UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA ING.

FERMENTACION Y ENZIMAS
FACULTAD DE INGENIERIA X CICLO – SEMESTRE 2011-0
EAP ING. AGROINDUSTRIAL Ing. César Moreno Rojo

PRACTICA 1. PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO Y ESTERILIZACION.

Objetivos:
1  Aprender a preparar medios de cultivo para bacterias y hongos.
2  Comprender la importancia de la esterilización en el área de la fermentacion

3  Conocer diferentes materiales y procedimientos para trabajar en condiciones de

esterilidad.

Material:
3 matraz Erlenmeyer de
500 ml
1 espátula
1 balanza digital
1 parrilla de agitación
Agua destilada
Agar-Mannitol Salt
Autoclave
1 asas bacteriológicas
2 agujas de disección
2 pinzas de disección
2 bisturís
2 tijeras de disección
1 caja petri
2 mecheros Bunsen
3 vaso de pp. de 250 ml
1 jeringa
10 cajas petri estériles
Parafilm y papel aluminio
Guantes de látex, cubrebocas, gorro quirúrgico, lienzos limpios
Marcador indeleble, gasa, algodón, alcohol, cloruro de benzalconio y
cloro casero al 10%
Papel de estraza y aluminio
2 lienzo de algodón (blancos)
Cinta testigo
Caja de cerillos o encendedor
Bolsas medianas de polipapel
Detergente y fibra

Metodología:
1 1. Pesa la cantidad necesaria de los medios deshidratados para preparar 350 ml de medio
de cultivo.
2 2. Agrega 200 ml de agua destilada en un matraz de 500 ml, agrega el medio deshidratado
y agrega más agua destilada hasta ajustar el volumen de 350 ml.
3 3. Coloca el matraz en la parrilla de agitación y cuando el medio tome una apariencia
cristalina retíralo de la parrilla.
4 4. Tapa el matraz con el tapón previamente elaborado con algodón y gasa.
5 5. Esteriliza el medio de cultivo en la autoclave a 121° C durante 20 min.

1 6. Mientras se prepara el medio de cultivo dos integrantes del equipo harán lo siguiente.
Lavar el siguiente material con agua jabonosa y enjuágalo con agua corriente: 2 asas
bacteriológicas, 2 agujas, 2 pinzas, 2 tijeras y las cajas petri. Coloca sobre la mesa
papel de estraza y sobre este el material que lavaste para que se escurra.
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2 9. Envuelve el material en papel estraza o aluminio, debes envolver cada material de
manera individual, colocarle cinta testigo y rotularlo. Envuelve también uno de los
lienzos de algodón.
3 10. Coloca todos los materiales envueltos en dos bolsas de polipapel (encimadas) y
etiquétalo con la fecha, el grupo y el número de equipo.
4 11. Coloca todo el material en la autoclave y esteriliza durante 1 hora. a 160º C – 170ºC
5 12. Una vez estéril el material se guarda hasta que sea utilizado.

Cuestionario:
1. ¿Qué es un medio de cultivo?
2. ¿Qué debe contener un medio de cultivo para permitir el desarrollo y crecimiento de los
microorganismos?
3. ¿Qué sustancia permite que los medios líquidos solidifiquen? ¿Cuáles son sus características?
4. ¿Por qué es necesario esterilizar a los medios de cultivo?
5. ¿Cuál es la finalidad de agregarle un antibiótico al medio de cultivo para hongos?
6. Investiga otros dos medios de cultivo para bacterias y para hongos.
7. ¿Qué es esterilización o esterilizar?
8. ¿Por qué es necesario trabajar en una zona o área estéril y con material estéril?
9.- Qué finalidad tiene el empacado antes de la esterilización?
10.- Cómo actúa la esterilización por calor seco en los microorganismos?
11. ¿Por qué es necesario encender la llama del mechero 10 min. antes de iniciar el trabajo?
12. Explica como se esteriliza el siguiente material:
1 a. medios de cultivo
2 b. cristalería
3 c. asa bacteriológica
4 d. mesa de trabajo

13. ¿Qué material se esteriliza con:

1 a. cloruro de benzalconio
2 b. calor seco
3 c. calor húmedo
4 d. luz ultravioleta
14. ¿Cómo se esteriliza el material de desecho? ¿Por qué se esteriliza dicho material?