IX-Capítulo 4
Tiempo Real)
Detección de OGM en la cadena
alimentaria
Tozzini, Alejandro C.
Una gran cantidad de plantas
genéticamente modificadas (GM) han sido
aprobadas para su cultivo en el ámbito mun-
dial luego de haber pasado por rigurosos con-
troles de seguridad alimentaria y ambiental.
Sin embargo, algunos mercados, en particu-
lar la Unión Europea, tienen estrictos reque-
rimientos para su etiquetado. En este caso,
la normativa de etiquetado que rige a partir
de abril de 2004, establece el etiquetado
obligatorio de los alimentos y piensos deri-
vados de un OGM, independientemente de
la detectabilidad de ADN o proteínas, y sólo
admite la presencia adventicia (accidental) de
hasta un 0.9% de OGM aprobados o de 0,5%
en el caso de eventos, aún no aprobados
pero con un dictamen de bioseguridad favo-
rable.
La Argentina es uno de los países con
mayor adopción de OGM, segundo después
de los EE.UU. y antes que Canadá. El aprove-
chamiento a campo de los beneficios de la
biotecnología vegetal implicó inmediatamen-
te la necesidad de implementar procedimien-
tos de campo y laboratorio para poder dis-
criminar mercaderías conteniendo un nivel de
OGM superior a un determinado umbral, de
aquellas que estaban por debajo. A partir del
año 1997 los exportadores comienzan a de-
mandar el análisis de partidas de granos des-
tinados a la Comunidad Europea. En ese
momento el contenido aceptable era infe-
rior al 1%, los protocolos de detección reque-
rían de la germinación de los granos (para
extraer ADN de las hojas) y en algunos casos
hasta el uso de sondas radioactivas. Desde
entonces, se ha avanzado sensiblemente en
una serie de aspectos que han hecho evolu-
cionar el panorama, tanto en el país como
en el mundo:
- Se han desarrollado protocolos de
purificación de ADN y de PCR para aplicar
a gran escala.
- Los métodos de PCR han evoluciona-
Biotecnología y Mejoramiento Vegetal
do hacia técnicas cuantitativas (PCR en
- Se han desarrollado técnicas
inmunológicas y «kits» específicos de fácil
aplicación.
- Hay más información molecular sobre
los eventos y los primers específicos corres-
pondientes.
- Los operadores de mercado se han
familiarizado con el concepto de OGM.
- Se han desarrollado y aplicado pro-
gramas de Trazabilidad e Identidad Preser-
vada para la característica «genéticamente
modificado».
- Se discuten protocolos y materiales
de referencia a nivel de normas de CODEX
Alimentarius, ISO (International Standards
Organization) e ISTA (International Seed
Testing Asociation) entre otras.
- En el país se ha desarrollado una lo-
gística de segregación de granos y semi-
llas capaz de abastecer con distintos pro-
ductos, los requerimientos específicos de
mercados de exportación, o del nacional,
en aquellos casos en los que la demanda
esté dispuesta a cubrir los costos deriva-
dos de la segregación.
A grandes rasgos, una planta genética-
mente modificada es aquella a cuyo genoma
se han incorporado uno o más transgenes
mediante alguna de las técnicas de ingenie-
ría genética. Estos transgenes poseen una
secuencia nucleotídica específica y algunos de
ellos se expresan generando una proteína
nueva en el organismo, lo cual le va a confe-
rir un nuevo fenotipo a la planta. En cual-
quiera de estos tres niveles, ADN, proteí-
nas o fenotípico, es posible hacer un análi-
sis para determinar cualitativa o
cuantitativamente la presencia de una
modificación genética. La detección a nivel
de ADN se realiza mediante amplificación
por PCR, a nivel de proteínas por técnicas
inmunológicas (tiras reactivas o ELISA), mien-
tras que la fenotípica implica la evaluación
de la nueva característica producida por el
transgen. Desde el punto de vista de los re-
querimientos técnicos, el análisis fenotípico
puede ser el más sencillo, mientras que el aná-
lisis por PCR es en general, el más complejo.
Los protocolos analíticos son muy sensi-
409
bles ya que detectan un gen en decenas de
miles de genes del genoma, o una nueva pro-
teína entre varios miles de proteínas. A esto
hay que sumarle la «dilución» no OGM /
OGM, que en muchos casos requiere detec-
tar y cuantificar un grano GM entre varios
miles.
Actualmente, los protocolos pueden de-
tectar un evento o grupo de eventos en un
cultivo en particular pero ninguno puede hoy
detectar en un único ensayo todos los even-
tos, por eso no se puede asegurar que una
muestra está «libre de OGM»; sólo se puede
asegurar que está libre de los eventos para
los cuales se hayan realizado los análisis per-
tinentes.
Detección fenotípica
En referencia a los métodos de detección
fenotípica, nos concentraremos en el
fenotipo como resultado de algún proce-
so metabólico de la planta (y no restringirnos
a una definición de fenotipo que implique la
medición de alguna proteína). Las plantas
genéticamente modificadas (PGM) que se
encuentran actualmente a campo presentan
la característica de resistencia a herbicida y/o
a insectos. La evaluación de la resistencia a
insectos de una planta se realiza mediante
ensayos biológicos complejos y de larga
duración, por eso ésta no es una alternativa
práctica parael análisis de granos. Sin embar-
go, la resistencia a herbicidas sí puede ser
evaluada mediante ensayos sencillos en la-
boratorio y a campo. Las semillas o granos
pueden ser puestos a germinar en presencia
del herbicida (para soja, 0.5 ml glifosato 48%
en 1 litro de agua; Monsanto America Lati-
na. 2001), y sólo germinarán aquellos indivi-
duos portadores del gen de resistencia (Fig.
1).
La cantidad de semillas GM puede ser
estimada en la muestra mediante un cál-
culo sencillo: semillas RR = semillas germi-
nadas con glifosato/semillas germinadas
con agua.
Una vez que un lote ha sido sembrado y
mientras el cultivo se encuentre en una eta-
pa en la que es susceptible al herbicida, se
pueden hacer aplicaciones de herbicida en
pequeñas parcelas representativas (Fig. 2)
para luego hacer el recuento de plantas so-
410 TOZZINI, Alejandro C.
Figura 1: mezcla de semillas de maíz no GM y GM (evento
GA 21, Monsanto) puestas a germinar con agua (superior)
y con solución de glifosato (inferior). (gentileza de Ing.
Agr. Silvia Passalacqua y Mónica Abal. Lab. del SENASA)
brevivientes sobre total de plantas tratadas.
Si los individuos GM y no GM tienen el mis-
mo rendimiento entonces, los granos que
se cosechen en ese lote tendrán una pro-
porción de GM/ no GM igual al porcentaje
de plantas sobrevivientes.
Estas alternativas de evaluación son usa-
das en soja por los propios productores que
abastecen a parte de la industria nacional
productora de jugos y alimentos a base de
soja. La industria, por su parte, controla esta
materia prima mediante el uso de tests
inmunológicos a la entrada de la planta pro-
cesadora. Generalmente de un conjunto de
lotes así controlados se toma una muestra
que se envía a un laboratorio para realizar
un análisis por PCR para así tener un límite
de detección menor y una cuantificación del
contenido de GM, lo que además les permi-
te obtener un certificado de una tercera par-
te (laboratorio independiente) para el con-
trol de procesos de producción.
¿Detección inmunológica o por PCR?
La elección del método de detección de-
pende de varios factores, uno de ellos es el
producto que se va a analizar: la matriz (gra-
nos, harina, galletita, sopa, etc). En el caso
de grano y los primeros productos de mo-
lienda de éstos, tanto la proteína como el
ADN conservan sus propiedades físico-
químicas intactas, por lo tanto ambos mé-
todos pueden aplicarse. Sin embargo, a me-
dida que la materia prima es elaborada ha-

Figura 2: representación esquemática de la aplicación
de herbicida en parcelas representativas en un lote de
soja para determinar y cuantificar la presencia de
individuos GM con resistencia al herbicida.
cia alimentos terminados, los distintos trata-
mientos a que son sometidos los componen-
tes, hacen que se vayan degradando el ADN
y las proteínas. Especialmente estas últimas
pierden su estructura disminuyendo rápida-
mente sus propiedades inmunológicas, por
lo tanto no es apropiado aplicar métodos
inmunológicos a alimentos con alto grado
de procesamiento.
El ADN, por su parte, se corta en frag-
mentos pequeños, hasta que la mayoría
tiene un largo menor al segmento a ampli-
ficar y por lo tanto ya no resulta ampli-
ficable. A esto hay que sumarle las modifica-
ciones químicas de las bases del ADN que
hacen que pierdan su capacidad de servir
como templado en el proceso de copia in
vitro que ocurre durante la PCR (Fig. 3), por
eso en determinadas ocasiones la presencia
de OGM en las materias primas usadas deja
de ser detectable en el producto final. Algo
similar ocurre con aquellas materias primas
usadas como sustrato de procesos
fermentativos, como la fabricación de cerve-
za, al final del cual la mayoría de las molécu-
las han sido digeridas y resintetizadas.
Junto con esto cabe acotar que los cos-
tos de extracción/purificación del ADN son
mayores a partir de matrices elaboradas y/o
complejas.
Otro de los factores que atenta contra
las posibilidades de detección es el grado de
purificación del producto: en productos
como los aceites, la lecitina o la glucosa no
queda una cantidad suficiente de ADN como
para ser purificado y amplificado.
Biotecnología y Mejoramiento Vegetal
Procedimientos inmunológicos
Básicamente dos son los formatos que
toman los ensayos inmunológicos para la
detección de OGM: las tiras reactivas (o
strips de flujo lateral) o ELISA (ensayo de
inmunodetección ligado a enzimas).
Flujo lateral o lateral flow
En este formato se reúnen todos los
reactivos en un soporte sólido y mediante
el flujo por capilaridad de la muestra en so-
lución se logra determinar la presencia o au-
Figura 3: Representación esquemática de la degradación
de las propiedades fisico-químicas de las proteínas y del
DNA con el grado de procesamiento de la materia prima
hasta el alimento terminado. De alli la elección de la
técnica adeacuada para detectar OGMs según la matriz a
analizar.
sencia de una determinada proteína (análi-
sis cualitativo). Este formato ha sido
exitosamente aplicado para la detección de
un sinnúmero de moléculas de importancia
en el diagnóstico veterinario y humano,
como es el caso de los tests rápidos de em-
barazo. Para el ensayo debe molerse una
cantidad determinada de granos y una alí-
cuota de esta harina mezclarse con un bu-
ffer (provisto con el kit) o agua, para gene-
rar una solución que incluya la proteína de
interés. La tira posee en la parte inferior un
fieltro que sirve para absorber la solución
con las proteínas y filtrar las partículas que
se hallan en suspensión (Fig. 4). Al mismo
tiempo, en el otro extremo se encuentra un
material absorbente que recibe el flujo que
asciende por capilaridad. El líquido en su
ascenso, pasa primero por una zona en don-
de se halla un anticuerpo monoclonal (Atb)
contra la proteína a detectar, conjugado con
una molécula coloreada (con oro o látex). Si
la proteína está presente en la muestra, en
esta zona se producirá el reconocimiento
411
por el Atb y ambos seguirán migrando jun-
tos. La segunda zona es la de «pegado» o
línea de resultado. En ésta se halla inmovili-
zado un segundo anticuerpo monoclonal
contra la proteína en cuestión, de forma que
cuando ésta llega a esa zona, queda reteni-
da y concentrada en una línea delgada, y al
traer consigo al conjugado coloreado, la re-
gión comienza a ser visible.
Finalmente, hay una tercera zona llama-
da de control, en la cual un segundo anti-
cuerpo contra el anticuerpo conjugado está
inmovilizado y retiene al conjugado que no
haya quedado retenido en la línea de re-
sultado, generando también una línea visi-
ble en esa zona. Esto indica que se produjo
el flujo ascendente de líquido y que el anti-
cuerpo conjugado se halla en buenas condi-
ciones. La aparición de esta línea avala los
resultados negativos, al indicar que la fal-
ta de color en la linea de resultado no se
debe a una falla del kit. Cuando el resulta-
do es positivo (visualización de color en la
zona de resultado) no es necesario que apa-
rezca la banda de control. En la práctica, la
banda de control presenta menor intensidad
en las muestras positivas que en las negati-
vas debido a que el conjugado que llega a
esta zona es sólo aquel que no se adhirió a
la proteína y no quedó retenido en la línea
de resultado (ver foto en Fig. 4). En casos
excepcionales todo el conjugado queda re-
tenido en la línea de resultado quedando sin
color la banda de control.
Para realizar el ensayo a partir de granos
es necesario moler los mismos y resuspender
en un buffer una muestra representativa de
la harina obtenida. En esta suspensión se
introduce la parte inferior de la tira y se es-
pera de 10 a 20 minutos el desarrollo de co-
lor. El resultado es cualitativo (positivo o
negativo) y la sensibilidad (o límite de de-
tección) oscila entre el 0.5 y 2% para los
eventos Bt11 y Mon810 en maíz (eventos
protegidos de insectos con el gen cry1Ab de
B.thuringiensis) y de 0.1-0.3% para soja RR
(evento GTS 40-3-2, tolerante a glifosato, con
el gen para la enzima CP4EPSPS). Como se
mencionó, el ensayo es cualitativo, pero a
partir de los resultados se pueden hacer cál-
culos estadísticos para determinar la proba-
bilidad de que la muestra tenga un conteni-
do de granos GM inferior a un determinado
412 TOZZINI, Alejandro C.
valor para un dado nivel de confianza. Para
esto, es imprescindible conocer la sensibi-
lidad del strip expresada en granos GM/
granos no GM, y trabajar con submuestras
que no excedan este número para evitar re-
sultados falsos negativos. Por ejemplo, la
sensibilidad de detección de la proteína CP4
EPSPS es de 1 grano GM en 1000 no GM,
por lo tanto el número máximo de granos
a incluir en cada submuestra es de 1000.
Entonces, para una submuestra de 1.000 gra-
nos de resultado negativo y aceptando un
nivel de confianza de 95% (i.e. la probabili-
dad de resultado negativo del análisis es de
5%), la frecuencia de no GM (probabilidad
de no GM) será la raíz unmilésima de 0.05;
esto es 0.997 y por lo tanto el contenido
máximo de GM esperado es de 0.003 (0.3%).
Si de la misma muestra se analizan dos
submuestras de 1.000 granos y ambas resul-
tan negativas, el cálculo ahora involucra la raíz
dosmilésima de 0.05, lo que determina un
contenido máximo de GM de 0.0015 (0.15%).
Realizando el análisis de submuestras, la sen-
sibilidad de análisis de una muestra se puede
mejorar combinando estadísticamente los re-
sultados de cada una de ellas. Los manuales
de los distintos kits incluyen tablas de cálculo
que están basadas en estos conceptos.
En general, los strips reactivos tienen
una versión optimizada para la detección
a partir de tejido vegetal para poder reali-
zar el análisis en los períodos en que el culti-
vo aún no presenta granos. La mayor venta-
ja de realizar el análisis en granos es la facili-
dad para muestrear cientos de individuos y
combinarlos en una misma muestra; esto es
mucho más difícil de lograr a partir de la re-
colección de hoja. Por otro lado, algunos
eventos (ej, maiz Bt 176, de Syngenta) tie-
nen niveles de expresión de las proteínas
transgénicas altos en hojas y prácticamente
nulos en granos, por lo tanto en estos casos
resulta ventajoso el análsis de hojas y des-
aconsejado el de granos. Como se observa
en la Figura 5 los eventos Bt11 y MON810
pueden ser detectados hasta en una concen-
tración de 0.5%, mientras que el evento 176
no se detecta, aún en una concentración de
10%. Resultados similares se obtienen con los
strips provistos por Envirologix o por
Strategic Diagnostic Inc (A. Tozzini, datos no
publicados). Otros datos de perfomance de

Figura 4: Esquema de las partes de un strip reactivo (ver
texto) y foto de dos strips para la detección de la proteína
CP4 EPSPS (resistencia a glifosato) mostrando un
resultado negativo (izq.) y otro positivo (der). (Gentileza
de Mónica Porcio, Agricheck Argentina, representante
de Strategic Diagnostic Inc. www.sdix.com )
Figura 16: Lectura de un microchip luego de la
hibridación con DNA marcado. Suponiendo que se tratara
de un micro-array para identificar GMO, los puntos
fluorescentes representarían secuencias pertenecientes
a GM presentes en la muestra. En primer plano se muestra
una ampliación de uno de los 16 campos que conforman
el micro-array.

reactivos inmunológicos en formato de strips

o de ELISA para distintos eventos y provee-
dores puede verse en http://
www.usda.gov/gipsa/tech-
servsup.
Obviamente la gran venta-
ja de esta metodología de aná-
lisis radica en su simplicidad y ra-
pidez, por eso se la utiliza «a
campo» como control inicial
en la conformación de conjun-
tos que luego serán analiza-
dos por algún método cuanti-
tativo, o como primer control
a la entrada de un proceso o
industria.

ELISA (enzyme-linked
immunosorbant assay)

En este caso, el análisis

Figura 5: Ensayo de límite de detección de granos de maíz Bt utilizando inmunológico se resuelve sobre
el Quickstick TM de Envirologix (www.envirologix.com). Los porcentajes
expresan granos de un evento/granos no GM. Entre paréntesis figura el el soporte sólido de placas de
tiempo en minutos transcurridos desde el inicio del ensayo y en el cual poliestireno en el formato de
se iniciaron las lecturas de los resultados. No hubo cambios en una 96 pocillos o de tiras de 8 o 12
lectura posterior a los 20 min. (A. Tozzini, Instituto de Biotecnología pocillos. Estos pocillos están
INTA)
recubiertos con el anticuerpo de

Biotecnología y Mejoramiento Vegetal 413

 DNA genómico
Primers (en exceso) Separada de las hebras (95ºC) y
pegado de los primers (60ºC)
Primers complementarios a la secuencia genómica
CICLO 1
Extensión de los primers (72ºC) por
la Taq polimerasa
Nuevas cadenas de DNA sintetizada a partir de los
primers y sobre las hebras genómicas
Separado de las hebras, pegado de
los primers y extensión
CICLO 2 rior, y que está conjugado con una
Nuevas cadenas de DNA sintetizada sobre DNA
sintético (tamaño del fragmento a detectar)
Separado de las hebras, pegado de
los primers y extensión
CICLO 3
DNA doble cadena del tamaño esperado (amplicón)
Duplicación de la cantidad de amplicón
por cada ciclo de amplificación
CICLO 30
1.000.000.000 copias de amplicón
Figura 6: Esquema del proceso de PCR (Polimerase Chain Reaction). muestra. La intensidad de color
Amplificación de un fragmento específico de DNA mediante un proceso generada en un pocillo determi-
de síntesis in vitro.
captura, en los cuales se agrega la
solución con la muestra (prepara-
ción similar a la anterior). Si la pro-
teína en cuestión (antígeno) está
presente, ésta queda capturada
en el pocillo por los anticuerpos.
Finalizado el período de incu-
bación con la muestra ésta se vuel-
ca del pocillo y se realizan lavados
con buffer para retirar las molécu-
las que no hayan sido capturadas.
Luego se coloca un segundo anti-
cuerpo que se unirá a la proteína
capturada por el anticuerpo ante-
enzima que transformará el
cromógeno (ver más adelante).
Finalizada la incubación con el
conjugado, se lava con buffer para
retirar todo el conjugado libre (no
unido al antígeno). El último
reactivo que se agrega es una so-
lución conteniendo un cromó-
geno, una sustancia incolora que
es modificada por la enzima del
conjugado en un compuesto co-
loreado y que revela, por lo tan-
to, la presencia del antígeno en la
nado en un tiempo dado es me-
dible en un espectrofotómetro

Figura 14: Desarrollo de la amplificación en una PCR en Tiempo Real para distintas muestras (incluyendo la curva de
calibración, el control sin DNA (línea horizontal marrón) y el control negativo (inicia fase exponencial en ciclo 39.

414 TOZZINI, Alejandro C.

para placa de ELISA y es proporcional a la
cantidad de antígeno inicial.
Por lo tanto, esta lectura puede transfor-
marse (con una curva de calibración apropia-
da) en una estimación cuantitativa del con-
tenido del OGM en la muestra. La sensibili-
dad de estos análisis se encuentra entre el
0.3 y 1%, y requiere de un laboratorio de
complejidad baja a media y personal califica-
do. El resultado se obtiene en 3 a 4 horas
(sin contar la molienda de la muestra). Como
en el caso de las tiras, también son varias las
empresas que ofrecen anticuerpos y placas
para realizar este tipo de ensayo (ver http:/
/www.usda.gov/gipsa/tech-servsup). Este
ensayo es adecuado para asistir un proce-
so de segregación de granos, para aquellos
eventos que tengan una buena expresión de
la proteína transgénica en granos y en casos
que se necesite hacer un análisis cuantitativo
sencillo.
Para un determinado tipo de proteína,
por ejemplo la de Bacillus thuringiensis Bt
Cry1A, la secuencia de aminoácidos codifica-
da es la misma (o muy similar) en las distin-
tas construcciones utilizadas para generar los
distintos eventos de transformación, aún
cuando sus secuencias nucleotídicas sean muy
distintas. Por eso, el mismo anticuerpo pue-
de ser usado para detectar distintas cons-
trucciones presentes en los distintos even-
tos (los maíces tolerantes a lepidópteros
MON 810, Bt11 y Bt176, tienen Bt Cry1A).
En algunos casos no es posible generar
un anticuerpo para detectar la proteína in-
troducida debido a que es muy similar a pro-
teínas propias de la planta original y por lo
tanto no es posible generar un anticuerpo
que detecte a la proteína introducida sin
detectar también la ya presente en la planta
(reacción cruzada). Este es el caso de la pro-
teína que determina la resistencia a glifosato
introducida en el evento GA21, en el cual la
proteína modificada (mEPSPS, la enzima to-
lerante al herbicida) presenta sólo dos
aminoácidos de diferencia en 450, con res-
pecto a la EPSPS nativa de maíz, la cual es
sensible al glifosato.
Detección del ADN
Existen varias técnicas para determinar la
presencia de una determinada secuencia de
Biotecnología y Mejoramiento Vegetal
ADN; sin embargo, los servicios de detección
de secuencias transgénicas utilizan casi exclu-
sivamente PCR. El transgen es uno más en-
tre las decenas de miles de genes origina-
les de la planta. Además, en la práctica, se
requiere de la capacidad de poder detectar
un grano GM entre 1.000 o 10.000 granos
no GM, y la PCR ha demostrado tener la sen-
sibilidad suficiente como para cumplir este
cometido. Sin embargo, la mayor dificultad
de un análisis dirigido a detectar niveles mí-
nimos de OGM no radica en las técnicas ana-
líticas sino en la posibilidad de hacer un
muestreo representativo en la práctica, acor-
de a los niveles a detectar. Las muestras de
granos (de al menos 15.000 granos para
detecciones de 0.1%) deben ser molidas y
reducidas en su granulometría para tomar
una muestra de harina menor a un miligramo
y de allí, purificar su ADN.
La reacción en cadena de la polimerasa
es una síntesis in vitro de ADN, mediada por
una ADN polimerasa ADN-dependiente a
partir de un cebador o primer (segmento de
ADN simple cadena de 18 a 25 nucleotidos).
Un par de primers son utilizados para deter-
minar la especificidad y el tamaño del frag-
mento a amplificar. Una ADN polimerasa
termo-rresistente proveniente de Termo-
philus aquaticus, Taq polimerasa, es la enzi-
ma encargada de la replicación del ADN
bajo un programa de ciclos repetidos que
alterna normalmente tres temperaturas: una
temperatura de desnaturalización (94-
95°ºC) en la cual el ADN doble cadena se abre
en hebras simples, le sigue una etapa de hi-
bridación de los primers (de 45 a 68° ºC) en
la cual éstos se unen por complementariedad
de bases con el ADN simple cadena y sirven
de punto de inicio de la síntesis de ADN por
la Taq polimerasa. Finalmente la temperatu-
ra se eleva a 72°ºC, en la fase de elongación,
ya que ésta es la temperatura óptima de fun-
Figura 7: Ubicación de distintos pares de primers con
respecto a la construcción y al sitio de inserción en el
genoma de la especie.
415
cionamiento de la enzima y de esta forma se Tabla 1: Número de copias por genoma de distintas
acelera la reacción. Así termina un ciclo de secuencias regulatorias en diferentes eventos (P35S =
promotor 35S CaMV. Tnos = terminador de la nopalin
copia y se inicia el siguiente elevando nueva- sintetasa. T35S = terminador del 35S de CaMV)
mente la temperatura hasta 94-95°ºC (Fig. 6,
Evento P 35S Tnos T35S
ver pág.6). Estos ciclos tienen una duración
de 2 a 4 minutos y se repite de 35 a 50 ve- GA21 0 1
ces multiplicando una copia del fragmen- GTS 40-3-2 1 1
to inicial en más de 1.000 millones de co-
pias al final del proceso. MON 810 1

El producto de la amplificación se resuel- NK 603 1 2

ve por electroforesis en gel de agarosa y se
3 T25 1 1
visualiza con un colorante fluorescente
(bromuro de etidio) bajo radiación UV. Este TC1507 1 2
aparece como una banda de un tamaño pre- 1 3
176
determinado de pares de bases, correspon-
diente al fragmento amplificado. Bt11 2 2

La técnica de PCR es muy sensible, y por MON 809 3 1

lo tanto, niveles ínfimos de contaminación
T14 3 3
con ADN en una muestra pueden generar
un resultado positivo falso. La amplificación MON 832 4 1
repetida del mismo fragmento de ADN
DBt418 5
(amplicón) va generando cientos de miles de
millones de copias dentro del mismo labora- CBH 351 ³5 ³5
torio y estas copias pueden contaminar las
nuevas muestras y los reactivos si no se tie- plificación y se resuelve por electroforesis. En
nen cuidados especiales. En primer lugar se este último cuarto se abre el tubo de reac-
ción y es donde se «liberan» los
810
amplicones. Es conveniente que el
primer y último cuarto tengan pre-
sión negativa, mientras que en el
de purificación la presión debe ser
positiva.
Cada cuarto debe ser limpiado
regularmente con hipoclorito de
Bt11 sodio, tener un sistema de luz UV
para la destrucción del ADN y tener
40-3-2 sus propios equipos e instrumentos.
Sólo personal capacitado puede in-
Figura 8: Representación esquemática de las partes componentes de gresar en los laboratorios para
las construcciones de los eventos aprobados en la Argentina en soja y minimizar el transporte de
maíz (no están los dos eventos en algodón). P35S: promotor 35S,
T35S: terminador 35S, Tnos: terminador de la nopalin sintetasa, Pmaíz: amplicones de un cuarto a otro.
promotor no especificado de un gen de maíz, Cry 1Ab: proteína Bt El reactivo clave en una reacción
que confiere resistencia insectos, CP4 EPSPS: proteína que confiere de PCR son los primers que deter-
resistencia al herbicida glifosato, PAT: fosfinotricin acetil transferasa, minarán el fragmento a amplificar.
determina resistencia a glifosinato.
Para esto, se requiere conocer la
requiere de un laboratorio especialmente di- secuencia de nucleótidos de un segmento
señado con cuartos separados para las dis- de la construcción usada para generar el
tintas tareas del análisis y con un flujo evento, para así poder diseñarlos. Esta in-
unidireccional de la muestra desde las áreas formación no siempre está disponible, pero
«limpias» hasta la última zona «sucia». En el una vez que se la conoce, la síntesis de
primer cuarto se muele la muestra, en el se- primers es mucho más barata y sencilla que
gundo se purifica el ADN y se prepara la reac- la producción de anticuerpos para reactivos
ción de PCR y en el último se produce la am- inmunológicos. Según sea la secuencia so-

416 TOZZINI, Alejandro C.


Figura 9. Evolución de la acumulación de DNA en una
reacción de PCR positiva. La fase exponencial de
crecimiento está marcada entre barras.
Figura 10: Evolución de la acumulación de DNA en
función de los ciclos para distintas reacciones de PCR
correspondiente a diferentes concentraciones iniciales
del fragmento de DNA a amplificar. La línea umbral
corresponde a un determinada cantidad de DNA, que es
superado por las distintas reacciones en diferentes ciclos.
bre la cual se ubiquen los primers, los mis-
mos tendrán propiedades de detección dis-
tintas. Los primers generales o «universa-
les» están diseñados sobre secuencias pre-
sentes en la mayoría de las construcciones
vegetales (promotores, terminadores, genes
marcadores, etc.), por lo tanto, permiten de-
tectar varios eventos (Fig. 7). Los primers
específicos permiten detectar uno o pocos
eventos. Si estos están ubicados sobre la se-
cuencia codificante pueden detectar un mis-
mo tipo de construcción, por ejemplo, los
eventos Bt11 y MON810. Normalmente, con
una construcción se obtienen muchos even-
tos en una misma especie, pero sólo uno al-
canza la fase comercial; sin embargo, a veces
una misma construcción se usa para trans-
formar varias especies y por ello, una misma
construcción se repite en el mercado en va-
rios cultivos. En estos casos, los primers que
amplifican esta construcción detectan varios
eventos. Por ejemplo, con los mismos
primers se puede amplificar el evento GTS 40-
3-2 de soja y el NK603 en maíz (así como tam-
bién los mismos reactivos inmunológicos).
Biotecnología y Mejoramiento Vegetal
Los primers evento-específicos están
diseñados sobre el inserto y sobre la región
genómica adyacente al sitio de integración;
por eso, permiten detectar un solo evento
(de todos los que hayan sido obtenidos con
una determinada construcción).
Todos los eventos aprobados en la Ar-
gentina hasta la fecha (ver: Biotecnología –
CONABIA en www.sagpya.mecon.gov.ar) tie-
nen en su estructura por lo menos una copia
de la secuencia del promotor 35S, sea para
dirigir la transcripción del gen principal o del
gen marcador (Fig. 8 y Tabla 1); por eso, una
reacción de PCR con primers ubicados sobre
el p35S permite detectar la presencia de cual-
quiera de estos eventos.
Existen dos tipos de PCR desde un punto
de vista técnico: la primera versión de PCR,
ahora denominada de Punto Final (End
Point PCR), debido a que el resultado de la
amplificación se obtiene al finalizar la reac-
ción (electroforesis en gel), y la otra versión,
más reciente, la PCR en Tiempo Real (Real
Time PCR), ya que el resultado de la amplifi-
cación se lee ciclo a ciclo (sistema de tubo ce-
rrado).
Desde el punto de vista del objetivo de
la reacción, un ensayo puede hacerse a los
fines de detectar la presencia de OGM o de
un evento en particular (análisis cualitativo)
o para cuantificar su presencia (análisis cuan-
titativo).
La cinética de acumulación del produc-
to de PCR se puede describir en tres etapas,
la primera de lenta acumulación del produc-
to, una segunda en la cual en virtud de la
cantidad de copias acumuladas, el crecimien-
to del producto es exponencial y la tercera
en la cual el sistema se satura y alcanza un
«plateau». (Fig. 9).
Los momentos (ciclos del proceso) en los
cuales se alcanzan las distintas etapas depen-
den del número inicial de copias del seg-
mento de ADN a amplificar en la muestra;
una muestra con mayor número de copias
iniciales alcanzará la fase exponencial antes
que una con menor número. Otra caracterís-
tica del sistema es que la fase estacionaria o
de plateau, determina que las cantidades
de producto totales acumuladas en las dis-
tintas muestras tiendan a igualarse aunque
hayan iniciado con un número distinto de
copias. (Fig. 10).
417
 El resultado de una PCR en Punto Final
(PCR PF) se obtiene una vez que se han cum-
plido todos los ciclos de amplificación progra-
mados y el producto se resuelve por elec-
troforesis en un gel de agarosa. El bromuro
de etidio agregado al gel o después de ha-
berlo corrido se intercala en el ADN y permi-
te visualizar los productos de amplificación
cuando se lo irradia con iluminación UV. De
esta manera se puede determinar la presen-
cia del producto esperado (amplificación
Figura 11: Resultado semicuantitativo por PCR de Punto
Final. Scanning de una foto de trabajo, los trazos
verticales a mano alzada separan las distintas calles del
gel. Las primeras 6 calles corresponden a la Curva de
Calibración con los siguientes puntos, 0.05%, 0.1%, 0.25%.
0.5%. 1% y 5% (genomas GM/genomas totales). Le
siguen dos calles correspondientes al control negativo
(maíz no GM, molido en la misma tanda que las muestras
siguientes). Los pares de calles de 1 a 7 corresponden a
7 muestras con dos repeticiones cada una (dos extracción
de DNA y una PCR de cada extracción), muestras 1, 2 y 3,
GM no detectado con LOD 0.05%; muestras 6 y 7 GM
detectado, con contenido estimado inferior al 0.1%;
muestras 4 y 5 debe repetirse la PCR y/o extracción hasta
igualar los resultados entre las repeticiones
(generalmente esto ocurre con muestras con bajo
contenido de GMO por un tema de muestreo de la harina
y del DNA).
específica), identificado por su peso
molecular (en pares de bases), relativo a un
marcador de peso conocido. También se pue-
de observar la presencia de productos
inespecíficos si los hubiera.
Análisis cualitativo por PCR PF
La PCR en Punto Final es adecuada para
análisis cualitativos, es decir, donde el re-
sultado se medirá como amplificación positi-
va (OGM detectado) o como negativa, (OGM
no detectado), considerando la sensibilidad
lograda , límite de detección o LOD.
Optimizando todos los parámetros de la
reacción: ADN de muy buena calidad, primers
bien diseñados, reactivos de máxima calidad
y con un programa y un equipo adecuados,
se puede lograr un límite de detección ubi-
418 TOZZINI, Alejandro C.
cado entre el 0.01 y 0.05% de genomas GM.
Esto equivale a detectar de 5 a 25 copias de
transgen por reacción según el tamaño del
genoma de la especie y de la cantidad de
ADN usado en cada reacción. Programando
un alto número de ciclos (45 a 50 ciclos) se
permite que aún las muestras con un bajo
Figura 12: PCR competitiva. Co-amplificación de las
diluciones crecientes del estandar y decrecientes del DNA
de la muestra. En el punto de equivalencia se igualan las
masas de los productos de amplificación
número de copias iniciales alcancen la fase
exponencial y acumulen una masa visible de
producto, a costa de saturar las muestras con
contenidos mayores. En estos ensayos, ade-
más de los controles negativos compues-
tos por una muestra con ADN de material
no GM y el control sin ADN (sólo agua), se
debe incluir como controles positivos al
menos dos puntos de concentración conoci-
da de GM. Una de éstas debe tener un con-
tenido de GM igual al límite de detección
deseado de forma tal de verificar que el LOD
se ha alcanzado y otro superior como segun-
do control en caso de que la eficiencia del
proceso no haya sido óptima. Estos valores
podrían ser 0.05% (LOD) y 0.20%. Es muy con-
veniente que estos controles positivos se ini-
cien en el proceso de análisis a partir del
momento de la purificación del ADN. De esta
manera, se está controlando en ellos la cali-
dad del ADN obtenido, además de la eficien-
cia del proceso de PCR. El análisis cualitati-
vo es también denominado screening test,
ya que permite hacer un primer análisis a un
determinado número de muestras y luego
derivar a PCR cuantitativa aquellas que resul-
taron positivas.
Análisis semicuantitativo por PCR PF
En un análisis en PF puede obtenerse una
estimación del contenido de OGM en un
rango dinámico acotado. Un resultado po-

Figura 13: Esquema de la estructura optica del ABI prism 7700 (PE
Biosystem). Este sencillo esquema muestra como a partir de uan
fuente de luz (laser en este caso) se direcciona la luz hasta cada
muestra y la emisión de retorno es dirigido hacia una cámara. Un
detalle de equipos como este es que la tapa caliente que apoya sobre
las muestras debe ser transparente. Fuente PE Biosystems
sitivo se expresa como detección de OGM y
un contenido estimado por una curva de
calibración con valores próximos al LOD del
ensayo. Para esto hay que estandarizar muy
bien las condiciones intralaboratorio, espe-
cialmente cantidad y calidad de ADN y canti-
dad de ciclos de amplificación (teniendo en
cuenta que alcanzado el plateau de la reac-
ción, la cantidad de ADN acumulado tiende
a igualarse entre muestras con distintas con-
centraciones de OGM). El resultado positivo
se expresa como: OGM detectado con un
LOD de ensayo X; la cantidad de producto
generado se ubica entre las señales produ-
cidas por los estándares A y B (controles
positivos). Por ej.: amplificación de promo-
tor 35S positiva con un LOD = 0.05%; la canti-
dad de producto amplificado se ubica entre
los generados por los estándares de 0.1 y
0.5%. Cuando este ensayo se realiza con una
curva de calibración puede verse, por ejem-
plo, una señal débil en los estándares de 0.05
y 0.1%, una señal media en 0.25 y 0.5% y fuer-
te en 1 y 5% (Fig. 11).
Análisis cuantitativos por PCR PF, PCR
competitiva
Una de las estrategias desarrolladas para
cuantificar por PCR de Punto Final fue la PCR
competitiva (Hardegger y col., 1999) y está
basada en la co-amplificación (en la misma
reacción y a partir del mismo par de primers)
de un estándar interno de concentración
conocida. Cuando la señal de amplificación
generada a partir de la muestra y a partir del
estándar interno son iguales, se asume que
Biotecnología y Mejoramiento Vegetal
ambos procesos partieron de igual
número de copias iniciales del ADN
blanco. El estándar interno se cons-
truye clonando en un plásmido el
fragmento a amplificar y producién-
dole una inserción o deleción de ma-
nera tal que cuando se resuelvan en
un gel los productos de amplifica-
ción a partir de la muestra y del
estándar, se distingan por sus pe-
sos moleculares. Para lograr una re-
acción donde se igualen los produc-
tos de amplificación (muestra: con-
trol interno) se arma una serie de
diluciones crecientes del estándar y
se combina con una serie de dilu-
ciones decreciente de la muestra
(Fig. 12.).
Esta estrategia, además de laboriosa
(para obtener una reacción donde se igua-
len los productos de amplificación), requiere
del desarrollo del control interno, pero se
puede realizar en un laboratorio de PCR tra-
dicional.
PCR en Tiempo Real (Real Time PCR)
En un sistema de PCR en Tiempo Real, el
proceso de amplificación se va siguiendo
ciclo a ciclo, observando el incremento de la
masa de ADN presente en cada reacción. Esto
se logra gracias a un termociclador que tiene
adosado un sistema óptico que emite un haz
de luz sobre cada muestra y registra la emi-
sión de fluorescencia a partir de las misma y
de uno o más reactivos fluorescentes agre-
gados a la reacción y que emiten luz de ma-
nera proporcional a la cantidad de ADN pre-
sente (Fig. 13). La ventaja de este sistema es
que permite detectar en qué momento cada
reacción alcanza su fase exponencial de am-
plificación (Fig. 14, ver pág.6), y ésta
correlaciona con la cantidad de copias del
ADN blanco que había inicialmente en la
muestra.
Para poder cuantificar se necesita incluir
en el experimento una curva de calibración
con la cual comparar las muestras incógnitas.
A partir de esta curva, se determinará en qué
ciclo alcanza la fase exponencial cada concen-
tración de OGM. Una muestra con un 10%
de OGM alcanzará la fase exponencial antes
que una muestra con un 1%; y ésta antes que
una con 0.1%. La cuantificación del conte-
nido de OGM se obtiene comparativamen-
419

te con la curva de calibración usada y en
sus mismas unidades (número de copias,
porcentual, etc) (Fig. 10 y Fig. 15).
Una de estas expresiones relativas se lo-
gra cuantificando genomas modificados, res-
pecto de los genomas totales de la especie.
Para determinar el número de genomas
modificados se mide el número de copias del
segmento de ADN transgénico (una copia
por genoma), mientras que para medir el
número de copias de genoma de la especie
se cuantifica el número de copias de un gen
endógeno, de copia única y propia de la
especie, esto siempre dentro de la misma
muestra de ADN. Por lo tanto, en este ensa-
yo se necesita utilizar dos curvas de calibra-
ción, una para el número de copias del
transgen y otra para la cuantificación del gen
endógeno, para lo cual se utilizan plásmidos
conteniendo las secuencias en cuestión.
Cuando la cuantificación de una muestra se
realiza por evento, la suma de los porcentua-
les de cada evento determina el contenido
total de la muestra.
Para granos, la curva de calibración pue-
de prepararse mezclando distintas propor-
ciones de granos modificados con no mo-
dificados. De esta manera, la extracción de
ADN a partir de estas mezclas ya tiene una
proporción fija y conocida de genomas mo-
dificados/no modificados. Si en la reacción de
PCR se utiliza la misma cantidad y calidad de
ADN en los estándares y en las muestras, se
puede hacer la comparación directa entre
éstos para realizar la cuan-tificación.
Como en todo análisis cuantitativo, el
material de referencia es de suma impor-
tancia. Para maíz y soja existen preparados
(harinas) comerciales con distintas concentra-
ciones de GM (de 0 a 2%). Este material de
420 TOZZINI, Alejandro C.
Figura 15: Ajuste
matemático de los
resultados de las
muestras que
integran la curva de
calibración y a partir
del cual se calculará
la concentración de
GM en las muestras.
Los puntos incluidos
en esta curva son
0.05, 0.1, 0.25. 0.5,1 y
5% (Genomas/
genomas totales).
referencia, es preparado por el IRMM de Eu-
ropa (Institute for Reference Material and
Measurements, www.irmm.-jrc.be ) y por su
costo se lo usa generalmente para calibrar
los materiales preparados en el laboratorio;
sin embargo, es muy difícil lograr la estabili-
dad y reproducibilidad de los valores entre
lotes e incluso algunos productos se han
discontinuado.
En materia de plásmidos, una firma japo-
nesa comercializa uno que contiene 8 secuen-
cias que están presentes en un gran número
de eventos comerciales (www.fasmac.co.jp).
Al tema de los materiales de referencia
se le agrega el de las unidades de medición.
En la mayoría de los contratos comerciales
de granos en los cuales se estipula un deter-
minado contenido de OGM, este contenido
se expresa de manera porcentual pero sin
especificar las unidades. Lo mismo ocurre
dentro de la legislación europea de etique-
tado (EC 49/2000) y su reciente modificación
hacia un límite de 0.9% para cada especie in-
grediente (EC 1829/2003), donde tampoco
se especifica las unidades de esta medición
relativa. En general se asume que se trata
de una medición relativa de peso en peso.
Sin embargo, ninguno de los métodos ana-
líticos cuantitativos, ELISA cuantitativo o
PCR cuantitativa, puede medir estas unida-
des e incluso cuantifican elementos distin-
tos entre ellos. Si en una muestra de granos
se conoce el número de granos GM, se pue-
de calcular con precisión el contenido porcen-
tual en peso. Sin embargo, conocer el núme-
ro de granos GM a partir de un contenido
de genomas modificados medidos por la pre-
sencia del promotor 35S, implica conocer in-
formación precisa de la muestra o suponer-
la. Por ejemplo, en una especie diploide, si
el evento está en estado homocigota, ten-
dremos el doble de copias del p35S que si
está en estado de heterocigosis (lo más pro-
bable es que en una muestra tengamos pro-
porciones distintas de ambos estados). Ade-
más, en los granos heterocigotas, el tejido
triploide del endos-perma genera diferen-
cias en la densidad del transgen por uni-
dad de masa; si el transgen llegó al grano
por la gameta masculina (polen), el
endosperma tendrá una relación modificado:
no modificado de 1:2, mientras que si ingre-
só por la gameta femenina, la relación será
2:1, debido a la contribución genética des-
igual de ambos padres en el endosperma 3n.
También hay que conocer los eventos
involucrados, ya que algunos tienen una co-
pia del p35S por genoma, mientras que otros
tienen dos, tres y hasta 5 copias (Tabla 1).
Cuando se está cuantificando la contamina-
ción accidental con GM de un lote de gra-
nos, es poco probable que se tenga la infor-
mación precisa de la misma y su origen.
¿Cómo detectar OGM en el futuro?
En un futuro cercano serán muchos los
eventos aprobados y liberados en el mun-
do, y las secuencias hoy presentes en la ma-
yoría de los eventos, como son el promotor
35S y el terminador NOS, ya no serán comu-
nes. El desarrollo de nuevos promotores es-
pecíficos de la especie y la función hará que
los distintos eventos prácticamente no ten-
gan ninguna secuencia en común. Con la tec-
nología actual, esto implica que deberíamos
realizar una reacción de PCR por cada even-
to posible para poder finalmente decir que
la muestra no contiene (con un límite de de-
tección dado) una determinada lista de even-
tos correspondiente a todos los que hayan
sido ensayados. Hoy, un ensayo de PCR di-
rigido al P35S y cuyo resultado sea negati-
vo permite descartar la presencia de más
del 90% de los eventos del mercado mun-
dial.
El consumidor, especialmente el europeo,
ha solicitado la eliminación en las plantas
transgénicas de los genes de resistencia a
antibióticos. Estos son usados como marca-
dores de selección en los procesos de trans-
formación y regeneración vegetal. Estas se-
cuencias también son comunes a muchos
Biotecnología y Mejoramiento Vegetal
eventos y por lo tanto útiles a la hora de
detectar la presencia de modificaciones
genéticas, pero estos genes ya no estarán
presentes en los nuevos materiales GM.
Por otro lado, los próximos desarrollos
planean agregar o modificar varias caracte-
rísticas en el mismo genotipo o la introduc-
ción de pasos metabólicos complejos. Esto
implicará la introducción de varios genes dis-
tintos en transformaciones sucesivas. Las téc-
nicas actuales de integración al azar en el
genoma tienen una muy baja eficiencia de
producción. Por eso, para estos desarrollos
se requerirá el uso de sistemas de integra-
ción al genoma que sean dirigidos a sitios
específicos del mismo (sistemas de integra-
ción por recombinación). Unos pocos siste-
mas se presentan como promisorios para su
uso, entre ellos el sistema Cre/Lox, (Srivastava
V, Ow DW, 2001). Por lo tanto es posible que
las secuencias requeridas para el funciona-
miento de estos sistemas sean, en el futuro,
blanco para la deteccción de OGM.
En diversos ámbitos se está discutiendo
la posibilidad de introducir secuencias no
codificantes en el genoma de las plantas jun-
to con los genes de interés de una modifica-
ción genética, para generar blancos de de-
tección universales frente a la diversidad de
eventos que habrá en el futuro.
Frente a esta perspectiva de diversidad
de modificación genética y tan heterogénea
mundialmente, la nueva tecnología de los
microchips, microarrays o micromatrices,
podría permitir detectar y cuantificar en un
solo ensayo la presencia de cientos o miles
de secuencias. A grandes rasgos, un
microchip es un pequeño soporte sólido del
tamaño de un cubreobjetos para microscopia
óptica, en el cual se han fijado puntos orde-
nados y microscópicos de secuencias de sim-
ple cadena conocidas.
Estas secuencias tienen la capacidad de
hibridar con su ADN complementario, y si
éste está marcado con un fluoróforo, el pun-
to de la micromatriz quedará marcado. Lue-
go de la hibridación con la muestra de ADN
marcado, un aparato de barrido especial rea-
liza la lectura punto por punto, identifican-
do los puntos marcados y por lo tanto las
secuencias que están presentes en la mues-
tra bajo análisis (Fig. 16, ver pág.5).
Desde el año 2001 una comisión europea
421
de investigación está encargada de desarro-
llar el «GMO chip», un chip de baja densi-
dad (1000 puntos /cm2) que permita detec-
tar la presencia de distintos OGM simultánea-
mente (ver: www.gmochips.org).
Segregación, trazabilidad e identidad
preservada para GMO
El objetivo de un programa de traza-
bilidad es generar un producto de identidad
preservada, esto es un producto del cual se
puede conocer su origen y los procesos a que
fue sometido hasta alcanzar el producto fi-
nal en destino. La identidad preservada se
aplica para obtener un producto identifica-
do por su origen geográfico, y/o por su con-
tenido y/o por su método de producción.
Esto implica el trabajo de auditores, ensayos
de laboratorio y documentación a lo largo
de todo el proceso. La trazabilidad está aso-
ciada a la reastreabilidad (identificar el ori-
gen de los productos) y a la segregación,
para evitar las mezclas y para descartar todo
aquello que no cumpla con lo requerido.
Muchas veces se confunden los términos
trazabilidad y segregación y no se refieren a
los mismos conceptos. Segregación implica
mantener separado un producto de otros,
mientras que trazabilidad significa conocer su
origen y no forzosamente separación. La
trazabilidad de un producto puede mostrar
que en sus composición hay ingredientes di-
ferentes, por ejemplo derivados de OGMs.
Lo que suele ocurrir es que se utiliza a la
trazabilidad como una herramienta para
asegurar la segregación e identidad de un
producto.
Para que un programa de trazabilidad se
justifique se necesita de la demanda de un
sector dispuesto a pagar un precio mayor al
normal por una determinada característica de
calidad.
En el caso de los granos, existen progra-
mas para asegurar calidad y origen y recien-
temente se le ha acoplado un nuevo atribu-
to que es el contenido de OGM. Los niveles
requeridos varían de acuerdo al destino del
producto. Actualmente éstos, van de menos
del 0.1% al 5% en algunos casos. En función
de este requerimiento, se arma un progra-
ma de trazabilidad y/o segregación que re-
querirá de mayores controles cuanto menor
422 TOZZINI, Alejandro C.
sea el nivel admitido de OGM.
Cuanto menor sea el nivel exigido, ma-
yor será el costo del producto. Esto no sólo
es por los mayores controles en todo el pro-
ceso sino también por la mayor cantidad de
mercadería que quedará fuera de la toleran-
cia y que se descartará del programa.
El primer paso es identificar los puntos
críticos del proceso productivo en los cuales
la mercadería pueda sufrir una mezcla acci-
dental que pueda incrementar los niveles de
OGM por encima del máximo nivel requeri-
do.
En granos, los programas de trazabilidad
no se diseñan para una sola característica.
Además del contenido de OGM, también se
analiza la pureza del tipo de grano, el conte-
nido de aflatoxinas, ausencia de materiales
extraños y contaminantes, etcétera.
El desarrollo de un programa de
trazabilidad implica la participación y ca-
pacitación de numerosos agentes; entre
ellos el productor agropecuario, los trans-
portistas, los acopiadores y, por supuesto,
todo el personal que ejecuta y audita el
programa.
El primer paso del programa, y el más
importante, es el control y selección de los
lotes de semillas. El contenido de OGM en
la semilla determinará el mínimo conteni-
do del producto final, ya que por lo general
las mezclas accidentales en el proceso ten-
derán a elevar el contenido de OGM. Por
esto, el contenido de OGM en la semilla debe
ser holgadamente inferior el máximo nivel
admitido al final del proceso. En programas
avanzados, la auditoría se inicia dentro del
semillero multiplicador, controlando las líneas
parentales que formarán el híbrido.
Controlada la semilla, se reparte entre los
distintos productores que participan del pro-
grama, quedando registrada la identidad de
los lotes y la superficie sembrada de los mis-
mos (algunos programas incluyen los datos
de información satelital, GPS, para la ubica-
ción y el seguimiento de los lotes).
Una segunda instancia de control es la
toma de muestra en precosecha, con el
objetivo de corroborar que se utilizó la se-
milla indicada en el lote asignado y que no
hubo mezclas con semillas de otras fuentes.
También en este momento se toman mues-
tras de hojas o granos de lotes linderos para
determinar la presencia o no de material
genéticamente modificado de la misma es-
pecie que pueda mezclarse con el lote del
programa por polinización cruzada.
En caso de que el lote lindero resulte
positivo se descartarán del programa las
hileras del lote más próximas al lote linde-
ro para descartar los granos que pudieran
haber recibido polen del lote GM positivo.
Las cosechadoras y todos los vehículos de
transporte de los granos (carros y camiones)
deben ser limpiados y controlados de restos
de granos de tareas anteriores
En el momento de la cosecha los diferen-
tes camiones que ingresan en el acopio con
los granos del programa son controlados
antes de la descarga mediante ensayos
inmunológicos rápidos (strips reactivos)
para detectar a tiempo posibles errores de
destino o identificación.
Una muestra de granos del conjunto de
camiones (cada 20 a 30 camiones) se envía al
laboratorio para su análisis por PCR para te-
ner un análisis más sensible y cuantitativo.
Así se van conformando conjuntos con
material identificado de mayor cantidad (si-
los, celdas) hasta lograr el volumen requeri-
do. Del último continente (celda o bode-
ga) se realiza un nuevo ensayo de PCR que
confirma el cumplimiento con el nivel de OGM
solicitado. Sin embargo, no sólo tiene valor
el último resultado obtenido de la mercade-
ría sino todos los procesos para asegurar y
controlar la calidad realizados a lo largo del
proceso de producción con segregación y
trazabilidad. Por esto, el producto se entre-
ga con una carpeta que contiene toda la in-
formación generada por el programa de
trazabilidad y que valida el último resultado
analítico obtenido.
Conclusiones
Combinando estratégicamente las distin-
tas técnicas para detectar OGM, en progra-
mas sencillos o complejos de trazabilidad, es
posible producir granos con distintos conte-
nidos de OGM, segregados del resto de la
producción de commodities (a granel). Así
es posible abastecer al sector exportador, a
los productores de especialidades
(speciailties), para quienes es vital que sus
productos estén diferenciados e identifica-
Biotecnología y Mejoramiento Vegetal
dos, o a la industria en general que requiera
de un producto diferenciado; mientras al
mismo tiempo se producen commodities de
precio no diferenciado, aprovechando las
ventajas económicas y técnicas de la
biotecnología. La trazabilidad y segregación
por contenido de OGM es sólo una de las
muchas características que se utilizan para
definir productos, y más allá del caso de los
productos de la biotecnología moderna en
el contexto actual, uno de los desafios de la
producción argentina de granos y alimentos
parece ser la de poder segregar e identificar
la mayor cantidad de productos dentro de
sus commodities.
Finalmente hay que mencionar que los
materiales genéticamente modificados que
no mantengan una equivalencia sustancial
con los materiales tradicionales, por defini-
ción, van a ser segregados e identificados
de acuerdo a la nueva característica de valor
(nutricional, por ejemplo) y serán producidos
dentro de distintos tipos de programas con
segregación positiva y de etiquetado de pro-
ducto para asegurar su pureza, calidad y su
valor de uso diferencial.
Lecturas recomendadas
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gipsa/biotech/sample1.htm http://www.usda.gov./
gipsa/biotech/sample2.htm