterminer le rendement de


l’extraction choisie. On utilise alors un dessicateur.

• Activité anti-oxydante : On mesure l’activité anti-oxydante (ou acticité anti-


radicalaire) par la méthode de DPPH. Pour ce faire on utilise le DPPH qui
est un donneur d’électron et qui permet de mesurer la capacité d’un
composé à capter des radicaux libres. Cette réaction entraine un
changement de couleur qui se traduit par un changement d’absorbance.
• Phénols totaux : On utilise la méthode de Folin qui mesure l’absorption des
polyphénols présents. On utilise ensuite une courbe étalon établie avec de
l’acide gallique. Cette technique permet d’évaluer la pureté des extraits
(plutôt la concentration des phénols totaux).

III. Résultats

• Matière sèche :

Echantillo Matière sèche Rendement (%)


n (%)
1 3.12 3.68
2 0.19 0.22
3 2.17 2.56
4 1.22 1.44
5 0.16 0.19
6 0.11 0.12
7 6 7.07
8 1.17 1.38
Caroube 84.84
Graine 89.75

Rendement= % matière sèche échantillon / % matière sèche référence (caroube


ou graine) x 100

Nous pouvons remarquer qu’avec l’eau seule, le rendement est plus


important qu’avec un mélange eau/éthanol. Et le rendement est encore plus
inférieur avec de l’éthanol seul.

Concernant l’effet de la température, nous observons que le rendement est de


1.44% à température ambiante alors qu’il est trois fois plus important (3.68%) à
ébullition. De la même façon, l’agitation permet d’obtenir un bien meilleur
rendement (7 fois plus grand).

Le rapport masse échantillon/ volume solvant qui permet d’obtenir le meilleur


rendement (avec de l’eau) est 1/10. Le rendement diminue avec la dilution de
l’échantillon.

Enfin, le rendement est moins important lorsque l’on utilise les graines.

• Activité anti-oxydante :

Echantillo DO échantillon Activité anti-


n oxydante (%)
1 0.187 81.07
2 0.633 35.93
3 0.1 89.87
4 0.182 81.57
5 0.872 11.74
6 0.119 87.95
7 0.113 88.56
8 0.338 65.78

Pour calculer l’activité anti-oxydante on utilise la formule suivante :

AR(%)= [(DO contrôle-DO échantillon)/DO contrôle] x 100 avec DO


contrôle=0.988

Nous obtenons des activités anti-oxydantes dans le même ordre de grandeur


l’activité est corrélé fortement avec la quantité extraite), sauf on niveau
d’extraction avec l’eau ou l’activité est moins faible qu’avec le mélange eau /
éthanol et cela du aux variétés des poly-phénols extraits avec le solvant mixte.

• Phénols totaux :

Echantill DO DO Valeurs Ctp % des


on expérience 1 expérience 2 admises (mg/L) Phénol
1 1.110 1.018 1.064 971,81 73.56
2 0.151 0.039 0.151 40 47.61
3 0.502 0.490 0.496 455.45 47.3
4 0.177 0.170 0.173 161.81 31.14
5 0.022 0.006 0.022 24.540 34.28
6 0.860 1.157 1.008 920.90 29.29
7 0.535 1.820 1.820 1659.09 31.13
8 0.178 0.387 0.387 166.36 69.56

Pour calculer la concentration des poly-phénols totaux on utilise la formule


suivante :

Ctp(%)= [(A765+0.005)/0.0011] avec A765 c’est l’absorbance de chaque


échantillon.

On a calculé la pureté des poly-phénols de la manière suivante :

Pour échantillon N°1

On a le rapport 1/20 c.à.d. la quantité de la matière sèche est de 84.84%X1/20=


42.42g/L

La quantité de la matière sèche de l’extrait est égale à


(3.12X42.42)/100=1.32g/L

La pureté= (0.971/1.32)X100=

On remarque que la meilleure concentration extraite est celle de l’eau à 1/10 et


la matière extraite est corrélée avec la concentration initiale.
Par contre la pureté des poly-phénols est presque la même sauf avec l’eau a 1/20
et 1/50.

IV. Discussion

La fiabilité des résultats obtenus est discutable puisqu’un seul essai par
expérience a été réalisé. Il aurait fallu faire chaque expérience en triple pour
pouvoir calculer la moyenne et l’écart-type des résultats et ainsi pouvoir conclure
sur la variation et la validation statistique des conclusions établies
précédemment.

En ce qui concerne les résultats de matière sèche, nous obtenons de faibles


valeurs. Par conséquent une faible variation entre deux résultats entraîne
rapidement une grande différence qui n’est alors pas forcément significative.

Les meilleures conditions pour l’extraction des poly-phénols à partir de


caroube sont l’eau comme solvant à une température d’ébullition avec agitation